11dna重組技術(shù)基本工具(編輯修改稿)
2025-03-22 11:04 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 是細(xì)菌的一種 防御性工具 ，當(dāng)外源DNA侵入時，會利用限制酶 將外源 DNA切割掉，以保證自身的安全。所以， 限制酶在原核生物中主要起到切割外源 DNA、 使之失效 ，從而達(dá)到 保護(hù)自身 的目的。 為什么限制酶不剪切細(xì)菌本身的 DNA？ 通過長期的進(jìn)化，細(xì)菌中含有某種限制酶的細(xì)胞，其 DNA分子中 或者 不具備 這種限制酶的 識別切割序列 ， 或者 通過甲基化酶 將甲基轉(zhuǎn)移 到所 識別序列 的堿基上，使限制酶不能將其切開 。這樣，盡管細(xì)菌中含有某種限制酶也不會使自身的 DNA被切斷，并且可以防止外源 DNA的入侵。 尋根問底 要想獲得某個目的基因必須要用限制酶切幾個切口？可產(chǎn)生幾個黏性末端？一個目的基因有幾個黏性末端？ 要切兩個切口，產(chǎn)生四個黏性末端，兩個。 如果把兩種來源不同的 DNA用同一種限制酶來切割，會怎樣呢？ 會產(chǎn)生相同的黏性末端。 是不是把兩者的黏性末端黏合起來，這樣就真的合成重組的 DNA分子了 ? 實(shí)際還不夠 ,還需要 DNA連接酶進(jìn)行連接。 思考與探究 A T G C A T G C 連接酶連接 磷酸二酯鍵 DNA連接酶的作用過程： 二、分子縫合針 ——DNA連接酶 作用部位： 是磷酸二酯鍵 （扶手） 不是氫鍵 （梯子） DNA連接酶 將兩條 DNA鏈連接起來的酶。 EcoliDNA連接酶 T4DNA連接酶 來源 功能 大腸桿菌 T4噬菌體 恢復(fù) 磷酸 二酯鍵 只能連接 黏性末端 能連接 黏性末端 和平末端 (效率較低 ) 相同點(diǎn)
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