【文章內(nèi)容簡介】 ）。每孔加酶結(jié)合物100ul，取新粘膠紙覆蓋反應(yīng)板，37177。2℃孵育30min。同步驟4。每孔加入底物緩沖液50ul，TMB50ul，混勻，不必覆蓋粘膠紙，37177。2℃孵育10min。每孔加入50ul 1M硫酸終止反應(yīng)，充分混勻。在2h內(nèi)置于酶標儀讀數(shù)，單波長450nm，或雙波長450/630nm測OD值。（三） 試驗結(jié)果NC≤Cut off值＝陽性對照值10%標本OD值小于Cut off為陰性，大于或等于Cut off為陽性（四） 報告：對呈陰性反應(yīng)的樣品，可由實施檢測的實驗室出具HIV抗體陰性報告；對呈陽性反應(yīng)的樣品，須進行復(fù)檢，不能出陽性報告。三、英科新創(chuàng)【方法】膠體金法【原理】本試劑盒采用膠體金免疫技術(shù)和層析原理，定性測定血清樣本中的HIV1/2型抗體。血清陽性樣本中HIV抗體與膠體金標記抗原結(jié)合形成復(fù)合物，由于層析作用復(fù)合物沿紙條向前移動，經(jīng)過檢測線時與預(yù)包被的重組Au－HIV（1+2）－Ag則在對照線處與抗HIV單克隆抗體結(jié)合而富集顯色。 陰性標本則僅在對照線處顯色，30分鐘內(nèi)觀察結(jié)果即可?！綡IV篩查試驗操作程序】（一） 試驗前準備： 試驗開始前將試劑和樣品放置于室溫（18~23℃）半小時，編號。 戴好帽子、口罩、雙層手套。 將所需測試卡從包裝盒中取出，置于臺面上。（二） 試驗操作：用微量加樣器取60ul樣本血清，加到測試卡的加樣處。加樣后，陽性標本可在1~30分鐘內(nèi)檢出。30分鐘后觀察結(jié)果將造成影響。（三） 試驗結(jié)果陽性：測試卡在檢測區(qū)和對照區(qū)位置出現(xiàn)兩條紫紅色條帶。如果檢測的紫紅色條帶隱約可見，應(yīng)用酶免試劑重復(fù)檢測。陰性：測試卡只在對照區(qū)位置出現(xiàn)一條紫紅色條帶。失效：對照區(qū)未出現(xiàn)紫紅色條帶?！痉椒ā侩p抗原夾心酶聯(lián)免疫法【原理】采用雙抗原夾心兩步法檢測人血清或血漿樣本中的HIV抗體。當待檢樣本中存在HIV抗體時，在反應(yīng)過程中形成“固相HIV抗原－HIV抗體－酶標記HIV抗原”的免疫復(fù)合物，加入底物后形成顯色反應(yīng)?！綡IV篩查試驗操作程序】（一）試驗前準備：1. 試驗開始前將試劑和樣品放置于室溫（18~25℃）半小時，編號。2. 換隔離衣，戴好帽子、口罩、雙層手套。3. 緩沖液配制：用蒸餾水1：19倍稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配?；蛞后w內(nèi)有結(jié)晶，應(yīng)放置在37℃直至溶解。（二）試驗操作、陽性對照血清。，置37℃溫育30min.（每次應(yīng)保持30~60秒浸泡時間），扣干。，置37℃溫育30min。（每次應(yīng)保持30~60秒浸泡時間），扣干。、B各50ul，輕拍混勻，覆上封板膜，置37℃暗置20min。（三）試驗結(jié)果。 value=+陰性對照均值（），小于臨界值為陰性。第三章 結(jié)果報告與注意事項【復(fù)檢試驗】對初篩呈陽性反應(yīng)的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復(fù)檢測。如兩種試劑復(fù)測均呈陰性反應(yīng)，則報告HIV抗體陰性；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，需送艾滋病確認實驗室進行確認。（具體詳見流程圖）【篩試驗結(jié)果的報告】 對HIV抗體篩查試驗，呈陰性反應(yīng)者可出具“HIV抗體陰性”報告。對初篩試驗呈陽性反應(yīng)者不能出陽性報告，可出具“HIV抗體待復(fù)查”報告?！境鹾Y試驗呈陽性反應(yīng)樣品的轉(zhuǎn)送】如需送上級實驗室進行復(fù)測或確認，需要填寫“HIV抗體復(fù)測送檢單”，經(jīng)1名檢驗人員和1名具有中級以上技術(shù)職稱的人員審核簽字，與血樣品一同送天山區(qū)疾控中心實驗室，再轉(zhuǎn)送市疾控中心艾滋病確認實驗室，或在本實驗室復(fù)檢后直接送確認實驗室?！静僮髋_消毒處理】用3~5%84消毒液擦拭臺面，如工作臺被溢出物污染，則用消毒液浸泡30分鐘后，再行擦拭?！痉块g消毒】　　每日用紫外線照射30~60min【方法學特性及注意事項】a) 試劑盒4~30℃干燥保存。有效期16個月。b) 抗凝全血應(yīng)采用EDTA，樣品應(yīng)避免溶血。c) 樣品應(yīng)在收集后7天內(nèi)檢測，2~8℃保存，如果大于7天，應(yīng)冷凍保存。d) 測試卡僅用于HIV抗體的現(xiàn)場初篩，檢測陽性必須用ELISA方法進一步確認。e) 樣本的加樣應(yīng)使用微量加樣器準確加入。