基因診斷-腫瘤的分子診斷(編輯修改稿)
2025-01-25 18:06 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 品的基因序列及表達(dá)的信息第二節(jié)對不同疾病采用不同基因診斷的策略 人類疾病多種多樣，致病原因不同，因此在基因診斷上也有不同途徑和策略。 對致病基因已經(jīng)找到、發(fā)生機(jī)制清楚的疾病，可以通過直接檢測致病基因進(jìn)行基因診斷。 如：病原微生物的感染：病毒、細(xì)菌、寄生蟲、真菌等，及與疾病有關(guān)的機(jī)體內(nèi)源性基因：癌基因、抑癌基因、病理基因。 對致病基因還沒找到，發(fā)生機(jī)制也沒有完全清楚，但致病基因已定位于染色體或基因組的特定區(qū)域的疾病，可以通過檢測致病基因的聯(lián)鎖遺傳標(biāo)記進(jìn)行基因診斷。 如：用限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)作為遺傳標(biāo)記，利用該遺傳標(biāo)記與相鄰的基因在遺傳過程中分離幾率很低，常常一起遺傳，形成連鎖特點(diǎn)，建立了染色體基因連鎖圖，根據(jù)基因連鎖圖，通過分析連鎖基因的遺傳標(biāo)記，可判斷致病基因存在的可能性。第二節(jié)對不同疾病采用不同基因診斷的策略對多因素、多基因疾病，可以通過檢測表型克隆基因進(jìn)行基因診斷。第二節(jié)對不同疾病采用不同基因診斷的策略如高血壓、冠心病、腫瘤、精神病、自身免疫性疾病，由于疾病發(fā)生的原因復(fù)雜，涉及多基因、多因素。因此可采用表型克隆方法來分析診斷。原理：從分析正常和異?；蚪M采用差異顯示等技術(shù)找到正常人和疾病患者之間的差異序列，進(jìn)行克隆。根據(jù)克隆的一組基因差異序列制作相應(yīng)探針，用制備的這一組探針檢測相關(guān)疾病的方法。第二節(jié)對不同疾病采用不同基因診斷的策略對一些因基因表達(dá)異常出現(xiàn)的疾病，可通過基因表達(dá)的定量分析進(jìn)行基因診斷。 對與基因表達(dá)異常出現(xiàn)的疾病，可以在轉(zhuǎn)錄水平上對該基因的表達(dá)的 mRNA量進(jìn)行分析，作出診斷。第三節(jié) 基因診斷的應(yīng)用前景 RFLP分析（ 20世紀(jì) 80年代 ）基因診斷的發(fā)展歷史第三節(jié) 基因診斷的應(yīng)用前景基因診斷過程中存在的問題 遺傳病的基因診斷是在基因水平上對核酸堿基序列突變的檢測，從遺傳物質(zhì)的分子水平上揭示疾病的發(fā)生原因和分子機(jī)制。 遺傳病的診斷分為產(chǎn)前檢查、癥狀前診斷和癥狀后診斷。遺傳病的基因診斷是進(jìn)行產(chǎn)前檢查和癥狀前診斷的唯一選擇，也是遺傳病預(yù)防最為有效的手段。第四節(jié)、基因診斷技術(shù)檢測遺傳病? 基因診斷技術(shù)途徑：? ① 直接分析致病基因分子結(jié)構(gòu)及表達(dá)是否異常的直接診斷途徑；? ② 利用多態(tài)性遺傳標(biāo)志與致病基因進(jìn)行連鎖分析的間接診斷途徑。第四節(jié) 遺傳病的基因診斷第四節(jié) 遺傳病的基因診斷直接診斷：檢測已知致病基因必要條件① 被檢基因的突變類型與疾病發(fā)病有直接的因果關(guān)系：② 被檢基因的正常分子結(jié)構(gòu)已被確定；③ 被檢基因突變位點(diǎn)固定而且已知。? ：? （ 1）導(dǎo)致特異性限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)改變 直接診斷：檢測已知致病基因? 血紅蛋白病可以由血紅蛋白結(jié)構(gòu)或合成異常所致的遺傳性疾病。前者稱為異常血紅蛋白病，后者稱為地中海貧血。? 針對異常血紅蛋白病如鐮刀狀紅細(xì)胞貧血癥是由于 ?珠蛋白 基因的第 6位密碼子 GAG突變成 GTG， 導(dǎo)致蛋白結(jié)構(gòu)異常。對此 遺傳病的基因診斷可采用 PCR限制性內(nèi)切酶分析技術(shù)。鐮狀紅細(xì)胞貧血 HBSBeta株蛋白基因突變：5180。 3180。正?；?180。 3180。突變基因鐮狀紅細(xì)胞貧血患者基因組的限制性酶切分析PCRRE分析 MstII CCTGAGGCCTGTGG+﹣正常人 突變攜帶著 患者鐮狀紅細(xì)胞貧血患者基因組的限制性酶切分析? ：（ 2）無限制性酶切位點(diǎn)改變 直接診斷：檢測已知致病基因PCRASO斑點(diǎn)雜交或反向斑點(diǎn)雜交等技術(shù)。 PCRASO斑點(diǎn)雜交或反向斑點(diǎn)雜交技術(shù)可快速、簡易地檢測已知突變。 Β地中海性貧血基因診斷（ PCRASO） 已知突變已知突變 Gene部位和性質(zhì)，合成寡和苷酸部位和性質(zhì)，合成寡和苷酸探針，探針， 32P標(biāo)記，進(jìn)行標(biāo)記，進(jìn)行 Southern Blot 雜交雜交 /斑斑點(diǎn)雜交。點(diǎn)雜交。 Normal βΑGene Probe—— 與正常與正常 βΑ雜交雜交Mutation βS Gene Probe—— 與異常與異常 βS雜交雜交 βΑ/βΑ βΑ/βS βS/βS 正常探針 突變探針 Gene 缺失遺傳病的診斷? 1） α 地貧的 Gene診斷? α 基因不同程度的缺失引起不同類型的 α 地貧， α 基因缺失 1～ 4個(gè)。正常Gene組用 BamHI切割，可得到 14kb的片段，而缺失一個(gè) α Gene時(shí)可得到 10kb片段。BamHI BamHIα2 α1α2 10 kb14 kbprobe以 αGene 為探針， Southern blot 方法檢測? αα/αα αα/α αα/ α / / ? 正常 缺 1 缺 2 缺 3 缺 414kb10kb直接診斷：檢測已知致病基因在 DNA序列上有較長一段序列的重新排布。包括大片段（數(shù)十個(gè)堿基甚至數(shù)千個(gè)堿基）的丟失、插入、取代、復(fù)制放大和倒位等，這些突變進(jìn)而引起更大范圍內(nèi)的染色體結(jié)構(gòu)上的改變從而影響多個(gè)基因的功能，即染色體突變或畸變，包括染色體的易位、缺失或染色三體（如唐氏綜合征）等 ? \缺失 ：核酸分子探針雜交與PCR（ 1） Southern印跡雜交、斑點(diǎn)雜交、原位雜交，通過設(shè)計(jì)一系列相應(yīng)于缺失區(qū)域的核苷酸探針，正常者出現(xiàn)雜交信號，而患者則因缺失這一區(qū)域，而檢測不到雜交信號（ 2）多重 PCR， 1988年 Chamberlain等采用多重 PCR技術(shù)成功地同時(shí)擴(kuò)增了人類杜氏肌
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