1-2dna重組技術(shù)的基本操作程序-在線瀏覽
2025-02-09 01:25本頁(yè)面
【正文】 的概念基因文庫(kù)的概念 : 將含有某種生物不同基因的許多 DNA片斷，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同基因。 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體外 特定 DNA片段3 前提：模板 DNA； 四種脫氧核苷酸； 熱穩(wěn)定DNA聚合酶（ Taq酶）； DNA引物DNA雙鏈 復(fù)制原理：條件：2一段已知目的基因的核苷酸序列 （ 90℃95℃ ）：雙鏈 DNA模板在熱作用下，_____斷裂，形成 ________ （ 55℃60℃ ）：系統(tǒng)溫度降低， 引物 與 DNA模板結(jié)合，形成局部 __________。 氫鍵 單鏈 DNA雙鏈 DNADNA單鏈 ：每重復(fù)一次，目的基因增加 ___倍1PCR反應(yīng)原理示意圖：PCR反應(yīng)原理示意圖：PCR技術(shù)的操作過(guò)程PCR反應(yīng)體系中目的基因成反應(yīng)體系中目的基因成 指數(shù)指數(shù) (2n)形式擴(kuò)增形式擴(kuò)增思考？1個(gè) DNA分子進(jìn)行 PCR擴(kuò)增 ,循環(huán) 4次，理論上至少需要幾個(gè)引物？2（ 2n1） (n為 循 環(huán) 次數(shù) )（ 241） 2=30PCR技術(shù)擴(kuò)增與 DNA復(fù)制的比較DNA復(fù)制 PCR技術(shù)場(chǎng)所原理?xiàng)l件解旋方式酶特點(diǎn)結(jié)果堿基互補(bǔ)配對(duì)原則 堿基互補(bǔ)配對(duì)原則四種脫氧核苷酸、模板、酶、 ATP四種脫氧核苷酸、模板、酶、 引物DNA在高溫下解旋解旋酶催化解旋半保留復(fù)制、邊解旋變復(fù)制半保留復(fù)制、全解旋再?gòu)?fù)制體外復(fù)制主要在細(xì)胞核內(nèi)大量的 DNA片段形成整個(gè) DNA分子熱穩(wěn)定的 DNA聚合酶細(xì)胞內(nèi)的解旋酶、 DNA聚合酶等3. 人工合成法在基因較小，核苷酸序列已知的情況下，可以利用 DNA合成儀用化學(xué)方法人工合成蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因化學(xué)合成推測(cè)推測(cè)思考： 化學(xué)法合成的目的基因含 內(nèi)含子、啟動(dòng)子和終止子嗎？不含課堂小結(jié)目的基因的獲取從基因文庫(kù)中獲取利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增人工合成種類基因組文庫(kù)部分基因文庫(kù)二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建 ——基因工程的核心1 目的：使目的基因在受體細(xì)胞中 穩(wěn)定存在 ，并且可以 遺傳 給下一代，同時(shí)使目的基因能夠 表達(dá)和發(fā)揮作用 。終止子： 位于基因的尾端的一段特殊的 DNA片斷， 能終止 mRNA的轉(zhuǎn)錄?；虮磉_(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程質(zhì)粒 DNA分子限制酶處理兩個(gè)切口獲得目的基因DNA連接酶重組 DNA分子（重組質(zhì)粒）同一種一個(gè)切口兩個(gè)黏性末端注意：① 載體 與 表達(dá)載體 的區(qū)別：二者都有標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)兩部分 DNA片段。 三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞1 轉(zhuǎn)化： 目的
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