11dna重組技術(shù)的基本工具文(編輯修改稿)
2025-03-17 17:22 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 聚合酶都是形成磷酸二酯鍵，那么，二者的差別主要表現(xiàn)在什么地方呢？ ? （ 1） DNA聚合酶只能將單個核苷酸加到已有的核酸片段的末端上，形成磷酸二酯鍵；而 DNA連接酶是在兩個 DNA片段之間形成磷酸二酯鍵，不是在單個核苷酸與 DNA片段之間形成磷酸二酯鍵。 ? （ 2） DNA聚合酶是以一條 DNA鏈為模板，將單個核苷酸通過磷酸二酯鍵形成一條與模板鏈互補的 DNA鏈；而 DNA連接酶是將 DNA雙鏈上的兩個缺口同時連接起來。因此 DNA連接酶不需要模板。 ? 外源基因 (如抗蟲基因 )怎樣才能導入受體細胞 (如棉花細胞 )？ “分子運輸車” —— 載體。 ? 載體的作用有哪些？ 作用一：將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細胞中去。 作用二：目的基因隨載體的復制而復制。 三、 “分子運輸車” — 基因進入受體細胞的載體： 常用的載體主要有兩類： 1）質(zhì)粒 2）噬菌體或某些動植物病毒 原理：病毒，細菌等的侵染性。 三、 “分子運輸車” — 基因進入受體細胞的載體： 了解質(zhì)粒： 是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單、獨立于細菌擬核 DNA之外，且具有自我復制能力的雙鏈 環(huán)狀 DNA分子 。質(zhì)粒是基因工程 最常用 的運載體。有的一個細菌中有一個，有的一個細菌中有多個。 提問：所有的質(zhì)粒都可以作為運載體嗎？ ? 作為運載體必須具備哪些條件？ 1）能夠在宿主細胞中自我 復制并穩(wěn)定地保存 。 2）具有一個或 多個限制酶切點 ，以便與外源基因連接。 3）具有某些 標記基因 ，便于進行篩選。 4）對受體細胞無害。 5）大小應適合，便于提取和體外操作 為什么質(zhì)?？梢宰鳛榛蚬こ?最常用 的運載體呢？ 基因操作的工具 一 .“分子手術(shù)刀 :限制性核酸內(nèi)切酶 來源 :主要來自原核生物 作用 :將外來的 DNA切斷 結(jié)果 :產(chǎn)生黏性末端或 平末端 二 .“分子縫合針” : DNA連接酶 分類 :Ecoli DNA連接
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