【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 ）。每孔加酶結(jié)合物100ul，取新粘膠紙覆蓋反應(yīng)板，37177。2℃孵育30min。同步驟4。每孔加入底物緩沖液50ul，TMB50ul，混勻，不必覆蓋粘膠紙，37177。2℃孵育10min。每孔加入50ul 1M硫酸終止反應(yīng)，充分混勻。在2h內(nèi)置于酶標(biāo)儀讀數(shù)，單波長(zhǎng)450nm，或雙波長(zhǎng)450/630nm測(cè)OD值。（三） 試驗(yàn)結(jié)果NC≤Cut off值＝陽(yáng)性對(duì)照值10%標(biāo)本OD值小于Cut off為陰性，大于或等于Cut off為陽(yáng)性（四） 報(bào)告：對(duì)呈陰性反應(yīng)的樣品，可由實(shí)施檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室出具HIV抗體陰性報(bào)告；對(duì)呈陽(yáng)性反應(yīng)的樣品，須進(jìn)行復(fù)檢，不能出陽(yáng)性報(bào)告。三、英科新創(chuàng)【方法】膠體金法【原理】本試劑盒采用膠體金免疫技術(shù)和層析原理，定性測(cè)定血清樣本中的HIV1/2型抗體。血清陽(yáng)性樣本中HIV抗體與膠體金標(biāo)記抗原結(jié)合形成復(fù)合物，由于層析作用復(fù)合物沿紙條向前移動(dòng)，經(jīng)過(guò)檢測(cè)線時(shí)與預(yù)包被的重組Au－HIV（1+2）－Ag則在對(duì)照線處與抗HIV單克隆抗體結(jié)合而富集顯色。 陰性標(biāo)本則僅在對(duì)照線處顯色，30分鐘內(nèi)觀察結(jié)果即可?！綡IV篩查試驗(yàn)操作程序】（一） 試驗(yàn)前準(zhǔn)備： 試驗(yàn)開(kāi)始前將試劑和樣品放置于室溫（18~23℃）半小時(shí)，編號(hào)。 戴好帽子、口罩、雙層手套。 將所需測(cè)試卡從包裝盒中取出，置于臺(tái)面上。（二） 試驗(yàn)操作：用微量加樣器取60ul樣本血清，加到測(cè)試卡的加樣處。加樣后，陽(yáng)性標(biāo)本可在1~30分鐘內(nèi)檢出。30分鐘后觀察結(jié)果將造成影響。（三） 試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性：測(cè)試卡在檢測(cè)區(qū)和對(duì)照區(qū)位置出現(xiàn)兩條紫紅色條帶。如果檢測(cè)的紫紅色條帶隱約可見(jiàn)，應(yīng)用酶免試劑重復(fù)檢測(cè)。陰性：測(cè)試卡只在對(duì)照區(qū)位置出現(xiàn)一條紫紅色條帶。失效：對(duì)照區(qū)未出現(xiàn)紫紅色條帶。【方法】雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法【原理】采用雙抗原夾心兩步法檢測(cè)人血清或血漿樣本中的HIV抗體。當(dāng)待檢樣本中存在HIV抗體時(shí)，在反應(yīng)過(guò)程中形成“固相HIV抗原－HIV抗體－酶標(biāo)記HIV抗原”的免疫復(fù)合物，加入底物后形成顯色反應(yīng)?！綡IV篩查試驗(yàn)操作程序】（一）試驗(yàn)前準(zhǔn)備：1. 試驗(yàn)開(kāi)始前將試劑和樣品放置于室溫（18~25℃）半小時(shí)，編號(hào)。2. 換隔離衣，戴好帽子、口罩、雙層手套。3. 緩沖液配制：用蒸餾水1：19倍稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配?；蛞后w內(nèi)有結(jié)晶，應(yīng)放置在37℃直至溶解。（二）試驗(yàn)操作、陽(yáng)性對(duì)照血清。，置37℃溫育30min.（每次應(yīng)保持30~60秒浸泡時(shí)間），扣干。，置37℃溫育30min。（每次應(yīng)保持30~60秒浸泡時(shí)間），扣干。、B各50ul，輕拍混勻，覆上封板膜，置37℃暗置20min。（三）試驗(yàn)結(jié)果。 value=+陰性對(duì)照均值（），小于臨界值為陰性。第三章 結(jié)果報(bào)告與注意事項(xiàng)【復(fù)檢試驗(yàn)】對(duì)初篩呈陽(yáng)性反應(yīng)的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復(fù)檢測(cè)。