【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 水解 實(shí)驗(yàn)時(shí)，從冰箱取出預(yù)先準(zhǔn)備好的大蒜根尖，分裝到若干個(gè)青霉素瓶中，用自來水洗3次，蒸餾水水洗3次，換1mol/L HCl洗一次，傾去，換入預(yù)熱60℃的1mol/L HCl 3ml，放入恒溫水浴鍋中在60177。℃下水解815分鐘（視材料而定，水解時(shí)間可以從8分鐘延長(zhǎng)至30分鐘）。然后吸去熱1mol/L HCl，換入冷1mol/L HCl洗1次，再用蒸餾水將根尖洗3次。 水解是本實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵之一。重要的是溫度，應(yīng)保持在60177?！嬷g。如果溫度過高或時(shí)間過長(zhǎng)，造成水解過度，醣與醛基之間的鍵被破壞，醛基流失到水解液中；反之，不能出現(xiàn)潛在的醛基，都不能呈現(xiàn)顏色反應(yīng)。 染色 吸凈水分，加入Schiff試劑避光染色40min~60min，用漂洗液漂洗2～3次，每次5min,然后經(jīng)自來水流水沖洗，再用蒸餾水洗2次后準(zhǔn)備壓片。 壓片法 取一根尖置于載玻片上，用刀片切下生長(zhǎng)區(qū)部位（染成紫紅色），用拇指輕壓使細(xì)胞分散均勻，鏡檢。 對(duì)照組預(yù)先用5%三氯醋酸（90℃）處理15min，然后再依次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)步驟2，3，4?！緦?shí)驗(yàn)結(jié)果】細(xì)胞核中的DNA 呈鮮亮的紫紅色反應(yīng)，它不但反應(yīng)出DNA 存在的部位及其分布情況，而且還可從顏色反應(yīng)的深淺，來判斷DNA 的相對(duì)含量。 小鼠肝切片F(xiàn)eulgen 染色【實(shí)驗(yàn)報(bào)告】1．繪圖表示Feulgen 反應(yīng)的染色結(jié)果。2．總結(jié)Feulgen 反應(yīng)染色結(jié)果的影響因素。附：Feulgen 方法應(yīng)注意的幾個(gè)問題：對(duì)照切片的制做：進(jìn)行Feulgen 反應(yīng)時(shí), 一般要做一對(duì)照切片以便驗(yàn)證反應(yīng)結(jié)果。對(duì)照切片應(yīng)不經(jīng)水解直接放在schiff 劑內(nèi)，且應(yīng)為負(fù)反應(yīng)。但需要注意的是，對(duì)照切片在schiff 試劑中最多不要超過1 h （ 即可)，時(shí)間過長(zhǎng)，試劑本身的酸性也會(huì)使DNA 水解，從而出現(xiàn)假的正反應(yīng)。固定劑的選擇：以前很多人認(rèn)為，選用的固定劑不應(yīng)含有醛基或含有氧化劑。后來發(fā)現(xiàn)含醛基或氧化劑的固定劑對(duì)反應(yīng)的專一性并沒有影響。實(shí)踐證明，一切好的組織學(xué)固定劑均適用于Feulgen 反應(yīng)。如Bhampy 固定劑、Helly 固定劑、Flemming 固定劑、OsO4 固定劑、Carnoy 固定劑、zenker 固定劑和BouinAller 固定劑。但在上述固定劑中，以O(shè)sO4 和Carnoy 效果較好，OsO4（1%%)是Feulgen反應(yīng)的理想固定劑，只是因OsO4 價(jià)錢較貴，故一般多采用Carnoy 固定液。在Feulgen 反應(yīng)中，不能單獨(dú)使用Bouin 定液，因?yàn)樗荈eulgen 反應(yīng)的最壞固定劑，但經(jīng)Aller 改進(jìn)后的BouinAller 固定液效果卻較好。水解時(shí)間：Feulgen 反應(yīng)通常用稀酸進(jìn)行水解，但水解的時(shí)間一定要適當(dāng)。如水解時(shí)間不夠, 反應(yīng)就會(huì)變?nèi)酰蝗缢鈺r(shí)間過長(zhǎng)。或水解地過于劇烈，則脫氧核糖也易掉下來，反應(yīng)也會(huì)減弱。適當(dāng)?shù)乃鈺r(shí)間一般為8~12min。但是水解時(shí)間長(zhǎng)短也要視標(biāo)本的類型（如厚薄等)、固定劑的性質(zhì)以及酸的濃度而定。