1dna重組技術(shù)的基本工具(王凱輝)(編輯修改稿)
2025-01-26 02:04 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 制酶切割 DNA后形成的末端 —— 黏性末端、平末端是如何形成的？ 思考： ? 什么叫黏性末端？ 當(dāng)限制酶 從識(shí)別序列的中心軸線兩側(cè)切開時(shí)， 被限制酶切開的 DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個(gè) 伸出的核苷酸 ，他們之間正好 互補(bǔ)配對 ，這樣的切口叫 黏性末端 。 什么叫平末端？ 當(dāng)限制酶 從識(shí)別序列的中心軸線處切開時(shí)， 切開的 DNA兩條單鏈的切口，是平整的，這樣的切口叫 平末端 。 Ｅ coRI限制酶 SmaI限制酶 識(shí)別序列 －ＣＣＣＧＧＧ－ 切割位點(diǎn) Ｇ和Ａ之間 Ｃ和Ｇ之間 未端類型 平末端 黏性末端 －ＣＴＴＡＡＧ－ －ＧＧＧＣＣＣ－ －ＧＡＡＴＴＣ－ 切割后的形式： 2種末端 注： ，不是一種酶。 DNA分子上的某種特定核苷酸序列，限制酶所識(shí)別的序列，無論是 6個(gè)堿基還是 4個(gè)堿基，都可以找到一條 中心軸線 ，中軸線兩側(cè)的雙鏈 DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ，重復(fù)排列的。 5個(gè)堿基 ,則中軸線在中間的堿基對上 ,除了中軸線外 ,兩側(cè)的雙鏈 DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ 黏性末端 平末端 個(gè)切口？可產(chǎn)生幾個(gè)黏性 (平 )末端？ 要切兩個(gè)切口，產(chǎn)生四個(gè)黏性 (平 )末端。 ? DNA用同一種限制酶來切割，會(huì)怎樣呢？ 會(huì)產(chǎn)生 相同的黏性 (平 )末端 ，然后讓兩者的黏性 (平 )末端 黏合 起來，就似乎可以合成重組的 DNA分子了。 思考 ? (平 )末端 ? 如果直接用 DNA連接酶連接會(huì)出現(xiàn)什么情形 ? 兩個(gè)黏性 (平 )末端 。會(huì)出現(xiàn)自身環(huán)化現(xiàn)象 ? 分別用不同的限制酶切割兩個(gè)部位 ,這樣就不會(huì) 出現(xiàn)相同的黏性 (平 )末端 . 思考與探究 為什么限制酶不剪切細(xì)菌本身的 DNA？ 通過長期的進(jìn)化，細(xì)菌中含有某種限制酶的細(xì)胞，其 DNA分子中或者 不具備 這種限制酶的 識(shí)別切割序列 ，或者通過甲基化酶 將甲基轉(zhuǎn)移 到所 識(shí)別序列 的堿基上，使 限制酶不能將其切開 。這樣，盡管細(xì)菌中含有某種限制酶也不會(huì)使自身的 DNA被切斷，并且可以防止外源 DNA的入侵。 DNA聚合酶 DNA連接酶 區(qū)別 1 區(qū)別 2 相同點(diǎn) ? DNA連接酶與 DNA聚合酶是一回事嗎
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