1-2dna重組技術(shù)的基本操作程序(編輯修改稿)
2025-01-26 01:25 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 制的比較DNA復(fù)制 PCR技術(shù)場(chǎng)所原理?xiàng)l件解旋方式酶特點(diǎn)結(jié)果堿基互補(bǔ)配對(duì)原則 堿基互補(bǔ)配對(duì)原則四種脫氧核苷酸、模板、酶、 ATP四種脫氧核苷酸、模板、酶、 引物DNA在高溫下解旋解旋酶催化解旋半保留復(fù)制、邊解旋變復(fù)制半保留復(fù)制、全解旋再?gòu)?fù)制體外復(fù)制主要在細(xì)胞核內(nèi)大量的 DNA片段形成整個(gè) DNA分子熱穩(wěn)定的 DNA聚合酶細(xì)胞內(nèi)的解旋酶、 DNA聚合酶等3. 人工合成法在基因較小，核苷酸序列已知的情況下，可以利用 DNA合成儀用化學(xué)方法人工合成蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因化學(xué)合成推測(cè)推測(cè)思考： 化學(xué)法合成的目的基因含 內(nèi)含子、啟動(dòng)子和終止子嗎？不含課堂小結(jié)目的基因的獲取從基因文庫(kù)中獲取利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增人工合成種類基因組文庫(kù)部分基因文庫(kù)二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建 ——基因工程的核心1 目的：使目的基因在受體細(xì)胞中 穩(wěn)定存在 ，并且可以 遺傳 給下一代，同時(shí)使目的基因能夠 表達(dá)和發(fā)揮作用 。2 基因表達(dá)載體 的組成：復(fù)制原點(diǎn) +啟動(dòng)子 +目的基因 +終止子 +標(biāo)記基因表達(dá)載體啟動(dòng)子： 位于基因的首端的一段特殊的 DNA片斷，它是 RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位 ，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出 mRNA， 最終獲得蛋白質(zhì)。終止子： 位于基因的尾端的一段特殊的 DNA片斷， 能終止 mRNA的轉(zhuǎn)錄。標(biāo)記基因 的作用是為了 鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)?；虮磉_(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程質(zhì)粒 DNA分子限制酶處理兩個(gè)切口獲得目的基因DNA連接酶重組 DNA分子（重組質(zhì)粒）同一種一個(gè)切口兩個(gè)黏性末端注意：① 載體 與 表達(dá)載體 的區(qū)別：二者都有標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)兩部分 DNA片段。表達(dá)載體在載體基礎(chǔ)上增加了目的基因、啟動(dòng)子、終止子 三部分結(jié)構(gòu)② 用到的工具酶： 限制酶和 DNA連接酶，兩種酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵③ 啟動(dòng)子、終止子 對(duì)于目的基因表達(dá)必不可少④ 目的基因不能單獨(dú)進(jìn)入受體細(xì)胞， 必需以表達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去。 三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞1 轉(zhuǎn)化： 目的基因 進(jìn)入 受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體 細(xì)胞內(nèi)維持 穩(wěn)定 和 表達(dá) 的過(guò)程 。3 目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的原理： 借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞的途徑。常用的受體細(xì)胞： 大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、 酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞等。2目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法（ 1）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 ① 農(nóng)桿菌特點(diǎn)： 易感染雙子葉植物和裸子植物，對(duì)大多數(shù)單子葉植物沒有感染能力。 ② 原理： Ti質(zhì)
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