【文章內容簡介】 水解 實驗時，從冰箱取出預先準備好的大蒜根尖，分裝到若干個青霉素瓶中，用自來水洗3次，蒸餾水水洗3次，換1mol/L HCl洗一次，傾去，換入預熱60℃的1mol/L HCl 3ml，放入恒溫水浴鍋中在60177。℃下水解815分鐘（視材料而定，水解時間可以從8分鐘延長至30分鐘）。然后吸去熱1mol/L HCl，換入冷1mol/L HCl洗1次，再用蒸餾水將根尖洗3次。 水解是本實驗成敗的關鍵之一。重要的是溫度，應保持在60177?！嬷g。如果溫度過高或時間過長，造成水解過度，醣與醛基之間的鍵被破壞，醛基流失到水解液中；反之，不能出現潛在的醛基，都不能呈現顏色反應。 染色 吸凈水分，加入Schiff試劑避光染色40min~60min，用漂洗液漂洗2～3次，每次5min,然后經自來水流水沖洗，再用蒸餾水洗2次后準備壓片。 壓片法 取一根尖置于載玻片上，用刀片切下生長區(qū)部位（染成紫紅色），用拇指輕壓使細胞分散均勻，鏡檢。 對照組預先用5%三氯醋酸（90℃）處理15min，然后再依次進行實驗步驟2，3，4?！緦嶒灲Y果】細胞核中的DNA 呈鮮亮的紫紅色反應，它不但反應出DNA 存在的部位及其分布情況，而且還可從顏色反應的深淺，來判斷DNA 的相對含量。 小鼠肝切片Feulgen 染色【實驗報告】1．繪圖表示Feulgen 反應的染色結果。2．總結Feulgen 反應染色結果的影響因素。附：Feulgen 方法應注意的幾個問題：對照切片的制做：進行Feulgen 反應時, 一般要做一對照切片以便驗證反應結果。對照切片應不經水解直接放在schiff 劑內，且應為負反應。但需要注意的是，對照切片在schiff 試劑中最多不要超過1 h （ 即可)，時間過長，試劑本身的酸性也會使DNA 水解，從而出現假的正反應。固定劑的選擇：以前很多人認為，選用的固定劑不應含有醛基或含有氧化劑。后來發(fā)現含醛基或氧化劑的固定劑對反應的專一性并沒有影響。實踐證明，一切好的組織學固定劑均適用于Feulgen 反應。如Bhampy 固定劑、Helly 固定劑、Flemming 固定劑、OsO4 固定劑、Carnoy 固定劑、zenker 固定劑和BouinAller 固定劑。但在上述固定劑中，以OsO4 和Carnoy 效果較好，OsO4（1%%)是Feulgen反應的理想固定劑，只是因OsO4 價錢較貴，故一般多采用Carnoy 固定液。在Feulgen 反應中，不能單獨使用Bouin 定液，因為它是Feulgen 反應的最壞固定劑，但經Aller 改進后的BouinAller 固定液效果卻較好。水解時間：Feulgen 反應通常用稀酸進行水解，但水解的時間一定要適當。如水解時間不夠, 反應就會變弱；如水解時間過長。或水解地過于劇烈，則脫氧核糖也易掉下來，反應也會減弱。適當的水解時間一般為8~12min。但是水解時間長短也要視標本的類型（如厚薄等)、固定劑的性質以及酸的濃度而定。Schiff 試劑的作用：Feulgen 反應成功與否的一個非常關鍵的因素，就是schiff 試劑的質量。有一大類試劑均稱為堿性品紅，它們實際上是由幾種產品分別組成的。因此只能選用注明“DNA 染色反應用”的堿性品紅才行。此外，Schiff 試劑的配制方法也可影響DNA 的染色反應。八、動物細胞的基本形態(tài)觀察和細胞計數【目的要求】制備不同細胞的臨時制片，觀察、了解細胞的基本形態(tài)；掌握細胞計數方法?！