【文章內(nèi)容簡介】 下降引發(fā)的感染，長效GMCSFNeulasta一個化療療程使用一次，醫(yī)生和患者接受程度很高，市場份額增長將一步加快。Enbrel近5年增長幅度較大，但會受到抗體藥物的有力挑戰(zhàn)。α干擾素與利巴韋林聯(lián)合治療慢性病毒性肝炎療效顯著[10，12]，在獲得肝炎大國日本批準后，其必會有更大的增長空間。明年，NovoSeven可望成為“重磅炸彈”，會帶領(lǐng)重組血漿蛋白使整體市場份額格局有較大調(diào)整。其他類重組藥物近5年內(nèi)不會形成很大市場。圖3：2001和2005年重組藥物分布比例的變化（左圖為2001年）。二、研發(fā)趨勢重組藥物的迅速發(fā)展有著必然性，但要持續(xù)發(fā)展，有幾個問題必須解決或優(yōu)化，包括生產(chǎn)載體與產(chǎn)量、基因工程改造和翻譯后修飾以及用藥途徑。生產(chǎn)載體與產(chǎn)量生產(chǎn)能力不足已經(jīng)成為重組藥物發(fā)展的瓶頸。以Enbrel為例，在1998年上市6個月內(nèi)僅美國銷售就超過對全球整年需求的預(yù)計[27]，生產(chǎn)規(guī)模缺口很大。又如，HIV蛋白微球（microbicides）在局部使用可以防止HIV傳播，但至今未進入臨床研究，原因也是生產(chǎn)量不夠[28]。還有很多藥物不僅發(fā)展中國家用不上，即便是發(fā)達國家也難以使用，估計有80%的血友病患者無藥可用，主要是生產(chǎn)能力不足。生產(chǎn)能力不足也導(dǎo)致其價格不菲。哺乳動物細胞和大腸桿菌（）是上市重組藥物最主要的生產(chǎn)載體（見圖4）。，如胰島素、生長激素、β干擾素和白細胞介素等。糖蛋白重組藥物除剛批準上市的ATryn以外，全部在哺乳動物細胞中表達。Activase是第一個由哺乳動物細胞表達的上市重組藥物，Epogen是第一個由哺乳動物細胞表達的“重磅炸彈”藥。CHO細胞是最為常用的生產(chǎn)載體之一，其糖基化最近似人的糖基化結(jié)構(gòu)，但糖基化產(chǎn)物是不均一的混合物。BHK細胞是第二常用的，另外，NSO、HEK293和人視網(wǎng)膜細胞表達的蛋白也獲得過批準。目前，哺乳動物細胞的產(chǎn)量亟待提高。上個世紀80年代，培養(yǎng)細胞密度最大達到2X106/ml，生產(chǎn)期7天，特異產(chǎn)物量為50mg/L。2004年的數(shù)據(jù)顯示，細胞密度最大可達到10X106/ml，有效表達時間達到3周，表達量接近5g/L，是1980s的100倍[29]，現(xiàn)在世界上最大的細胞發(fā)酵罐達到2萬升。哺乳動物細胞生產(chǎn)體系還需要解決的其他問題包括無血清培養(yǎng)基、延遲細胞凋亡和糖基化改進等[30]。酵母細胞雖然能夠糖基化，但是與人的糖基化有很大差別，為高度木糖醇型，表達的重組藥物在體內(nèi)半衰期很短并有潛在的免疫反應(yīng)。因此，該領(lǐng)域最可能取得的突破是“人源化”[31]，能生產(chǎn)均一、與人糖基化相同的糖蛋白，靶蛋白的產(chǎn)量可達到15g/L，是哺乳細胞的3倍，對哺乳動物細胞表達體系形成有力挑戰(zhàn)。圖4：上市重組藥物生產(chǎn)載體的比例。另一個正在取得突破的是植物表達體系（molecularfarming），植物糖基化免疫原性低，不易誘發(fā)過敏，但有可能改變一些糖蛋白的功能。目前已用于10多個重組藥物候選者的表達，其中1個已進入II期臨床[28]。該體系尚需解決的問題有，進一步提高表達產(chǎn)量、通過“人源化”改造糖基化結(jié)構(gòu)以及評價生產(chǎn)體系對環(huán)境的影響。已經(jīng)有了突破的轉(zhuǎn)基因動物生產(chǎn)方式至少在近期不會成為主流，其問題在于轉(zhuǎn)基因高等哺乳動物乳液蛋白糖基化仍有別于人，可能導(dǎo)致抗原性的變化。歐盟人用醫(yī)學(xué)制品委員會（CHMP）曾對ATryn上市提出過反對意見，理由是臨床例數(shù)太少。另外，美國Genzyme公司重組人酸性α葡萄糖酶（商品名Myozyme），原本在轉(zhuǎn)基因兔奶中生產(chǎn)，最終換為CHO細胞生產(chǎn)并獲得FDA批準上市[20]。轉(zhuǎn)基因雞的蛋青也可高水平表達重組藥物，但目前尚無任何一個轉(zhuǎn)基因雞制備的藥物被批準，主要問題仍是糖基化問題。當(dāng)然，如果藥物是口服和局部使用，抗原性問題將可能被忽視。重組藥物的基因工程改造和翻譯后修飾高度純化的重組蛋白與人內(nèi)源蛋白相同或高度相似，能避免出現(xiàn)免疫反應(yīng)。但有30%左右重組藥物是經(jīng)過基因工程改變或經(jīng)過其他手段進行翻譯后修飾的（圖5），也有文獻指出現(xiàn)有上市重組蛋白藥物種基因改造率達38%。