細(xì)胞培養(yǎng)常見問題及其解決(編輯修改稿)
2025-07-04 21:41 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 先，確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母，把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開，用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細(xì)胞系有毒性，因而，做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時(shí)尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟。 、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞，稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。 ，或幾個(gè)小培養(yǎng)瓶中。在一個(gè)濃度梯度范圍內(nèi)，把選擇抗生素加入到每一個(gè)孔中。例如，兩性霉素B推薦下列濃度，，，, mg/ml。 ，如脫落，出現(xiàn)空泡，匯合度下降和變圓。 ，使用低于毒性濃度2～3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2～3代。 。 。 ～6代，確定污染是否以已被消除。 推薦使用MP公司的雙抗或三抗：SKUPack SizeNameDescription091674049100 mL100X PenStrepAmphotericin 三抗：青霉素鏈霉素兩性霉素B 091670249100 mL100X PenicillinStreptomycin雙抗：青霉素鏈霉素(mycoplasma) 污染的細(xì)胞， 是否能以肉眼觀察出異狀？ 不能。除極有經(jīng)驗(yàn)之專家外，大多數(shù)遭受支原體污染的細(xì)胞株， 無法以其外觀分辨之。 ？ 支原體污染幾乎可影響所有細(xì)胞之生長參數(shù)， 代謝及研究之任一數(shù)據(jù)。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前，必須確認(rèn)細(xì)胞為mycoplasmafree，實(shí)驗(yàn)結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義。 23. 偵測出細(xì)胞株有支原體污染時(shí)， 該如何處理？ 可以選用MP Biomedicals公司的MRA, 181。g/ml 的工作濃度下通過抑制支原體的DNA螺旋酶來殺死支原體；；貨號產(chǎn)品規(guī)格093050044支原體去除試劑MRA5mL24. CO2 培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔？ 定期(至少每兩周一次) 以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之,必要時(shí)加入MP公司的雙抗。 176。C 冰箱中， 顏色會(huì)偏暗紅色， 且pH值會(huì)越來越偏堿性？ 培養(yǎng)基保存于4 176。C 冰箱中， 培養(yǎng)基內(nèi)之CO2 會(huì)逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑(通常為phenol red) 的顏色也會(huì)隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果， 將造成細(xì)胞生長停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時(shí)， 可以通入無菌過濾之CO2， 以調(diào)整pH 值。 26. 各種細(xì)胞培養(yǎng)用的dish，flask是否均相同？ 不同，可以參考文獻(xiàn)選擇。 27. 購買之細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后，為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形？ 研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少， 大都是因?yàn)殡x心過程操作上的失誤， 造成細(xì)胞的物理性損傷， 以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心， 應(yīng)待細(xì)胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可。 ？ 研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳， 常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后， 加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–80 176。C 太久。
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