細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)方法驗(yàn)證方案(編輯修改稿)
2024-12-15 10:35 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水 反應(yīng)結(jié)果 保溫時(shí)間（ —— ） 內(nèi)毒素濃度 EU/ml（稀釋倍 數(shù)） 序號(hào) 2λ 1 2 3 4 λ 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 陰性對(duì)照 1 2 結(jié)果計(jì)算 λ c = lg1 (∑ X/4)= 結(jié)果判斷 當(dāng)λ c 在 ～ 2λ（包括 2λ）時(shí)判定該批鱟試劑靈 敏度復(fù)核合格，可用于干擾實(shí)驗(yàn)和供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查同時(shí)可以進(jìn)入下一步驗(yàn)證 檢驗(yàn)人員： 日期 復(fù)合人員： 日期 確認(rèn)結(jié)果是否符合要求 是□ 否 □ 檢查人： 日期： 確認(rèn)人： 日期： ： 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果 一次 二次 三次 結(jié)果計(jì)算 λc = λc = λc= 結(jié)論 確認(rèn)結(jié)果是否符合要求 ： 是 □ 否 □ 檢查人 。 日期： 確認(rèn)人： 日期 ：同法操作檢查三次試驗(yàn)記錄試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。目的：初步確定供試品的最大不干擾濃度或最小稀釋倍數(shù)為正式干擾試驗(yàn)提供依據(jù)。是檢驗(yàn)在某一濃度下的 供試品對(duì)于鱟試劑與內(nèi)毒素的反應(yīng)有無(wú)干擾作用。使用的供試品溶液應(yīng)為未檢驗(yàn)出內(nèi)毒素且不超過(guò)所使用的鱟試劑的最大有效稀釋倍數(shù)的溶液。 ，但最大的的稀釋 倍數(shù)不得超過(guò)MVD=CL/λ(λ 為現(xiàn)在市面最高靈敏度，這里選公司能買(mǎi)到的最高靈敏度 ) 。 每一稀釋倍數(shù)下做 2只供試品管和 2只供試品陽(yáng)性對(duì)照（即用該濃度的供試品稀釋液將內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品制成 2λ 濃度）。另取 2只加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水做為陰性對(duì)照， 2只加 入 2λ 濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液作為陽(yáng)性對(duì)照。供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液的制備舉例制備稀釋 4倍的供試品陽(yáng)性對(duì)照液方法，取 濃度為 /ml 的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液 + 稀釋倍數(shù)為 2的供試品稀釋液 制得 含 2λEU/ml 內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋倍數(shù)為 4的供試品稀釋液。保溫（ 60min）177。2min 后觀察，并記錄結(jié)果。 。 當(dāng)系列濃度中出現(xiàn)供試品溶液 2管為陰性，供試品陽(yáng)性對(duì)照 2管為陽(yáng)性時(shí)。認(rèn)為供試品在該濃度下不干擾試驗(yàn)，此稀釋倍數(shù)即為最小不干擾 倍數(shù)，即可選擇該稀釋倍數(shù)進(jìn)行正式干擾試驗(yàn)。當(dāng)系列濃度中所有濃度的供試品管都不為陰性，或供試品陽(yáng)性對(duì)照管不為陽(yáng)性時(shí)，說(shuō)明該供試品對(duì)內(nèi)毒素與鱟試劑的反應(yīng)村子啊存在干擾，則應(yīng)對(duì)供試品進(jìn)行更大倍數(shù)的稀釋（不得超過(guò) MVD，）或者 通過(guò)其他 方式排出干擾。為確保所選則的處理方法能不有效的排出干擾且不會(huì)是內(nèi)毒素失去活性，要使用預(yù)先添加了標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素在經(jīng)過(guò)處理的供試品溶液進(jìn)行干擾試驗(yàn)。當(dāng)供試品的內(nèi)毒素限值單位為ＥＵ／ｍｇ或ＥＵ／Ｕ 時(shí)。應(yīng)將做小不干擾稀釋倍數(shù)換算成最大不干濃度（即該稀釋倍數(shù)下溶液的濃度）以ｍｇ／ｍｌ或Ｕ／ｍｌ 表示。 。注射用水限值為含內(nèi) 毒素量不得過(guò)。按ＭＶＤ＝ＣＬ／ λ 計(jì)算出靈敏度為 列進(jìn)行檢驗(yàn)，用靈敏度為 。試驗(yàn)結(jié)果如下表： 第一次稀釋倍數(shù) 原液 倍 倍 倍 觀察供試品溶液 +或 觀察供試品陽(yáng)性對(duì)照 +或 第二次 稀釋倍數(shù) 觀察供試品溶液+或 觀察供試品陽(yáng)性對(duì)照 +或 觀察供試品溶液+或 觀察供試品陽(yáng)性對(duì)照 +或 結(jié)論 確認(rèn)結(jié)果是否符合要求 ： 是 □ 否 □ 檢查人 。 日期： 確認(rèn)人： 日期 結(jié)論 確認(rèn)結(jié)果是否符合要求 ： 是 □ 否 □ ：目的是檢驗(yàn)?zāi)骋粷舛认碌墓┰嚻穼?duì)于鱟試劑與內(nèi)毒素的反應(yīng)物干擾作用。試驗(yàn)重復(fù)三次。 . 操作方法： 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照溶液取 1支細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品，用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋成 4個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液即 2λ 、 λ 、 、 （方法同 ）。 ：將供試品稀釋至預(yù)實(shí)驗(yàn)中確定的不干擾稀釋倍數(shù)，再用此稀釋液將 4個(gè)濃度即 2λ 、 λ 、 、 的含內(nèi)毒素的供試品溶液。這里以注射用水來(lái)進(jìn)行試驗(yàn) ：取規(guī)格為 ，輕彈壁使粉末落入瓶底，用砂輪在瓶頸輕輕劃 痕， 75%酒精棉球擦拭后啟開(kāi)備用，防止玻璃屑落入瓶?jī)?nèi)。每支加入 檢查用水溶解，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)瓶壁，使內(nèi)容物充分溶解，避免產(chǎn)生氣泡。 18支（管）放在試管架上，排成 5列， 4列 4支（管），1列 2支（管）。其中的 4支 4列每列每支分別加入 的 、 、 、 的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，另一列 2支（管）加入 檢查用水作為陰性對(duì)照。將另外 18支（管）鱟試劑放在試管架上，排成 5列， 4列 4支（管）， 1列 2支（管）。其中的 4支 4列每列每支分別加 入 的含
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