【文章內(nèi)容簡介】 器混合已加入的混合液，然后邊混合邊加入乙酸乙酯與乙酸混合液。離心15分鐘，將各管上清液分別倒入10mL比色管中，每管加4mL ，振搖5分鐘靜止使之分層，將上層溶劑抽出棄去，測定鹽酸液的熒光強(qiáng)度（30分鐘內(nèi)比色）。 熒光測量 若使用日立MPF4型熒光分光光度計(jì)測定條件為激發(fā)波長為403nm，狹縫10nm；發(fā)射波長為605nm，狹縫為5nm，液槽為1cm厚石英槽。 若使用國產(chǎn)930型熒光光度計(jì)測試，條件為激發(fā)濾光片420，熒光濾片550，靈敏度 1500，滿度開關(guān)開至最大，液槽為1cm厚石英槽。在不同量原卟啉（0181。g，，，）呈線性關(guān)系。 計(jì)算 樣品熒光強(qiáng)度空白熒光強(qiáng)度 100血中原卟啉含量（181。g/L全血） = ───────────────標(biāo)準(zhǔn)管原卟啉含量（181。g）─────────10 標(biāo)準(zhǔn)管熒光強(qiáng)度空白熒光強(qiáng)度 樣品取樣量(mL) 數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值 ，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值≥，P≤，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。結(jié)果判定受試樣品組與對(duì)照組比較，紅細(xì)胞內(nèi)游離原卟啉降低經(jīng)統(tǒng)計(jì)處理差異有顯著性，即可判定該實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。 注意事項(xiàng) 熒光強(qiáng)度隨時(shí)間延長而逐漸衰退，但30分鐘內(nèi)基本穩(wěn)定。 加乙酸乙酯乙酸混合液時(shí)，一定要邊混合邊加入，否則影響測定結(jié)果。 濾紙法測定：將滴有20微升血點(diǎn)全部剪下放入試管中，同時(shí)取同樣大小空白濾紙放入標(biāo)準(zhǔn)管和空白管中，各管均加入5%，振蕩后放置過夜，以下步驟同直接法。計(jì)算： FEP（微克/100毫升全血）=C/BA/D100 A=標(biāo)準(zhǔn)管原卟啉含量（） B=標(biāo)準(zhǔn)管熒光強(qiáng)度空白管熒光強(qiáng)度 C=血樣熒光強(qiáng)度空白管熒光強(qiáng)度 D=取樣量 紅細(xì)胞壓積測定：使用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行。數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定同“”。 數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值 ，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值≥，P≤，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。結(jié)果判定受試樣品組與低鐵對(duì)照組相比，若血紅蛋白差異有顯著性，且其前后平均升高幅度達(dá)到10g/L以上，同時(shí)，受試樣品紅細(xì)胞內(nèi)游離原卟啉或紅細(xì)胞壓積與低鐵對(duì)照組相比差異有顯著性，可判定該受試樣品改善缺鐵性貧血功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。 注意事項(xiàng)本項(xiàng)實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵在于貧血模型的建立。低鐵飼料含鐵量最好控制在9mg/Kg以下，所用試劑應(yīng)為分析純，動(dòng)物飲用水應(yīng)為去離子水或雙蒸水，采用不銹鋼籠具，所用器皿應(yīng)用10%硝酸溶液處理。實(shí)驗(yàn)過程中嚴(yán)防外來鐵的污染及彼此交叉污染。2 人體試食試驗(yàn) 受試者納入標(biāo)準(zhǔn)受試者為小細(xì)胞低色素貧血，且有明確的缺鐵原因和臨床表現(xiàn)的成人和兒童。 成人納入標(biāo)準(zhǔn)：男性 Hb 80g/L－130g/L，女性 Hb 80g/L－120g/L。 兒童納入標(biāo)準(zhǔn)：≤6歲兒童 Hb 70g/L－110g/L；7－18歲青少年80g/L－120g/L。 受試者排除標(biāo)準(zhǔn) 合并有心、腦血管、肝、腎、消化道等嚴(yán)重疾病及精神病患者。 過敏體質(zhì)或?qū)υ撌茉嚇悠愤^敏者。 嚴(yán)重貧血患者。 短期內(nèi)服用與受試功能有關(guān)的物品，影響到對(duì)結(jié)果的判斷者。 未按標(biāo)準(zhǔn)服用受試樣品、資料不全影響功效或安全性判斷者。 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及分組要求采用自身和組間兩種對(duì)照設(shè)計(jì)。按受試者的血紅蛋白水平隨機(jī)分為試食組和對(duì)照組，盡可能考慮影響結(jié)果的主要因素如性別、年齡、經(jīng)濟(jì)狀況等，進(jìn)行均衡性檢驗(yàn)，以保證組間的可比性。每組受試者不少于50例。 受試樣品的劑量和使用方法試食組按推薦服用方法、服用量服用受試產(chǎn)品，對(duì)照組可服用安慰劑或采用空白對(duì)照，也可服用具有同樣作用的陽性物。受試樣品給予時(shí)間30天，必要時(shí)可延長至120天。試驗(yàn)期間不改變?cè)瓉淼娘嬍沉?xí)慣，正常飲食。 觀察指標(biāo) 安全性指標(biāo) 一般狀況（包括精神、睡眠、飲食、大小便、血壓等） 血、尿、便常規(guī)檢查 肝、腎功能檢查（兒童受試者不測定此項(xiàng)） 腹部B超、胸透、心電圖檢查（各項(xiàng)指標(biāo)在試驗(yàn)前檢查一次，兒童受試者不測此項(xiàng)） 膳食調(diào)查于試驗(yàn)開始前、結(jié)束前進(jìn)行三天的詢問法膳食調(diào)查，觀察飲食因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。 癥狀觀察食欲不振、乏力、煩燥、頭暈、眼花、精神不集中、心慌、氣短等。 功效性指標(biāo)兒童觀察指標(biāo)：血紅蛋白、紅細(xì)胞內(nèi)游離原卟啉成人觀察指標(biāo)：血紅蛋白、血清鐵蛋白、血清運(yùn)鐵蛋白飽和度/紅細(xì)胞內(nèi)游離原卟啉 血紅蛋白：。 血清鐵蛋白測定（放射免疫法）： 原理人血清中的鐵蛋白（SF）與加入的125I 標(biāo)記的SF競爭性地與抗鐵蛋白抗體結(jié)合。用第二抗體分離結(jié)合部分，分別測定總放射性與沉淀物放射性計(jì)數(shù)。依據(jù)標(biāo)