dna重組的基本工具(編輯修改稿)
2025-01-26 02:16 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 ……G AATTC…… ……CTTAA G…… ……G AATTC…… ……CTTAA G…… 同一種 DNA聚合酶 DNA連接酶 區(qū)別 1 區(qū)別 2 相同點(diǎn) 尋根問(wèn)底 ? DNA連接酶與 DNA聚合酶是一回事嗎 ?為什么 ? 1)只能將 單個(gè)核苷酸 連接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯鍵 形成 磷酸二酯鍵 1)在 兩個(gè) DNA片段之間 形成磷酸二酯鍵 2)以 一條 DNA鏈為模板 ，將 單個(gè)核苷酸 通過(guò)磷酸二酯鍵 連接成一條互補(bǔ)的 DNA鏈 2)將 DNA雙鏈上的 兩個(gè)缺口同時(shí)連接 起來(lái)，不需要模板 可把黏性末端之間的 縫隙“縫合” 起來(lái)， Ecoli DNA連接酶 或 T4DNA連接酶 即 恢復(fù)被限制酶切開的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵 T4 DNA連接酶 還可把 平末端之間的縫隙“縫合”起來(lái)，但效率較低 T4DNA連接酶 二、“分子縫合針” —— DNA連接酶 ①作用 : 把切下來(lái)的 DNA片段拼接成新的 DNA，即將 脫氧核糖和磷酸 連接起來(lái) . ②作用原理： 催化磷酸二酯鍵形成 ③類型： 類型 EcoliDNA連接酶 T4DNA連接酶 來(lái)源 功能 大腸桿菌 T4噬菌體 恢復(fù) 磷酸 二酯鍵 只能連接 黏性末端 能連接 黏性末端 和平末端 (效率較低 ) 相同點(diǎn) 差別 三、“分子運(yùn)輸車” —— 基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體 ⒈載體需要的條件： ⑴ 有 1~多個(gè)限制酶切點(diǎn) ⑵對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害 ⑶導(dǎo)入基因 能在受體細(xì)胞中復(fù)制、表達(dá) ⑷ 有某些標(biāo)記基因，便于鑒定和篩選 (5)要大小適宜 ⒉常用運(yùn)載體： ⑴細(xì)菌的質(zhì)粒、酵母菌（真核）的質(zhì)粒 ⑵ λ 噬菌體衍生物 或某些動(dòng)植物病毒 ⑶假如目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后不能復(fù)制或不能轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)基因生物能有預(yù)想的效果嗎？ ⑴作為分子運(yùn)輸車 —— 載體，如果沒(méi)有切割位點(diǎn)將會(huì)怎樣？ ⑵霍亂菌的質(zhì)粒多個(gè)限制酶切點(diǎn)，你會(huì)用它來(lái)做分子運(yùn)輸車嗎？ ⑷目的基因有沒(méi)有進(jìn)入受體細(xì)胞，如何去發(fā)現(xiàn)？ ? 常用的載體：質(zhì)粒 能復(fù)制并帶著插入
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