分光光度法測定化妝品中的氨基酸(編輯修改稿)
2025-09-01 03:22 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 法[7] 化學法 甲醛滴定法原理：是在中性或弱堿性水溶液中，α 氨基酸與甲醛反應生成亞甲基亞氨基衍生物,亞基亞氨基衍生物用堿滴定，從而得到樣品中總氨基酸的含量[1]。特點：此法簡單易行、快速方便，但準確度差，終點較難掌握。 凱氏定氮法原理：通過測定樣品中總氮的含量，然后根據(jù)蛋白質(zhì)和氨基酸中的氮含量，得知含氮的氨基酸、蛋白質(zhì)的總量。常見的方法有常量法、微量法、自動定氮法、半微量法及改良凱氏法等多種[2]。特點：該方法準確度高，但操作步驟復雜、試劑耗量多、測定周期長。 分光光度法原理：分光光度法是基于物質(zhì)對光的選擇性吸收而建立起來的分析方法。大部分氨基酸在紫外區(qū)無吸收，只有小部分在紫外區(qū)有吸收，而且吸收光譜嚴重重疊，所以，對大部分氨基酸不經(jīng)分離而用紫外分光光度法同時測定，需要采用一定的數(shù)學方法[3]。目前常用的數(shù)學分光光度法有偏最小二乘法分光光度法、多元線性回歸分析分光光度法等方法。 色譜法 紙色譜法和薄層色譜法紙色譜法原理：以紙為載體，紙所吸附的水為固定相，展開劑為流動相，由于樣品成分在兩相溶劑中的分配系數(shù)不同而實現(xiàn)分離，按操作方法分為垂直型和水平型兩類[4]。運用紙色譜法采用不同的層析液和檢測用顯色劑，可以對三十多種氨基酸及其衍生物行分析。紙色譜點是操作簡單、分離效能較高、所需儀器設備廉價，因而應用廣泛。紙色譜－電泳相結(jié)合可以對氨基酸進行進一步的分離薄層色譜法原理：根據(jù)各種氨基酸在吸附劑表面的吸附能力不進行分離或提純的一種方法，常用的薄層板有硅膠、聚酰胺纖維素，采用相應的展開對氨進行分離，然后分別采用紫外光熒光或可光進行檢測[5]。特點：具有展開快、分離效能高、靈度高、耐腐蝕等特點，比紙色譜的應用更廣泛。 氣相色譜法原理：將氨基酸衍生化成為易于氣化的物質(zhì)，將其衍生物在一定溫度下轉(zhuǎn)化為氣體，利用試樣中各組分在氣相和固定液液相間的分配系數(shù)不同進行檢測分析[6]。應用較廣的反應有兩種，即生成三氟乙酰(NTFA)氨基酸正丁酯和生成七氟丁?；?NHFA)氨基酸丁基酯。氣相色譜具有高效能、選擇性好、靈敏度高、操作簡單的特點，還便于與質(zhì)譜聯(lián)用，確定氨基酸的結(jié)構(gòu)，從而有可能發(fā)現(xiàn)新的氨基酸或測定非蛋白氨基酸。近年來，已在生化、醫(yī)藥、食品等方面得到了廣泛的應用。缺點：氣譜法必須衍生，而衍生中又要恪守嚴格的條件，不能用一根色譜柱實現(xiàn)全氨基酸測定，樣品要經(jīng)過脫鹽處理，操作繁瑣且易帶來污染。. 5 液相色譜法原理：由于樣品溶液中的各組分在流動相和固定相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對運動時，經(jīng)過反復多次的吸附－解吸的分配過程進行分離檢測。由于大多數(shù)氨基酸無紫外吸收和熒光發(fā)射特征，為提高分析檢測靈敏度和分離選擇特性，通常將氨基酸進行衍生化。目前，氨基酸的液相色譜分析方法主要有柱后衍生法和柱前衍生法[7,8]。 毛細管電泳色譜法原理：以高壓電場為驅(qū)動力，以毛細管為分離通道，依據(jù)樣品中各組成之間淌度和分配行上的差異而實現(xiàn)分離的技術(shù)。芳香族氨基酸可采用紫外檢測直接測定，其他氨基酸在可見光和近紫外區(qū)域都沒有光吸收，也不發(fā)射熒光，因此往往通過柱前或柱后衍生的方法進行紫外可見吸收或熒光檢測[10,11]。衍生方式液相色譜一樣，有柱前、柱后之分。商品儀器通常用柱前衍生，但對一些不夠穩(wěn)定的衍生試劑如OPA，應采用柱后衍生方式。氨基酸的對映體分離有兩種方法：直接法和間接法。直接法是由兩個對映體與手性選擇劑形成不對稱的絡合物分子或其他結(jié)構(gòu)，產(chǎn)生不同的物理化學性質(zhì)從而達到分離的目的。間接法是先將對映體與手性選擇劑反應生成非對映體化合物，使之產(chǎn)生物理和化學性質(zhì)的差異，再通過電泳系統(tǒng)進行分離毛細管電泳具有進樣少、絕對靈敏度高、分辨率高、溶劑消耗量少等優(yōu)點，得到了迅速的發(fā)展。但是CE仍要繼續(xù)提高分辨率、速度和檢測器的選擇性。同時，增加自動進樣裝置和使之微機化、商品化。 電化學法原理：是建立在物質(zhì)在溶液中的電化學性質(zhì)基礎(chǔ)上的一類儀器分析方法，采用適用于不同氨基酸的選擇電極，對各種氨基酸進行測定[12]，氨基酸的電化學分析可分為直接電化學分析和間接電化學分析。對于胱氨酸、半胱氨酸、酪氨酸等電活性的氨基酸一般采用直接電分法。多數(shù)氨基酸于金屬電極上是非電活性的，無法直接測定，一般是采用衍生化反應將其轉(zhuǎn)化成電活性的物質(zhì)進行間接測定。氨基酸的電化學分析特點：此法以其簡單、靈敏、無放射、無污染與各種現(xiàn)代化的分離方法相結(jié)合可以大大簡化操作過程，節(jié)約分析時間。氨基酸的電分析法也存在不足，如具有直接電化學活性的氨基酸不多、可逆性較差、背景干擾較大、非電化學活性的氨基酸仍需進行衍生化反應等，因此，實際應用時選擇合適的體系及反應方法。綜上所述，實驗測定氨基酸的方法有很多，通過比較，聯(lián)系實
物理相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1