净驹怼考毎男螒B(tài)結構與功能相關是很多細胞的共同特點，在分化程度較高的細胞更為明顯，這種合理性是生物漫長進化過程所形成的。例如：具有收縮機能的肌細胞伸展為細長形；具有感受刺激和傳導沖動機能的神經細胞有長短不一的樹枝狀突起；游離的血細胞為圓形、橢圓形或圓餅形。不論細胞的形狀如何，細胞的結構一般分為三大部分：細胞膜、細胞質和細胞核。但也有例外。例如：哺乳類紅細胞成熟時細胞核消失。細胞計數一般用血細胞計數板，按白細胞計數方法進行計數。細胞計數時，先將培養(yǎng)細胞或血細胞稀釋成細胞懸液，然后將細胞懸液滴入細胞計數板內，計數計數板上計數室四大格內的細胞數。根據計數室的容積及稀釋倍數，即可計算出細胞濃度?！緦嶒炗闷贰坎牧想u一只。器材和儀器顯微鏡、載片、蓋片、吸水紙、手術器材、解剖盤、血球計數板、小平皿、牙簽。試劑％生理鹽水、Ringer 氏液?！痉椒ú襟E】制備10%的雞血細胞懸液。雞血涂片的制備與觀察取雞血懸液，靠近一端滴在載片上．將另一載片的一端呈45176。角緊貼在血滴的前緣，均勻用力向前推，使血液在載片上形成均勻的薄層 (圖l－1)。晾干，顯微鏡下觀察。圖1—1 血涂片的制備細胞計數1）制備雞紅細胞懸液：用Ringer 液按確定的稀釋倍數制成雞紅細胞懸液；2）熟悉血細胞計數板：血細胞計數板呈長方形，有2 個計數室。每個計數室分為9 個大正方格，每個大格邊長為1mm ， ， 及每大格的容積為1mm1mm=。四角的每個大格被分為16 個中格；中央的大格被分為25 個中格，中央的每個中格又被分為16 個小格；3）滴片：每人取1 付血細胞計數板及1 張蓋玻片，用布將蓋玻片擦凈，把蓋玻片蓋在血細胞計數板槽上，然后用吸管將制備好的雞血細胞懸液混勻，吸取血細胞懸液，滴1 滴于血細胞計數板的蓋玻片一側邊緣，使細胞懸液自然流入計數室內。注意血細胞懸液不可滴的過多，如溢出或蓋玻片內有氣泡必須重做，否則將影響計數結果。該吸管加完樣后不能再用；4）計數：在低倍鏡下按圖計算計數板的四角大方格（每個大方格又分16 個小方格）內的細胞數。計數時，只計數完整的細胞，若聚成一團的細胞則按一個細胞進行計數。數出計數板上計數室四角四大格中的細胞數，如細胞壓在格線上時，數上不數下，數左不數右。二次重復計數不應超過177。5％?！緦嶒灲Y果】雞血涂片的制備與觀察顯微鏡觀察可見雞紅細胞為橢球形，有核。白細胞數目少，為圓形。細胞濃度計算 將四大格的細胞總數除以4，得出平均每大格的細胞數，乘以10000 即為1000mm3（1ml）。因此，不同稀釋倍數細胞懸液的細胞濃度可用下式計算：細胞濃度（細胞數／ml）＝（四大格的細胞數／4）10000稀釋倍數【實驗報告】繪圖：顯微鏡下觀察的各種細胞形態(tài)計數每毫升細胞懸液中的細胞數（注意單位：個/ml）為什么細胞計數時，細胞懸液逸出凹槽外或有氣泡時要重做？附： 必須注意的問題——生物繪圖方法繪圖是生物實驗報告的一種重要形式，其基本要求如下：準備好3H 鉛筆、橡皮、刀、尺子及繪圖紙，將繪圖紙放在觀察物的有邊、紙下不要墊書或紙張。繪圖時，特別注意觀察物的形狀、各部分的位置、比例和毗鄰關系。圖的位置、大小要適宜，圖占報告紙左上方2/3 的面積，并考慮注字的位置。觀察清楚后，選擇典型的細胞或組織，左眼看顯微鏡，右眼配合右手，先用鉛筆在紙上輕輕描出輪廓，使形狀正確，然后再用清晰的線條繪出，線條粗細要均勻不要重復。用圓小點表示明暗和立體感，點的大小要均勻，不能涂陰影。圖繪好后，要在圖的右側注明各部分結構名稱，引線要直而平行，長短適度，各引線不能交叉，各線右端上下對齊，注字要用正楷，不能潦草，要自左向右寫。