改變蛋白的結(jié)構(gòu)的目的是為了優(yōu)化其藥代動力學(xué)，但又不能弱化其生物功能及產(chǎn)生新的抗原性。圖5：上市重組藥物的基因改造或翻譯后修飾的比例以重組人胰島素為例，有多種基因工程改變序列的產(chǎn)品，主要是B2B29和B30位的氨基酸改變。第一個經(jīng)基因工程改變的重組人胰島素為Lispro，是B2B29之間的顛換，使產(chǎn)生雙聚體和多聚體的可能性比野生型降低300倍[32]，可以更快地釋放入機體，起到速效的作用。缺失突變體也比較常見，ReFacto（重組凝血因子VIII，）就是缺失突變體[33]，對體內(nèi)出現(xiàn)因子VIII抑制物的血友病患者有較好療效。最近研究表明，Ankyrin重復(fù)（出現(xiàn)在erythrocytes等中，由33個氨基酸組成，有β折角反向平行和α螺旋）有助于加強重組藥物靶標識別、膜蛋白的朝向性和穩(wěn)定性[34]。但是，基因工程改變序列應(yīng)非常謹慎，一些很小的變化就可能導(dǎo)致蛋白構(gòu)象較大變化，從而誘發(fā)免疫反應(yīng)。翻譯后修飾主要包括脂化和PEG化。脂化是指將脂肪酸共價定點連接在蛋白上，從而增加藥物與血清白蛋白的親和力，延長在血清中的循環(huán)時間，發(fā)揮長效作用。PEG化分為單一PEG化和多點PEG化，通過降低血漿清除率、降低降解和受體介導(dǎo)的攝入，也能達到長效的目的，同時屏蔽抗原表位提高藥物的安全性。PEG干擾素α（Pegasys和PEGIntron）和PEGGCSF都是PEG化成功例子[35]。融合蛋白是指不同蛋白的不同功能域通過基因工程手段構(gòu)建成一個蛋白，希望具有雙功能或新的功能。雖然在這方面進行了大量的嘗試，但是，25年來僅有3個被批準，提示其難度之大。外源蛋白更是只有1個成功例子。給藥途徑的變革絕大多數(shù)重組藥物是注射給藥或靜脈途徑，僅有2個是噴霧劑，如Pulmozyme即是一種液體噴霧劑。有些疾病如糖尿病、腎衰性貧血等都需要長期使用藥物，注射或靜脈途徑的方式非常不便利，從而人們在給藥途徑上進行了大量的嘗試。2006年，終于有了重大突破，Pfizre和Avents的肺吸入型胰島素Exubera獲得批準在美國和歐洲上市。作為干粉，肺吸入性劑型比液體噴霧劑穩(wěn)定，劑量也好掌握。當(dāng)然，Exubera價格昂貴，以至英國有關(guān)部門拒絕使用，因為每周每個病人為此要多付出18美元。無論怎樣，這將改變眾多糖尿病患者的治療方式，減除他們的痛苦，也激發(fā)了其它藥物替代注射途徑的研究熱潮。我國有幾家科研機構(gòu)和公司研究透皮給藥和肺吸入給藥方式已經(jīng)取得了可喜的進展。但是，應(yīng)該指出，肺吸入型胰島素在1999年就已經(jīng)進入III期臨床研究[36]，至今才獲得批準，難度可想而知。在這方面，最大的技術(shù)難點是給藥劑量的精確度和藥物穩(wěn)定性等。三、重組藥物面臨的問題和挑戰(zhàn)有分析家把重組藥物市場喻為美麗的蝴蝶。但是，蝴蝶能飛多久呢？又會如何演變？換句話，重組藥物市場是否進入了成熟期？近10年再沒有出現(xiàn)對市場有較大影響的新產(chǎn)品類別，Ramp。D投入相對穩(wěn)定（生物公司20022004年連續(xù)3年的Ramp。D總額均穩(wěn)定在150億美元[37]）都是市場過于成熟的表現(xiàn)，將使持續(xù)發(fā)展受到限制，這是來自其自身的挑戰(zhàn)?？陀^分析其他治療技術(shù)的發(fā)展，我們認為重組藥物市場在近期不會遇上真正意義上的挑戰(zhàn)，但潛在的威脅確實存在。其他治療藥物或方法對重組藥物市場的挑戰(zhàn)重組藥物的很多適應(yīng)癥是由于單基因或明確的簡單原因造成的某個蛋白的缺乏或功能喪失，如血友病和I型糖尿病，非常適合基因治療。設(shè)想一下，如果能在人體內(nèi)可調(diào)控地表達重組藥物的基因，重組藥物市場將走向何處？基因治療在短期內(nèi)是否會較大地影響重組藥物市場？事實是，從1989年起，約1140個基因治療產(chǎn)品進入臨床研究，僅有少數(shù)幾個進入臨床III期研究[20]，而且沒有1個在美國和歐洲上市，并有許多因為臨床研究出現(xiàn)意外死亡而終止。目前，世界上只有我國2003年11月批準上市了以人p53基因為基礎(chǔ)的基因治療“今又生”。美國同類產(chǎn)品早已進入3期臨床，遲遲未能上市的原因是美國FDA批準的基礎(chǔ)是5年存活率的變化，而我國是以腫瘤變小為批準依據(jù)的?；蛑委熞谝韵玛P(guān)鍵領(lǐng)域取得突破才可能大批量的進入市場：目標基因傳送的特異性、穩(wěn)定性、可控性和抗原性?？梢灶A(yù)見，510年內(nèi)基因治療難以對重組藥物形成有力挑戰(zhàn)。干細胞誘導(dǎo)生成胰島（樣）細胞的方法也沒有得到預(yù)期的進展，走向臨床的路可能比基因治療更為遙遠。抗體藥