1-2dna重組技術(shù)的基本操作程序-wenkub.com
2025-01-06 01:25 本頁面
【正文】 課堂練習(xí)基因工程是在、基因工程是在 DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的。② 金屬粒子：鎢粉粒子和金粉粒子，粒子的直徑一般 在 ～ 4um③ 適用：單子葉植物目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法（ 3）花粉管通道法：① 操作方法：在植物花受粉后，花粉形成花粉管還未 愈合前期，剪去柱頭，然后，滴入 DNA（含目的基 因）使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞② 特點(diǎn) :十分簡便經(jīng)濟(jì) ③ 實(shí)例：轉(zhuǎn)基因抗蟲棉目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞（ 1）方法：顯微注射法（ 3）程序：含目地基因的表達(dá)載體提純 取卵（受精卵） 顯微注射 受精卵 新性狀動物（ 2）受體細(xì)胞： 受精卵將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞① 微生物作受體細(xì)胞原因 ： 繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對少② 常用細(xì)胞： 大腸桿菌③ 常用方法： Ca2+處理 獲得感受態(tài)細(xì)胞④ 過程：Ca2+處理處理大腸桿菌大腸桿菌感受態(tài)感受態(tài) 細(xì)胞細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞 吸收吸收 DNA表達(dá)載體表達(dá)載體與感受態(tài)與感受態(tài)細(xì)胞混合細(xì)胞混合，全部受體細(xì)胞都能攝 入重組 DNA分子嗎？真正能攝入重組 DNA分子的受體細(xì)胞很少。常用的受體細(xì)胞： 大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、 酵母菌和動植物細(xì)胞等?；虮磉_(dá)載體的構(gòu)建過程質(zhì)粒 DNA分子限制酶處理兩個(gè)切口獲得目的基因DNA連接酶重組 DNA分子（重組質(zhì)粒）同一種一個(gè)切口兩個(gè)黏性末端注意：① 載體 與 表達(dá)載體 的區(qū)別：二者都有標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)兩部分 DNA片段。 氫鍵 單鏈 DNA雙鏈 DNADNA單鏈 ：每重復(fù)一次，目的基因增加 ___倍1PCR反應(yīng)原理示意圖：PCR反應(yīng)原理示意圖：PCR技術(shù)的操作過程PCR反應(yīng)體系中目的基因成反應(yīng)體系中目的基因成 指數(shù)指數(shù) (2n)形式擴(kuò)增形式擴(kuò)增思考？1個(gè) DNA分子進(jìn)行 PCR擴(kuò)增 ,循環(huán) 4次，理論上至少需要幾個(gè)引物？2（ 2n1） (n為 循 環(huán) 次數(shù) )（ 241） 2=30PCR技術(shù)擴(kuò)增與 DNA復(fù)制的比較DNA復(fù)制 PCR技術(shù)場所原理?xiàng)l件解旋方式酶特點(diǎn)結(jié)果堿基互補(bǔ)配對原則 堿基互補(bǔ)配對原則四種脫氧核苷酸、模板、酶、 ATP四種脫氧核苷酸、模板、酶、 引物DNA在高溫下解旋解旋酶催化解旋半保留復(fù)制、邊解旋變復(fù)制半保留復(fù)制、全解旋再復(fù)制體外復(fù)制主要在細(xì)胞核內(nèi)大量的 DNA片段形成整個(gè) DNA分子熱穩(wěn)定的 DNA聚合酶細(xì)胞內(nèi)的解旋酶、 DNA聚合酶等3. 人工
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