Schiff 試劑的作用：Feulgen 反應(yīng)成功與否的一個(gè)非常關(guān)鍵的因素，就是schiff 試劑的質(zhì)量。有一大類試劑均稱為堿性品紅，它們實(shí)際上是由幾種產(chǎn)品分別組成的。因此只能選用注明“DNA 染色反應(yīng)用”的堿性品紅才行。此外，Schiff 試劑的配制方法也可影響DNA 的染色反應(yīng)。八、動(dòng)物細(xì)胞的基本形態(tài)觀察和細(xì)胞計(jì)數(shù)【目的要求】制備不同細(xì)胞的臨時(shí)制片，觀察、了解細(xì)胞的基本形態(tài)；掌握細(xì)胞計(jì)數(shù)方法?！净驹怼考?xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能相關(guān)是很多細(xì)胞的共同特點(diǎn)，在分化程度較高的細(xì)胞更為明顯，這種合理性是生物漫長(zhǎng)進(jìn)化過程所形成的。例如：具有收縮機(jī)能的肌細(xì)胞伸展為細(xì)長(zhǎng)形；具有感受刺激和傳導(dǎo)沖動(dòng)機(jī)能的神經(jīng)細(xì)胞有長(zhǎng)短不一的樹枝狀突起；游離的血細(xì)胞為圓形、橢圓形或圓餅形。不論細(xì)胞的形狀如何，細(xì)胞的結(jié)構(gòu)一般分為三大部分：細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。但也有例外。例如：哺乳類紅細(xì)胞成熟時(shí)細(xì)胞核消失。細(xì)胞計(jì)數(shù)一般用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，按白細(xì)胞計(jì)數(shù)方法進(jìn)行計(jì)數(shù)。細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，先將培養(yǎng)細(xì)胞或血細(xì)胞稀釋成細(xì)胞懸液，然后將細(xì)胞懸液滴入細(xì)胞計(jì)數(shù)板內(nèi)，計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)室四大格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。根據(jù)計(jì)數(shù)室的容積及稀釋倍數(shù)，即可計(jì)算出細(xì)胞濃度。【實(shí)驗(yàn)用品】材料雞一只。器材和儀器顯微鏡、載片、蓋片、吸水紙、手術(shù)器材、解剖盤、血球計(jì)數(shù)板、小平皿、牙簽。試劑％生理鹽水、Ringer 氏液。【方法步驟】制備10%的雞血細(xì)胞懸液。雞血涂片的制備與觀察取雞血懸液，靠近一端滴在載片上．將另一載片的一端呈45176。角緊貼在血滴的前緣，均勻用力向前推，使血液在載片上形成均勻的薄層 (圖l－1)。晾干，顯微鏡下觀察。圖1—1 血涂片的制備細(xì)胞計(jì)數(shù)1）制備雞紅細(xì)胞懸液：用Ringer 液按確定的稀釋倍數(shù)制成雞紅細(xì)胞懸液；2）熟悉血細(xì)胞計(jì)數(shù)板：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板呈長(zhǎng)方形，有2 個(gè)計(jì)數(shù)室。每個(gè)計(jì)數(shù)室分為9 個(gè)大正方格，每個(gè)大格邊長(zhǎng)為1mm ， ， 及每大格的容積為1mm1mm=。四角的每個(gè)大格被分為16 個(gè)中格；中央的大格被分為25 個(gè)中格，中央的每個(gè)中格又被分為16 個(gè)小格；3）滴片：每人取1 付血細(xì)胞計(jì)數(shù)板及1 張蓋玻片，用布將蓋玻片擦凈，把蓋玻片蓋在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板槽上，然后用吸管將制備好的雞血細(xì)胞懸液混勻，吸取血細(xì)胞懸液，滴1 滴于血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的蓋玻片一側(cè)邊緣，使細(xì)胞懸液自然流入計(jì)數(shù)室內(nèi)。注意血細(xì)胞懸液不可滴的過多，如溢出或蓋玻片內(nèi)有氣泡必須重做，否則將影響計(jì)數(shù)結(jié)果。