f) 實驗環(huán)境應(yīng)保持一定濕度、避風，18~25℃進行。g) 本試劑盒應(yīng)視為有感染源的物品，應(yīng)按生物危險樣品處理?！狙寮訕颖怼恳姼郊Ｃ看螜z測完畢需填寫血清加樣表，由審核者簽字復(fù)核，存檔，以備查。第三部分 設(shè)備SOP文件一、多功能自動酶標儀RT2100C1． 儀器簡介RT2100C是一臺網(wǎng)絡(luò)化的酶標免疫測試分析儀器，可廣泛用于傳染病、腫瘤標志物、血液病、艾滋病、內(nèi)分泌障礙測定等診斷領(lǐng)域。2． 儀器原理光學及比色系統(tǒng)信號放大A/D轉(zhuǎn)換計算機LCD顯示屏觸摸屏打印機3． 環(huán)境要求：1) 避免陽光直曬2) 溫度：10℃~40℃，濕度20%~85%3) 電源必須接地良好4) 電源穩(wěn)定，禁止與大功率用電器共用電源4． 操作步驟4．1開機打開儀器背面的電源開關(guān)，等待約10秒鐘，開機初始化流程要完成以下工作：1) 系統(tǒng)程序加載2) 系統(tǒng)自檢3) 讀取用戶數(shù)據(jù)4) 前端初始化5) 等待光源穩(wěn)定：儀器需要等待光源穩(wěn)定約1分鐘左右。6) 光路自檢：期間濾光片輪會轉(zhuǎn)動，酶標板將往返走板一次。開機結(jié)束后，進行主菜單窗口。4．2項目設(shè)置在主菜單中按[項目設(shè)置]鍵，進入項目列表窗口。4．2．1新建與更改項目按[新建]或[更改]鍵，添加或更改項目，如果項目數(shù)已經(jīng)超過100，將無法創(chuàng)建新項目。按圖所示設(shè)置參數(shù)設(shè)置。1) 項目名稱：該項必須輸入，注意不要與已經(jīng)存在的項目名重復(fù)。2) 試劑名稱：根據(jù)所用試輸入，也可以不輸入。3) 波長：從列表中選取，注意主波長和次波長不能重復(fù)。4) 計算方法：從列表中選取5) 雙樣本：若選擇雙樣本，則布板時每個樣本孔的相鄰孔自動設(shè)置為重復(fù)孔，計算時取兩者吸光度的平均值。6) 空白上限：,則空白應(yīng)設(shè)為，測試時如果空白孔吸光度值超過設(shè)定的上限，系統(tǒng)會提示用戶“空白也吸光度值過高”。7) 定量計算，根據(jù)試劑說明輸入：a) 標準品數(shù)量：選擇2~8個標準品。b) 濃度單位：從列表中選擇。c) 雙標準：若選擇雙標準：則布板時每個標準孔的相鄰孔被自動設(shè)置為重復(fù)孔，計算時取兩者吸光度的平均值。d) 標準品吸光度：雙擊標準品濃度列表項，可以在彈出窗口中輸入濃度值，注意標準品濃度順序必須為由小到大。8）計算，按試劑說明在窗口中輸入：a) Cutoff公式系數(shù)：各鐘試劑的定性公式如有不同形式如S/N，（NS）/N等均可轉(zhuǎn)換為S/（X*N+Y*P+Fac）的形式。b) 陰性對照和陽性對照的吸光度范圍：對照的吸光度超出上限和下限進分別按上限和下限計算。例如有試劑要求陰性對照小于0。05按0。05計，則陰性對照下限應(yīng)設(shè)為0。05。c) 對照：可以任意設(shè)置對照，但對照的數(shù)量不超過5個，計算時取所有對照吸光度的平均值。9）陰陽性判定設(shè)置窗口 在此窗口中輸入判定陰性和陽性的臨界值，吸光度模式下，臨界值為吸光度值：Cutoff方式 下，臨界值為樣本與Cutoff值的比值，定量計算方式下，臨界值為濃度值。定性方式分為3類：a) 正向閾值模式：陰性＜陰性臨界值，陽性≥陽性臨界值，兩者之間為灰區(qū)，在此區(qū)間內(nèi)的樣本判定為可疑。b) 反向閾值模式：陰性＞陰性臨界值，陽性≤陽性臨界值。c) 不需要判定陰陽性：在定性方式 中選擇“無。所有參數(shù)設(shè)置完畢，按[完成]鍵。4．3樣品測試在主菜單中按[樣品測試]鍵，進入如下窗口：a) 布板方向：橫向或縱向b) 進板方式：選擇連續(xù)方式（＜5秒）提高測量速度，選擇步進方式（＜15秒）獲得更高的測量精度。c) 振板參數(shù)：振板速度分快速，中速和慢速3檔，振板時間1~60秒，也可以選擇不振板。設(shè)定完以上參數(shù)后，按[確定]鍵，進入布板窗口。4．4布板4．4．1樣本任意點擊欲設(shè)置為樣本的孔位，樣本號從1起自動遞增并顯示在該孔位上。如果要修改樣本號，可再次點擊該孔位。4．4．2空白空白孔在項目測試中用以吸光度調(diào)零，即其它孔位的吸光度均要減去空白孔吸光度值。根據(jù)不同項目測試的要求，可以選擇是否設(shè)定空白。舊空白的保存和使用：空白孔的測試結(jié)果將自動保存，如果在同一項目的后續(xù)測試中不重新設(shè)定空白，則系統(tǒng)自動用舊空白進行計算。第個項目只允許設(shè)置一個空白孔，如果在設(shè)置空白孔時多次點擊不同的孔位，那么只有最后一次點擊的孔位被設(shè)定為空白孔，前面設(shè)置的空白孔被自動清除。4．4．3依次設(shè)置陰性對照和陽性對照。按[開始]鍵，系統(tǒng)確認布板無誤后，開始走板測試。走