醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(編輯修改稿)
2025-01-16 17:49 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 勻，直到濁度與所要求的標準管的濃度相同； ? 序列稀釋已挑取菌落的生理鹽水試管至所需的菌液濃度如： 100cfu/ml。 ? 用平皿計數(shù)法驗證所配置菌液的實際濃度。 菌懸液制備（使用麥氏比濁管） ? 【使用技巧】 ? 直接用眼睛看（需要經(jīng)驗，誤差較大）。 ? 找張白紙打上平行直線，利用光在不同濃度液體折射不同幫助觀察比較。 麥 氏 1 號 管 稀 釋 梯 度 表（ cfu/ml） 菌懸液制備（使用分光光度儀 ） 分光光度儀 菌懸液制備的保存 ? 菌懸液制備：菌懸液制備后應在 2小時內(nèi)使用，若保存在 2～ 8℃ 的菌懸液可以在 24小時內(nèi)使用。黑曲霉也可制成穩(wěn)定的孢子懸液保存在 2～ 8℃ ，在驗證過的貯存期內(nèi)替代對應量的新鮮孢子懸液使用。 培養(yǎng)基質(zhì)量控制：靈敏度檢查 ? 靈敏度檢查所需的六種菌： ? 金黃色葡萄球菌 [CMCC (B)26003] ATCC 6538 ? 銅綠假單胞菌 [CMCC (B)10104] ATCC 9027 ? 枯草芽孢桿菌 [CMCC (B)63501] ATCC 6633 ? 生孢梭菌 [CMCC(B)64941] ATCC 11437 ? 白色念珠菌 [CMCC(F)98001] ATCC 10231 ? 黑曲霉 [CMCC(F)98003] ATCC 16404 ? 根據(jù)培養(yǎng)基的功能選擇靈敏度實驗所需菌種 ? 中國藥典 2023年版 ? 明確規(guī)定： 培養(yǎng)基靈敏度、微生物限度檢查法檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過 5代（從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為第 0代），并采用適宜的菌種保藏技術，以保證試驗菌株的生物學特性。 培養(yǎng)基質(zhì)量控制：靈敏度檢查 ? 中國藥典 2023年版在新增的“藥品微生物實驗室規(guī)范指導原則”中對菌種有了較為明確的規(guī)定： ? 允許使用標準菌株和商業(yè)派生菌株 ? 標準菌株應按保藏機構提供的說明進行復活 ? 標準儲備菌株應進行純度和特性確認 ? 標準儲備菌株建議采用低溫冷凍干燥、液氮貯存或超低溫冷凍保藏的方法 ? 標準儲備菌株可用于制備每月或每周一次轉種的工作菌株 ? 冷凍菌株解凍后不得重新冷凍和再次使用 ? 工作菌株不可替代標準菌株，商業(yè)派生菌株僅可用作工作菌株 培養(yǎng)基質(zhì)量控制：靈敏度檢查 菌株傳代基本概念 ? 標準菌株： 由國內(nèi)或國際菌種保藏機構保藏的，遺傳學特性得到確認和保證并可追溯的菌株。（ 0代） ? 標準儲備菌株： 由標準菌株經(jīng)一次傳代得到的培養(yǎng)物。（ 1代） ? 商業(yè)派生菌株： 由供應商提供的所有特性與標準菌株等效的菌株。（ 2代） ? 工作菌株： 由標準儲備菌株經(jīng)傳代得到的培養(yǎng)物。（ 2代） ? 代： 將活的微生物接種到新鮮培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，并希望獲取新的微生物培養(yǎng)物。這種操作方式，新培養(yǎng)物對接種培養(yǎng)物而言就稱為一代。 采購的第 2代超低溫冷凍標準 儲備菌種 工作菌種 第 3代 工作菌種 第 3代 工作菌種 第 4代 工作菌種 第 4代 工作菌液 第 5代 工作菌液 第 5代 工作菌液 第 5代 工作菌液 第 5代 制備工作菌種進行菌種保藏的模式圖 各類菌種保藏條件及時間 菌 種 培 養(yǎng) 基 保存溫度 傳 種 時 間 細 菌 一般多用于營養(yǎng)瓊脂或根據(jù)菌種規(guī)定選用培養(yǎng)基 4~6℃ 芽孢桿菌 3~6個月 ， 其它細菌每個月 酵母菌 一般用麥芽汁瓊脂或麥芽汁酵母膏瓊脂 4~6℃ 一般 4~6個月 絲狀真菌 一般用 PDA瓊脂 、 蔡氏瓊脂或麥芽汁瓊脂等 4~6℃ 每 4個月移植一次 （ 每 2個月移植一次 ） 菌 種 保 管 ? 菌種保管應有專人負責 ， 保存與加鎖的冰箱中或特制的白鐵箱中加鎖置陰暗處 ， 確保菌種安全 。 因工作變動時 ， 必須做好交接工作 。 ? 菌種應有詳細登記本 ， 包括名稱 、 分離日期 、鑒定日期 、 鑒定者 、 主要鑒定性能 ， 并注意記錄使用 、 轉移及銷毀情況和原因 。 ? 各種菌種應按規(guī)定時間定期移種 。 一般每移種 3次后作一次全面鑒定 。 注意菌種有無污染和變異 ， 如發(fā)現(xiàn)污染和變異時 ， 應及時更換 。 ? 購置菌種 ， 應有介紹信 。 全部保存菌種應具備清單 ， 并定期向部門負責人報告 。 FTM 的 靈 敏 度 檢 查 培養(yǎng)基質(zhì)量控制：靈敏度檢查 ? 接種金黃色葡萄球菌、緑膿桿菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中， 30～ 35℃ 培養(yǎng)18～ 24h；用 %無菌氯化鈉溶液制成 10100cfu/ml菌液備用。 ? 接種生胞梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基中， 30～ 35℃ 培養(yǎng) 18～ 24h；用 %無菌氯化鈉溶液制成10100cfu/ml菌液備用。 ? 接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中， 23～ 28℃ 培養(yǎng) 24～ 48h；用 %無菌氯化鈉溶液制成10100cfu/ml菌液備用。 ? 接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中， 23～ 28℃ 培養(yǎng) 5～ 7d,加 3～ %無菌氯化鈉溶液將孢子洗脫。然后，吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用%無菌氯化鈉溶液制成 10100cfu/ml
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