如兩種試劑復(fù)測(cè)均呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告HIV抗體陰性；如均呈陽(yáng)性反應(yīng)，或一陰一陽(yáng)，需送艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)。（具體詳見(jiàn)流程圖）【篩試驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告】 對(duì)HIV抗體篩查試驗(yàn)，呈陰性反應(yīng)者可出具“HIV抗體陰性”報(bào)告。對(duì)初篩試驗(yàn)呈陽(yáng)性反應(yīng)者不能出陽(yáng)性報(bào)告，可出具“HIV抗體待復(fù)查”報(bào)告?！境鹾Y試驗(yàn)呈陽(yáng)性反應(yīng)樣品的轉(zhuǎn)送】如需送上級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行復(fù)測(cè)或確認(rèn)，需要填寫“HIV抗體復(fù)測(cè)送檢單”，經(jīng)1名檢驗(yàn)人員和1名具有中級(jí)以上技術(shù)職稱的人員審核簽字，與血樣品一同送天山區(qū)疾控中心實(shí)驗(yàn)室，再轉(zhuǎn)送市疾控中心艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室，或在本實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢后直接送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室?！静僮髋_(tái)消毒處理】用3~5%84消毒液擦拭臺(tái)面，如工作臺(tái)被溢出物污染，則用消毒液浸泡30分鐘后，再行擦拭。【房間消毒】　　每日用紫外線照射30~60min【方法學(xué)特性及注意事項(xiàng)】a) 試劑盒4~30℃干燥保存。有效期16個(gè)月。b) 抗凝全血應(yīng)采用EDTA，樣品應(yīng)避免溶血。c) 樣品應(yīng)在收集后7天內(nèi)檢測(cè)，2~8℃保存，如果大于7天，應(yīng)冷凍保存。d) 測(cè)試卡僅用于HIV抗體的現(xiàn)場(chǎng)初篩，檢測(cè)陽(yáng)性必須用ELISA方法進(jìn)一步確認(rèn)。e) 樣本的加樣應(yīng)使用微量加樣器準(zhǔn)確加入。f) 實(shí)驗(yàn)環(huán)境應(yīng)保持一定濕度、避風(fēng)，18~25℃進(jìn)行。g) 本試劑盒應(yīng)視為有感染源的物品，應(yīng)按生物危險(xiǎn)樣品處理?！狙寮訕颖怼恳?jiàn)附件。每次檢測(cè)完畢需填寫血清加樣表，由審核者簽字復(fù)核，存檔，以備查。第三部分 設(shè)備SOP文件一、多功能自動(dòng)酶標(biāo)儀RT2100C1． 儀器簡(jiǎn)介RT2100C是一臺(tái)網(wǎng)絡(luò)化的酶標(biāo)免疫測(cè)試分析儀器，可廣泛用于傳染病、腫瘤標(biāo)志物、血液病、艾滋病、內(nèi)分泌障礙測(cè)定等診斷領(lǐng)域。2． 儀器原理光學(xué)及比色系統(tǒng)信號(hào)放大A/D轉(zhuǎn)換計(jì)算機(jī)LCD顯示屏觸摸屏打印機(jī)3． 環(huán)境要求：1) 避免陽(yáng)光直曬2) 溫度：10℃~40℃，濕度20%~85%3) 電源必須接地良好4) 電源穩(wěn)定，禁止與大功率用電器共用電源4． 操作步驟4．1開(kāi)機(jī)打開(kāi)儀器背面的電源開(kāi)關(guān)，等待約10秒鐘，開(kāi)機(jī)初始化流程要完成以下工作：1) 系統(tǒng)程序加載2) 系統(tǒng)自檢3) 讀取用戶數(shù)據(jù)4) 前端初始化5) 等待光源穩(wěn)定：儀器需要等待光源穩(wěn)定約1分鐘左右。6) 光路自檢：期間濾光片輪會(huì)轉(zhuǎn)動(dòng)，酶標(biāo)板將往返走板一次。開(kāi)機(jī)結(jié)束后，進(jìn)行主菜單窗口。4．2項(xiàng)目設(shè)置在主菜單中按[項(xiàng)目設(shè)置]鍵，進(jìn)入項(xiàng)目列表窗口。4．2．1新建與更改項(xiàng)目按[新建]或[更改]鍵，添加或更改項(xiàng)目，如果項(xiàng)目數(shù)已經(jīng)超過(guò)100，將無(wú)法創(chuàng)建新項(xiàng)目。按圖所示設(shè)置參數(shù)設(shè)置。1) 項(xiàng)目名稱：該項(xiàng)必須輸入，注意不要與已經(jīng)存在的項(xiàng)目名重復(fù)。2) 試劑名稱：根據(jù)所用試輸入，也可以不輸入。