11dna重組技術(shù)的基本工具文(編輯修改稿)
2025-03-17 17:22 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 聚合酶都是形成磷酸二酯鍵，那么，二者的差別主要表現(xiàn)在什么地方呢？ ? （ 1） DNA聚合酶只能將單個(gè)核苷酸加到已有的核酸片段的末端上，形成磷酸二酯鍵；而 DNA連接酶是在兩個(gè) DNA片段之間形成磷酸二酯鍵，不是在單個(gè)核苷酸與 DNA片段之間形成磷酸二酯鍵。 ? （ 2） DNA聚合酶是以一條 DNA鏈為模板，將單個(gè)核苷酸通過磷酸二酯鍵形成一條與模板鏈互補(bǔ)的 DNA鏈；而 DNA連接酶是將 DNA雙鏈上的兩個(gè)缺口同時(shí)連接起來。因此 DNA連接酶不需要模板。 ? 外源基因 (如抗蟲基因 )怎樣才能導(dǎo)入受體細(xì)胞 (如棉花細(xì)胞 )？ “分子運(yùn)輸車” —— 載體。 ? 載體的作用有哪些？ 作用一：將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞中去。 作用二：目的基因隨載體的復(fù)制而復(fù)制。 三、 “分子運(yùn)輸車” — 基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體： 常用的載體主要有兩類： 1）質(zhì)粒 2）噬菌體或某些動(dòng)植物病毒 原理：病毒，細(xì)菌等的侵染性。 三、 “分子運(yùn)輸車” — 基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體： 了解質(zhì)粒： 是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、獨(dú)立于細(xì)菌擬核 DNA之外，且具有自我復(fù)制能力的雙鏈 環(huán)狀 DNA分子 。質(zhì)粒是基因工程 最常用 的運(yùn)載體。有的一個(gè)細(xì)菌中有一個(gè)，有的一個(gè)細(xì)菌中有多個(gè)。 提問：所有的質(zhì)粒都可以作為運(yùn)載體嗎？ ? 作為運(yùn)載體必須具備哪些條件？ 1）能夠在宿主細(xì)胞中自我 復(fù)制并穩(wěn)定地保存 。 2）具有一個(gè)或 多個(gè)限制酶切點(diǎn) ，以便與外源基因連接。 3）具有某些 標(biāo)記基因 ，便于進(jìn)行篩選。 4）對(duì)受體細(xì)胞無害。 5）大小應(yīng)適合，便于提取和體外操作 為什么質(zhì)粒可以作為基因工程 最常用 的運(yùn)載體呢？ 基因操作的工具 一 .“分子手術(shù)刀 :限制性核酸內(nèi)切酶 來源 :主要來自原核生物 作用 :將外來的 DNA切斷 結(jié)果 :產(chǎn)生黏性末端或 平末端 二 .“分子縫合針” : DNA連接酶 分類 :Ecoli DNA連接
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