該吸管加完樣后不能再用；4）計(jì)數(shù)：在低倍鏡下按圖計(jì)算計(jì)數(shù)板的四角大方格（每個(gè)大方格又分16 個(gè)小方格）內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。計(jì)數(shù)時(shí)，只計(jì)數(shù)完整的細(xì)胞，若聚成一團(tuán)的細(xì)胞則按一個(gè)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。數(shù)出計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)室四角四大格中的細(xì)胞數(shù)，如細(xì)胞壓在格線上時(shí)，數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。二次重復(fù)計(jì)數(shù)不應(yīng)超過177。5％。【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】雞血涂片的制備與觀察顯微鏡觀察可見雞紅細(xì)胞為橢球形，有核。白細(xì)胞數(shù)目少，為圓形。細(xì)胞濃度計(jì)算 將四大格的細(xì)胞總數(shù)除以4，得出平均每大格的細(xì)胞數(shù)，乘以10000 即為1000mm3（1ml）。因此，不同稀釋倍數(shù)細(xì)胞懸液的細(xì)胞濃度可用下式計(jì)算：細(xì)胞濃度（細(xì)胞數(shù)／ml）＝（四大格的細(xì)胞數(shù)／4）10000稀釋倍數(shù)【實(shí)驗(yàn)報(bào)告】繪圖：顯微鏡下觀察的各種細(xì)胞形態(tài)計(jì)數(shù)每毫升細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)（注意單位：個(gè)/ml）為什么細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，細(xì)胞懸液逸出凹槽外或有氣泡時(shí)要重做？附： 必須注意的問題——生物繪圖方法繪圖是生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告的一種重要形式，其基本要求如下：準(zhǔn)備好3H 鉛筆、橡皮、刀、尺子及繪圖紙，將繪圖紙放在觀察物的有邊、紙下不要墊書或紙張。繪圖時(shí)，特別注意觀察物的形狀、各部分的位置、比例和毗鄰關(guān)系。圖的位置、大小要適宜，圖占報(bào)告紙左上方2/3 的面積，并考慮注字的位置。觀察清楚后，選擇典型的細(xì)胞或組織，左眼看顯微鏡，右眼配合右手，先用鉛筆在紙上輕輕描出輪廓，使形狀正確，然后再用清晰的線條繪出，線條粗細(xì)要均勻不要重復(fù)。用圓小點(diǎn)表示明暗和立體感，點(diǎn)的大小要均勻，不能涂陰影。圖繪好后，要在圖的右側(cè)注明各部分結(jié)構(gòu)名稱，引線要直而平行，長(zhǎng)短適度，各引線不能交叉，各線右端上下對(duì)齊，注字要用正楷，不能潦草，要自左向右寫。每一個(gè)圖下面要注明圖的名稱、放大倍數(shù)。繪圖紙上所有注字（包括姓名、實(shí)驗(yàn)日期、題目等）均用鉛筆書寫，不能用其他筆寫。九、細(xì)胞凝集反應(yīng)和細(xì)胞膜通透性的觀察【目的要求】1．了解細(xì)胞糖被的特點(diǎn)和功能，了解植物凝集素的作用2．了解細(xì)胞膜的滲透性及各類物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的速度【基本原理】細(xì)胞膜表面的有分支狀糖外被，細(xì)胞間的聯(lián)系、細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化、免疫反應(yīng)、腫瘤的發(fā)生等都和細(xì)胞表面的分支狀糖分子有關(guān)。凝集素（lectin）是一類含糖并能與糖分子專一結(jié)合的蛋白質(zhì)，它具有凝集細(xì)胞和刺激細(xì)胞分裂的作用。凝集素使細(xì)胞凝集是由于它與細(xì)胞表面的糖分子連接，在細(xì)胞表面間形成“橋”的結(jié)果，加入與凝集素互補(bǔ)的糖可以抑制細(xì)胞的凝集。