3) 波長(zhǎng)：從列表中選取，注意主波長(zhǎng)和次波長(zhǎng)不能重復(fù)。4) 計(jì)算方法：從列表中選取5) 雙樣本：若選擇雙樣本，則布板時(shí)每個(gè)樣本孔的相鄰孔自動(dòng)設(shè)置為重復(fù)孔，計(jì)算時(shí)取兩者吸光度的平均值。6) 空白上限：,則空白應(yīng)設(shè)為，測(cè)試時(shí)如果空白孔吸光度值超過(guò)設(shè)定的上限，系統(tǒng)會(huì)提示用戶“空白也吸光度值過(guò)高”。7) 定量計(jì)算，根據(jù)試劑說(shuō)明輸入：a) 標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)量：選擇2~8個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品。b) 濃度單位：從列表中選擇。c) 雙標(biāo)準(zhǔn)：若選擇雙標(biāo)準(zhǔn)：則布板時(shí)每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)孔的相鄰孔被自動(dòng)設(shè)置為重復(fù)孔，計(jì)算時(shí)取兩者吸光度的平均值。d) 標(biāo)準(zhǔn)品吸光度：雙擊標(biāo)準(zhǔn)品濃度列表項(xiàng)，可以在彈出窗口中輸入濃度值，注意標(biāo)準(zhǔn)品濃度順序必須為由小到大。8）計(jì)算，按試劑說(shuō)明在窗口中輸入：a) Cutoff公式系數(shù)：各鐘試劑的定性公式如有不同形式如S/N，（NS）/N等均可轉(zhuǎn)換為S/（X*N+Y*P+Fac）的形式。b) 陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照的吸光度范圍：對(duì)照的吸光度超出上限和下限進(jìn)分別按上限和下限計(jì)算。例如有試劑要求陰性對(duì)照小于0。05按0。05計(jì)，則陰性對(duì)照下限應(yīng)設(shè)為0。05。c) 對(duì)照：可以任意設(shè)置對(duì)照，但對(duì)照的數(shù)量不超過(guò)5個(gè)，計(jì)算時(shí)取所有對(duì)照吸光度的平均值。9）陰陽(yáng)性判定設(shè)置窗口 在此窗口中輸入判定陰性和陽(yáng)性的臨界值，吸光度模式下，臨界值為吸光度值：Cutoff方式 下，臨界值為樣本與Cutoff值的比值，定量計(jì)算方式下，臨界值為濃度值。定性方式分為3類：a) 正向閾值模式：陰性＜陰性臨界值，陽(yáng)性≥陽(yáng)性臨界值，兩者之間為灰區(qū)，在此區(qū)間內(nèi)的樣本判定為可疑。b) 反向閾值模式：陰性＞陰性臨界值，陽(yáng)性≤陽(yáng)性臨界值。c) 不需要判定陰陽(yáng)性：在定性方式 中選擇“無(wú)。所有參數(shù)設(shè)置完畢，按[完成]鍵。4．3樣品測(cè)試在主菜單中按[樣品測(cè)試]鍵，進(jìn)入如下窗口：a) 布板方向：橫向或縱向b) 進(jìn)板方式：選擇連續(xù)方式（＜5秒）提高測(cè)量速度，選擇步進(jìn)方式（＜15秒）獲得更高的測(cè)量精度。c) 振板參數(shù)：振板速度分快速，中速和慢速3檔，振板時(shí)間1~60秒，也可以選擇不振板。設(shè)定完以上參數(shù)后，按[確定]鍵，進(jìn)入布板窗口。4．4布板4．4．1樣本任意點(diǎn)擊欲設(shè)置為樣本的孔位，樣本號(hào)從1起自動(dòng)遞增并顯示在該孔位上。如果要修改樣本號(hào)，可再次點(diǎn)擊該孔位。4．4．2空白空白孔在項(xiàng)目測(cè)試中用以吸光度調(diào)零，即其它孔位的吸光度均要減去空白孔吸光度值。根據(jù)不同項(xiàng)目測(cè)試的要求，可以選擇是否設(shè)定空白。舊空白的保存和使用：空白孔的測(cè)試結(jié)果將自動(dòng)保存，如果在同一項(xiàng)目的后續(xù)測(cè)試中不重新設(shè)定空白，則系統(tǒng)自動(dòng)用舊空白進(jìn)行計(jì)算。第個(gè)項(xiàng)目只允許設(shè)置一個(gè)空白孔，如果在設(shè)置空白孔時(shí)多次點(diǎn)擊不同的孔位，那么只有最后一次點(diǎn)擊的孔位被設(shè)定為空白孔，前面設(shè)置的空白孔被自動(dòng)清除。4．4．3依次設(shè)置陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。按[開(kāi)始]鍵，系統(tǒng)確認(rèn)布板無(wú)誤后，開(kāi)始走板測(cè)試。走