1-2dna重組技術(shù)的基本操作程序-文庫(kù)吧資料
2025-01-12 01:25本頁(yè)面
【正文】 體 DNA上（ 2）基因槍法：① 操作方法：利用壓縮氣體產(chǎn)生的動(dòng)力，將包裹在 金屬粒表面的表達(dá)載體 DNA打入受體細(xì)胞中，使目 的基因與其整合并表達(dá)的方法。2目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法（ 1）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 ① 農(nóng)桿菌特點(diǎn)： 易感染雙子葉植物和裸子植物，對(duì)大多數(shù)單子葉植物沒(méi)有感染能力。3 目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的原理： 借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞的途徑。表達(dá)載體在載體基礎(chǔ)上增加了目的基因、啟動(dòng)子、終止子 三部分結(jié)構(gòu)② 用到的工具酶： 限制酶和 DNA連接酶，兩種酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵③ 啟動(dòng)子、終止子 對(duì)于目的基因表達(dá)必不可少④ 目的基因不能單獨(dú)進(jìn)入受體細(xì)胞， 必需以表達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去。標(biāo)記基因 的作用是為了 鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)。2 基因表達(dá)載體 的組成：復(fù)制原點(diǎn) +啟動(dòng)子 +目的基因 +終止子 +標(biāo)記基因表達(dá)載體啟動(dòng)子： 位于基因的首端的一段特殊的 DNA片斷，它是 RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位 ，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出 mRNA， 最終獲得蛋白質(zhì)。 （ 70℃75℃ ）：在Taq酶 的作用下，合成與模板互補(bǔ)的 __________。2. 基因文庫(kù)的種類基因文庫(kù)的種類 :基因組文庫(kù)： 含有一種生物的 全部 基因部分基因文庫(kù)： 只包含了一種生物的 部分 基因， 如： cDNA文庫(kù)基因文庫(kù)的構(gòu)建方法① 基因組文庫(kù)的構(gòu)建提取某種生物的 全部 DNA用適當(dāng)?shù)南拗泼? 切割一定大小的 DNA片段將 DNA片段與載體 連接重組 DNA基因組文庫(kù)導(dǎo)入受體菌 中儲(chǔ)存② cDNA文庫(kù)的構(gòu)建 反轉(zhuǎn)錄法： 提取某種生物的 mRNA單鏈 DNA雙鏈 cDNA片段重組 DNA與載體連接cDNA文庫(kù)反轉(zhuǎn)錄酶DNA聚合酶導(dǎo)入受體菌中儲(chǔ)存基因文庫(kù)的構(gòu)建方法mRNA單鏈 DNA雙鏈 DNA思考？真核生物的基因用反轉(zhuǎn)錄法得到的cDNA與原基因相同嗎？真核細(xì)胞的 cDNA的獲取編碼區(qū)編碼區(qū) 非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)DNA聚合酶剪接有關(guān)的酶RNA聚合酶mRNA前體mRNA單鏈 DNAcDNA反轉(zhuǎn)錄酶轉(zhuǎn)錄剪接反轉(zhuǎn)錄復(fù)制啟動(dòng)子啟動(dòng)子 終止子基因不含 非編碼區(qū) 和 內(nèi)含子cDNA文庫(kù)與基因組 DNA文庫(kù)cDNA反轉(zhuǎn)錄受體菌群體與運(yùn)載體 連接導(dǎo)入cDNA文庫(kù)某種生物某個(gè)時(shí)期的 mRNA 某生物體內(nèi)全部 DNA 許多 DNA片段受體菌群體限制酶基因組文庫(kù)與運(yùn)載體 連接導(dǎo)入基因組文庫(kù)與 cD
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