細(xì)胞膜是細(xì)胞與外界環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)交換的結(jié)構(gòu)?？蛇x擇性地讓某些物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞，各種物質(zhì)出入細(xì)胞的方式是不同的，水是生物界最普遍的溶劑，水分子可以按照物質(zhì)濃度梯度從滲透壓低的一側(cè)通過細(xì)胞膜向滲透壓高的一側(cè)擴(kuò)散，以至于在高滲環(huán)境中，動(dòng)物細(xì)胞會(huì)失水而收縮；在低滲環(huán)境中，動(dòng)物細(xì)胞會(huì)吸水膨脹直至破裂。本實(shí)驗(yàn)將紅細(xì)胞分別放于各種等滲溶液中，由于紅細(xì)胞膜對(duì)不同溶質(zhì)的通透性不同，使得不同溶質(zhì)透入細(xì)胞的速度相差很大，有些溶質(zhì)甚至不能透入細(xì)胞。當(dāng)溶質(zhì)分子進(jìn)入細(xì)胞后可引起滲透壓升高，水分子隨即進(jìn)入細(xì)胞，使細(xì)胞膨脹，當(dāng)膨脹到一定程度時(shí)，紅細(xì)胞膜會(huì)發(fā)生破裂，血紅素溢出，此時(shí)，原來不透明的紅細(xì)胞懸液突然變成紅色透明的血紅蛋白溶液，這種現(xiàn)象稱為紅細(xì)胞溶血。由于各種溶質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的速度不同，所以不同的溶質(zhì)誘導(dǎo)紅細(xì)胞溶血的時(shí)間不同，相反可通過測(cè)量溶血時(shí)間來估計(jì)細(xì)胞膜對(duì)各種物質(zhì)通透性的大小。【實(shí)驗(yàn)用品】材料土豆塊莖，雞（采血）器材和儀器顯微鏡、載片、蓋片、天平、滴管、小燒杯、移液管、離心管、試管和試管架。3．試劑％生理鹽水、2％雞紅細(xì)胞、PBS 緩沖液、Alsever 溶液、 氯化鈉、 氯化銨、 硝酸鈉、 草酸銨、 硫酸鈉、 葡萄糖、 甘油、 乙醇、?！痉椒ú襟E】制備土豆凝集素液和紅細(xì)胞懸浮液，制備無(wú)血清的雞紅細(xì)胞懸液，使凝集素液和紅細(xì)胞懸液混合，靜置后，在光鏡（低倍）下觀察凝集素使紅細(xì)胞凝集的現(xiàn)象。（以PBS 緩沖液加2％血細(xì)胞作對(duì)照實(shí)驗(yàn)）[土豆凝集素的制備：稱取土豆去皮塊莖2g , 加10 mL PBS緩沖液，浸泡2h（浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素） , 載玻片上滴一滴土豆凝集素,再滴一滴2％紅細(xì)胞液,充分混勻靜置20 min , 低倍顯微鏡下觀察血球凝集現(xiàn)象。]觀察10%的雞紅細(xì)胞懸液，可見該懸液為一種不透明的紅色液體觀察溶血現(xiàn)象 取一支試管，再加入4ml 蒸餾水， 雞紅細(xì)胞懸液，混勻后注意觀察溶液顏色的變化，可見溶液由不透明的紅色變成透明的紅色液體（可將試管貼靠在書上，隔著試管看書中的字，如發(fā)現(xiàn)溶血?jiǎng)t文字可被看清）。觀察雞紅細(xì)胞對(duì)不同物質(zhì)的通透性1）取一支試管， 的Nacl 溶液4ml， 雞紅細(xì)胞懸液，輕輕搖勻，用上述方法觀察是否出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，如出現(xiàn)溶血，記下發(fā)生溶血所需要的時(shí)間（從加入4ml 溶液算起）2）按上述方法分別加入下列9種溶液是否導(dǎo)致紅細(xì)胞溶血并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。① 氯化銨 ② 硝酸鈉 ③ 硫酸鈉 ④ 醋酸胺⑤ 草酸銨 ⑥ 葡萄糖 ⑦ 甘油 ⑧ 乙醇 ⑨ 丙酮【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】土豆凝集素能使雞紅細(xì)胞凝集，PBS 對(duì)照液中紅細(xì)胞分散均勻 對(duì)照組：未凝血 實(shí)驗(yàn)組：凝血細(xì)胞膜滲透性實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較和分析試管編號(hào)所加試劑和濃度是否溶血時(shí)間結(jié)果分