dna重組的基本工具(編輯修改稿)
2025-01-26 02:16 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ……G AATTC…… ……CTTAA G…… ……G AATTC…… ……CTTAA G…… 同一種 DNA聚合酶 DNA連接酶 區(qū)別 1 區(qū)別 2 相同點 尋根問底 ? DNA連接酶與 DNA聚合酶是一回事嗎 ?為什么 ? 1)只能將 單個核苷酸 連接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯鍵 形成 磷酸二酯鍵 1)在 兩個 DNA片段之間 形成磷酸二酯鍵 2)以 一條 DNA鏈為模板 ，將 單個核苷酸 通過磷酸二酯鍵 連接成一條互補的 DNA鏈 2)將 DNA雙鏈上的 兩個缺口同時連接 起來，不需要模板 可把黏性末端之間的 縫隙“縫合” 起來， Ecoli DNA連接酶 或 T4DNA連接酶 即 恢復(fù)被限制酶切開的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵 T4 DNA連接酶 還可把 平末端之間的縫隙“縫合”起來，但效率較低 T4DNA連接酶 二、“分子縫合針” —— DNA連接酶 ①作用 : 把切下來的 DNA片段拼接成新的 DNA，即將 脫氧核糖和磷酸 連接起來 . ②作用原理： 催化磷酸二酯鍵形成 ③類型： 類型 EcoliDNA連接酶 T4DNA連接酶 來源 功能 大腸桿菌 T4噬菌體 恢復(fù) 磷酸 二酯鍵 只能連接 黏性末端 能連接 黏性末端 和平末端 (效率較低 ) 相同點 差別 三、“分子運輸車” —— 基因進入受體細胞的載體 ⒈載體需要的條件： ⑴ 有 1~多個限制酶切點 ⑵對受體細胞無害 ⑶導(dǎo)入基因 能在受體細胞中復(fù)制、表達 ⑷ 有某些標記基因，便于鑒定和篩選 (5)要大小適宜 ⒉常用運載體： ⑴細菌的質(zhì)粒、酵母菌（真核）的質(zhì)粒 ⑵ λ 噬菌體衍生物 或某些動植物病毒 ⑶假如目的基因?qū)胧荏w細胞后不能復(fù)制或不能轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)基因生物能有預(yù)想的效果嗎？ ⑴作為分子運輸車 —— 載體，如果沒有切割位點將會怎樣？ ⑵霍亂菌的質(zhì)粒多個限制酶切點，你會用它來做分子運輸車嗎？ ⑷目的基因有沒有進入受體細胞，如何去發(fā)現(xiàn)？ ? 常用的載體：質(zhì)粒 能復(fù)制并帶著插入
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