藏藥大黃中脂肪酸含量的高靈敏測定doc(編輯修改稿)
2025-08-11 05:54 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 。除去細(xì)根，刮去外皮，切瓣或段，繩穿成串干燥或直接干燥。中藥大黃具有攻積滯、清濕熱、瀉火、涼血、祛瘀、解毒等功效。采用柱前衍生高效液相色譜熒光檢測法(HPLCFLD)分析了藏藥大黃中的游離脂肪酸。用熒光衍生試劑2(11H苯[a]咔唑)乙基對(duì)甲苯磺酸酯(BCETS)作為柱前衍生化試劑對(duì)21種脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行衍生,經(jīng)梯度洗脫實(shí)現(xiàn)了21種游離脂肪酸BCETS衍生物的完全分離,使用外標(biāo)法定量,建立了同時(shí)測定21種脂肪酸絕對(duì)含量的方法,對(duì)藏藥大黃中的游離脂肪酸進(jìn)行了分析。關(guān)鍵詞：高效液相色譜 BCETS 熒光 大黃 脂肪酸Abstract：Tibetan medicine rhubarb is a variety of polygonaceae rhubarb es of perennial plants and is also the name of the Chinese medicinal China39。s literature, Rhubarb often refers to the horseshoe China,Rhubarb is mainly for medicinal, but in Europe and the Middle East, they often refers to several other edible rhubarb stem, delicate fragrance, taste bitter and micro astringent, stick of chewing teeth, has the feeling of leaf wilt or spring before germination of fine root and scrape off the skins and cut lobe or segment, rope wear string dry or dry directly. Medicine rhubarb could attack stagnant, hot and humid, purging fire, cooling blood to remove blood stasis, detoxicating and so on. Using precolumn derivatization high performance liquid chromatography with fluorescence detection ( HPLCFLD ) analysis of free fatty acids in Tibetan medicine fluorescence derivatization reagent 2 (11 h benzene [a] carbazole) ethyl ptoluene sulfonic acid ester( BCETS ) as a precolumn derivatization reagents to derive 21 kinds of fatty acid which are in gradient elution separation between the 21 kinds of free fatty acid derivatives of external standard a method for the simultaneous determination of 21 kinds of fatty acids of absolute content, and free fatty acids in Tibetan medicine rhubarb is analyzed.Keywords: High efficiency liquid chromatography BCETS Fluorescence Rheum officinale Aliphatic acid1 實(shí)驗(yàn)原理 電子激發(fā)態(tài)的多重態(tài)用2S+l表示,S為電子自旋量子數(shù)的代數(shù)和,其數(shù)值為0或1。我們用符號(hào)S0、Sl和S2分別表示分子的基態(tài)、第一和第二激發(fā)單重態(tài),Tl和T2分別表示第一和第二電子激發(fā)三重態(tài)。處于S1電子態(tài)的激發(fā)分子,其分子內(nèi)的去活化有如下幾種途徑:(1)發(fā)生S1 →S0任何振動(dòng)能級(jí)上的輻射躍遷而伴隨熒光現(xiàn)象(2)發(fā)生S1 →S0任何振動(dòng)能級(jí)上的內(nèi)轉(zhuǎn)化過程(3)發(fā)生S1→T1的體系間的竄躍(即亞穩(wěn)態(tài)的三線態(tài)),處于Tl三線態(tài)的較高的振動(dòng)能級(jí)上的激發(fā)分子發(fā)生振動(dòng)松弛降低到Tl態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)上(T1(o))(4)發(fā)生T1(0)→S0任何振動(dòng)能級(jí)上的輻射躍遷而伴隨磷光現(xiàn)象(5)發(fā)生Tl(0)→S0任何振動(dòng)能級(jí)上的體系間竄躍由以上可知,激發(fā)態(tài)分子發(fā)生熒光時(shí)所放出的能量比分子被激發(fā)時(shí)所吸收的能量小,所以熒光的發(fā)射波長通常比激發(fā)波長稍微長些。熒光的產(chǎn)生決定于第一電子單線激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)與基態(tài)的能量差異,而與分子原來被激發(fā)到哪個(gè)能級(jí)無關(guān)。因此熒光發(fā)射光譜通常與激發(fā)波長無關(guān)。 BCETS的合成 合成1,2benzocarbazole9ethylptoluenesulfonate（BCETS）合成過程如圖1。圖1 BCETS的合成機(jī)理圖 BCETS在乙腈或甲醇的熒光激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為279 nm和380 nm。 2 實(shí)驗(yàn)部分 儀器與試劑 1100型高效液相色譜(美國Agilent公司)配備四元梯度泵,在線真空脫氣機(jī),熒光檢測器,自動(dòng)進(jìn)樣器。 Eclipse XDBC8色譜柱(150 mm,5Lm)。KQ100DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器公司)。2(11H苯[a]咔唑)乙基對(duì)甲苯磺酸酯, 21種脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)品,色譜純乙腈,其他試劑均為分析純,超純水制備系統(tǒng)。N,N二甲基甲酰胺(DMF)經(jīng)減壓蒸餾后使用。 實(shí)驗(yàn)方法 HPLC標(biāo)準(zhǔn)液制備 準(zhǔn)確取定量脂肪酸標(biāo)品,用色譜純乙腈配成1102mol/L的溶液(長鏈脂肪酸需加入少量DMF作為助溶劑)。稱取適量BCETS純品(純度99% )用DMF定容至10 mL,。低濃度的脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)液(1104mol/L)用色譜純乙腈稀釋而成。 HPLC標(biāo)品衍生及標(biāo)準(zhǔn)曲線制作原理 BCETS對(duì)脂肪酸的衍生按如下方法進(jìn)行:向盛有10 mg無水K2CO3的2mL安培瓶中依次加入280μL DMF,40μL混合脂肪酸(1104mol/L), 80μL衍生試劑溶液(5103mol/L),封口后于90℃恒溫水浴下振蕩反應(yīng)30 min反應(yīng)完畢。用該衍生液中脂肪酸標(biāo)品進(jìn)樣10μL做液相色譜熒光分析,(稀釋液為ACN/DMF=1:1,V/V)并進(jìn)樣測定,~,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線得到BCETS對(duì)21種脂肪酸的線
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