每一個圖下面要注明圖的名稱、放大倍數。繪圖紙上所有注字（包括姓名、實驗日期、題目等）均用鉛筆書寫，不能用其他筆寫。九、細胞凝集反應和細胞膜通透性的觀察【目的要求】1．了解細胞糖被的特點和功能，了解植物凝集素的作用2．了解細胞膜的滲透性及各類物質進入細胞的速度【基本原理】細胞膜表面的有分支狀糖外被，細胞間的聯系、細胞的生長和分化、免疫反應、腫瘤的發(fā)生等都和細胞表面的分支狀糖分子有關。凝集素（lectin）是一類含糖并能與糖分子專一結合的蛋白質，它具有凝集細胞和刺激細胞分裂的作用。凝集素使細胞凝集是由于它與細胞表面的糖分子連接，在細胞表面間形成“橋”的結果，加入與凝集素互補的糖可以抑制細胞的凝集。細胞膜是細胞與外界環(huán)境進行物質交換的結構?？蛇x擇性地讓某些物質進出細胞，各種物質出入細胞的方式是不同的，水是生物界最普遍的溶劑，水分子可以按照物質濃度梯度從滲透壓低的一側通過細胞膜向滲透壓高的一側擴散，以至于在高滲環(huán)境中，動物細胞會失水而收縮；在低滲環(huán)境中，動物細胞會吸水膨脹直至破裂。本實驗將紅細胞分別放于各種等滲溶液中，由于紅細胞膜對不同溶質的通透性不同，使得不同溶質透入細胞的速度相差很大，有些溶質甚至不能透入細胞。當溶質分子進入細胞后可引起滲透壓升高，水分子隨即進入細胞，使細胞膨脹，當膨脹到一定程度時，紅細胞膜會發(fā)生破裂，血紅素溢出，此時，原來不透明的紅細胞懸液突然變成紅色透明的血紅蛋白溶液，這種現象稱為紅細胞溶血。由于各種溶質進入細胞的速度不同，所以不同的溶質誘導紅細胞溶血的時間不同，相反可通過測量溶血時間來估計細胞膜對各種物質通透性的大小。【實驗用品】材料土豆塊莖，雞（采血）器材和儀器顯微鏡、載片、蓋片、天平、滴管、小燒杯、移液管、離心管、試管和試管架。3．試劑％生理鹽水、2％雞紅細胞、PBS 緩沖液、Alsever 溶液、 氯化鈉、 氯化銨、 硝酸鈉、 草酸銨、 硫酸鈉、 葡萄糖、 甘油、 乙醇、?！痉椒ú襟E】制備土豆凝集素液和紅細胞懸浮液，制備無血清的雞紅細胞懸液，使凝集素液和紅細胞懸液混合，靜置后，在光鏡（低倍）下觀察凝集素使紅細胞凝集的現象。（以PBS 緩沖液加2％血細胞作對照實驗）[土豆凝集素的制備：稱取土豆去皮塊莖2g , 加10 mL PBS緩沖液，浸泡2h（浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素） , 載玻片上滴一滴土豆凝集素,再滴一滴2％紅細胞液,充分混勻靜置20 min , 低倍顯微鏡下觀察血球凝集現象。]觀察10%的雞紅細胞懸液，可見該懸液為一種不透明的紅色液體觀察溶血現象 取一支試管，再加入4ml 蒸餾水， 雞紅細胞懸液，混勻后注意觀察溶液顏色的變化，可見溶液由不透明的紅色變成透明的紅色液體（可將試管貼靠在書上，隔著試管看書中的字，如發(fā)現溶血則文字可被看清）。觀察雞紅細胞對不同物質的通透性1）取一支試管， 的Nacl 溶液4ml， 雞紅細胞懸液，輕輕搖勻，用上述方法觀察是否出現溶血現象，如出現溶血，記下發(fā)生溶血所需要的時間（從加入4ml 溶液算起）2）按上述方法分別加入下列9種溶液是否導致紅細胞溶血并記錄實驗結果。① 氯化銨 ② 硝酸鈉 ③ 硫酸鈉 ④ 醋酸胺⑤ 草酸銨 ⑥ 葡萄糖 ⑦ 甘油 ⑧ 乙醇 ⑨ 丙酮【實驗結果】土豆凝集素能使雞紅細胞凝集，PBS 對照液中紅細胞分散均勻 對照組：未凝血 實驗組：凝血細胞膜滲透性實驗結果比較和分析試管編號所加試劑和濃度是否溶血時間結果分