1-2dna重組技術(shù)的基本操作程序-wenkub
2023-01-27 01:25:13 本頁(yè)面
【正文】 合成法在基因較小，核苷酸序列已知的情況下，可以利用 DNA合成儀用化學(xué)方法人工合成蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因化學(xué)合成推測(cè)推測(cè)思考： 化學(xué)法合成的目的基因含 內(nèi)含子、啟動(dòng)子和終止子嗎？不含課堂小結(jié)目的基因的獲取從基因文庫(kù)中獲取利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增人工合成種類基因組文庫(kù)部分基因文庫(kù)二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建 ——基因工程的核心1 目的：使目的基因在受體細(xì)胞中 穩(wěn)定存在 ，并且可以 遺傳 給下一代，同時(shí)使目的基因能夠 表達(dá)和發(fā)揮作用 。2 從基因文庫(kù)中獲取 利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增 利用 DNA合成儀用化學(xué)方法直接人工合成（一） 從基因文庫(kù)中獲取目的基因1. 基因文庫(kù)的概念基因文庫(kù)的概念 : 將含有某種生物不同基因的許多 DNA片斷，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同基因。1. 2基因工程的基本操作程序原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)非編碼區(qū) 非編碼區(qū)編碼區(qū)與 RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)啟動(dòng)子 終止子啟動(dòng)子： 位于基因的首端，是 RNA聚合酶 識(shí)別和結(jié)合的部位 ，有了它才能驅(qū)動(dòng) 基因轉(zhuǎn)錄出 mRNA，最終獲得蛋白質(zhì)。2. 基因文庫(kù)的種類基因文庫(kù)的種類 :基因組文庫(kù)： 含有一種生物的 全部 基因部分基因文庫(kù)： 只包含了一種生物的 部分 基因， 如： cDNA文庫(kù)基因文庫(kù)的構(gòu)建方法① 基因組文庫(kù)的構(gòu)建提取某種生物的 全部 DNA用適當(dāng)?shù)南拗泼? 切割一定大小的 DNA片段將 DNA片段與載體 連接重組 DNA基因組文庫(kù)導(dǎo)入受體菌 中儲(chǔ)存② cDNA文庫(kù)的構(gòu)建 反轉(zhuǎn)錄法： 提取某種生物的 mRNA單鏈 DNA雙鏈 cDNA片段重組 DNA與載體連接cDNA文庫(kù)反轉(zhuǎn)錄酶DNA聚合酶導(dǎo)入受體菌中儲(chǔ)存基因文庫(kù)的構(gòu)建方法mRNA單鏈 DNA雙鏈 DNA思考？真核生物的基因用反轉(zhuǎn)錄法得到的cDNA與原基因相同嗎？真核細(xì)胞的 cDNA的獲取編碼區(qū)編碼區(qū) 非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)DNA聚合酶剪接有關(guān)的酶RNA聚合酶mRNA前體mRNA單鏈 DNAcDNA反轉(zhuǎn)錄酶轉(zhuǎn)錄剪接反轉(zhuǎn)錄復(fù)制啟動(dòng)子啟動(dòng)子 終止子基因不含 非編碼區(qū) 和 內(nèi)含子cDNA文庫(kù)與基因組 DNA文庫(kù)cDNA反轉(zhuǎn)錄受體菌群體與運(yùn)載體 連接導(dǎo)入cDNA文庫(kù)某種生物某個(gè)時(shí)期的 mRNA 某生物體內(nèi)全部 DNA 許多 DNA片段受體菌群體限制酶基因組文庫(kù)與運(yùn)載體 連接導(dǎo)入
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