1dna重組技術的基本工具(王凱輝)(編輯修改稿)
2025-01-26 02:04 本頁面
【文章內容簡介】 制酶切割 DNA后形成的末端 —— 黏性末端、平末端是如何形成的？ 思考： ? 什么叫黏性末端？ 當限制酶 從識別序列的中心軸線兩側切開時， 被限制酶切開的 DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個 伸出的核苷酸 ，他們之間正好 互補配對 ，這樣的切口叫 黏性末端 。 什么叫平末端？ 當限制酶 從識別序列的中心軸線處切開時， 切開的 DNA兩條單鏈的切口，是平整的，這樣的切口叫 平末端 。 Ｅ coRI限制酶 SmaI限制酶 識別序列 －ＣＣＣＧＧＧ－ 切割位點 Ｇ和Ａ之間 Ｃ和Ｇ之間 未端類型 平末端 黏性末端 －ＣＴＴＡＡＧ－ －ＧＧＧＣＣＣ－ －ＧＡＡＴＴＣ－ 切割后的形式： 2種末端 注： ，不是一種酶。 DNA分子上的某種特定核苷酸序列，限制酶所識別的序列，無論是 6個堿基還是 4個堿基，都可以找到一條 中心軸線 ，中軸線兩側的雙鏈 DNA上的堿基是反向對稱，重復排列的。 5個堿基 ,則中軸線在中間的堿基對上 ,除了中軸線外 ,兩側的雙鏈 DNA上的堿基是反向對稱 黏性末端 平末端 個切口？可產(chǎn)生幾個黏性 (平 )末端？ 要切兩個切口，產(chǎn)生四個黏性 (平 )末端。 ? DNA用同一種限制酶來切割，會怎樣呢？ 會產(chǎn)生 相同的黏性 (平 )末端 ，然后讓兩者的黏性 (平 )末端 黏合 起來，就似乎可以合成重組的 DNA分子了。 思考 ? (平 )末端 ? 如果直接用 DNA連接酶連接會出現(xiàn)什么情形 ? 兩個黏性 (平 )末端 。會出現(xiàn)自身環(huán)化現(xiàn)象 ? 分別用不同的限制酶切割兩個部位 ,這樣就不會 出現(xiàn)相同的黏性 (平 )末端 . 思考與探究 為什么限制酶不剪切細菌本身的 DNA？ 通過長期的進化，細菌中含有某種限制酶的細胞，其 DNA分子中或者 不具備 這種限制酶的 識別切割序列 ，或者通過甲基化酶 將甲基轉移 到所 識別序列 的堿基上，使 限制酶不能將其切開 。這樣，盡管細菌中含有某種限制酶也不會使自身的 DNA被切斷，并且可以防止外源 DNA的入侵。 DNA聚合酶 DNA連接酶 區(qū)別 1 區(qū)別 2 相同點 ? DNA連接酶與 DNA聚合酶是一回事嗎
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