【文章內(nèi)容簡介】 功能。 本科生畢業(yè)論文設(shè)計題目 心肌缺血對大鼠腎皮質(zhì)內(nèi) NPRC表達(dá)的影響作者姓名 蔡飛云 指導(dǎo)教師 管振龍 所在學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院 專 業(yè) 生物科學(xué) 班級（屆） 2007級（2011屆）完成日期 2011 年 5 月 25 日目錄中文摘要、關(guān)鍵詞………………………………………………………Ⅲ引言……………………………………………………………………1材料與方法……………………………………………………………2 實驗動物及分組…………………………………………………2…………………………………………………………2 實驗動物來源……………………………………………………2 主要實驗儀器…………………………………………………2 實驗藥品………………………………………………………3 主要試劑的配制…………………………………………………3實驗步驟………………………………………………………………5 ……………………………………5 TTC檢測大鼠心肌梗塞面積（驗證結(jié)扎冠脈手術(shù)的成功率）…5 Western Blot 印記反應(yīng)…………………………………………5 蛋白提取并檢測濃度……………………………………………5 Western Blot具體操作過程……………………………………5 Western Blot印記反應(yīng)…………………………………………6 結(jié)果處理…………………………………………………………6實驗結(jié)果 ……………………………………………………………6 TTC染色結(jié)果………………………………………………………7 、Western Blot結(jié)果………………………………………………7 討論…………………………………………………………………9 小結(jié)…………………………………………………………………9 參考文獻 ………………………………………………………………10 英文摘要、關(guān)鍵詞 ……………………………………………………12 心肌缺血對大鼠腎皮質(zhì)內(nèi)NPRC表達(dá)的影響作 者：蔡飛云 指導(dǎo)教師：管振龍 教授摘要 目的 觀察心肌缺血對大鼠腎皮質(zhì)內(nèi)NPRC表達(dá)的影響，探討利鈉肽的相關(guān)作用。方法 健康成年雄性SD大鼠，麻醉后打開胸腔，結(jié)扎冠狀動脈左前降支，建立急性心肌缺血模型。分別按照實驗安排，在不同時間點將大鼠麻醉后，打開腹腔取出腎臟，并剝離腎皮質(zhì)。加入裂解液后提取組織總蛋白，并運用Western Blot技術(shù)檢測NPRC蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果 手術(shù)3天后小組腎皮質(zhì)內(nèi)NPRC表達(dá)量顯著降低，術(shù)后18天其表達(dá)量明顯上升，術(shù)后7天、14天、28天與對照組無明顯差異。假手術(shù)組NPRC表達(dá)量與空白對照組無明顯差異。結(jié)論 結(jié)果表明，冠脈結(jié)扎后，急性心肌缺血迅速影響了大鼠腎皮質(zhì)內(nèi)NPRC蛋白表達(dá)，是缺血心肌應(yīng)激反應(yīng)之一。關(guān)鍵詞 心肌缺血，腦，大鼠，C型利鈉肽受體，腎皮質(zhì) III引 言心肌缺血是指由于心臟冠脈循環(huán)改變，引起了冠脈血流和心肌需求之間的不平衡，從而導(dǎo)致心肌損害。其中，與缺血性心臟病關(guān)系最為密切。心房利鈉肽( Atrial Natriuretic polypeptide，ANP) 及其家族中的腦利鈉肽( Brain natriuret peptide, BNP)、C 型利鈉肽( CType natriuretic peptide, CNP)是心房、心室肌及血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生和分泌的一類具有強烈利尿、排鈉、擴血管及抑制醛固酮分泌等作用的多肽類激素，在體內(nèi)參與許多疾病的病理過程，特別在治療、緩解、評估心血管疾病等方面有著廣闊的應(yīng)用前景。循環(huán)中利納肽的終濃度受其合成和釋放速率的影響，而從循環(huán)中清除利納肽的速率也是重要的影響因素。循環(huán)中的利納肽通過兩種方式清除：受體調(diào)節(jié)的內(nèi)吞形式以及中性內(nèi)肽酶降解的方式。利納肽是通過其受體作用于機體的，在人和大鼠的心肌組織檢測到的利納肽受體（natriuretic peptide receptor，NPR）有四種亞型，其中C型利鈉肽受體(NPRC)能夠與所有的利鈉肽相結(jié)合，被認(rèn)為參與了利鈉肽的清除。而且最近的科學(xué)研究顯示它是利鈉肽神經(jīng)調(diào)節(jié)作用的重要因素。NPRC能夠隔離被釋放的利鈉肽，減少肽的局部濃度，從而有效地使環(huán)磷酸鳥苷發(fā)揮作用。利鈉肽家族作為內(nèi)分泌激素，能夠通過調(diào)節(jié)心臟和腎臟的功能達(dá)到維持機體的內(nèi)穩(wěn)態(tài)。對利鈉肽的最新研究表明，心力衰竭等心臟病患者的利鈉肽水平升高，升高的利鈉肽提示心血管事件的高危險性，監(jiān)測利鈉肽能夠幫助診斷和判斷預(yù)后。利鈉肽能夠抑制心肌的過度增殖和纖維化，具有改善心肌梗死和心衰時的心肌重構(gòu)作用。腦鈉肽是一種最重要的利鈉肽，它可以作為心衰和其他心血管疾病的重要生物標(biāo)記物，能夠幫助我們了解肺動脈高壓和粥樣硬化性血管病等心血管疾病的進展。另外，合成的多種利鈉肽已經(jīng)被試驗用來治療急性充血性心衰。針對多種重組利鈉肽的多個臨床研究還在實驗階段，主要的方向包括它們在心臟手術(shù)中對心臟、腎臟的保護作用和抑制心肌重構(gòu)的作用。本實驗旨在采用Western Blot技術(shù)研究心肌缺血與大鼠腎臟皮質(zhì)內(nèi)NPRC表達(dá)之間的聯(lián)系，以探討在急性心肌缺血傷害性刺激作用下，大鼠腎臟皮質(zhì)內(nèi)NPRC表達(dá)量的變化。材料與方法 實驗動物及分組健康成年雄性SD大鼠30只，體重280 g330 g，由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供（許可證號：SCXK(冀)20031003；合格證號：DK04050003）。購入后于避強光、溫暖安靜的環(huán)境中飼養(yǎng)48小時。隨機分為TTC染色組及實驗組，實驗組分組情況如下所示。 手術(shù)組手術(shù)后3日取材 3只手術(shù)后3日取材 3只手術(shù)后3日取材 3只手術(shù)后3日取材 3只手術(shù)后3日取材 3只假手術(shù)組 3只空白對照組 3只TTC染色組 3只 儀器和試劑成年雄性SD大鼠體重280 g330 g，由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供（許可證號：SCXK(冀)20031003；合格證號：DK04050003）。 主要實驗儀器勻漿機；低溫離心機 Eppendorf；BIORAD 電泳儀；BIORAD 半干轉(zhuǎn)移系統(tǒng)；超純水系統(tǒng) MILLIPORES；掃描儀 佳能 實驗藥品預(yù)染蛋白Marker，F(xiàn)ermentas；RIPA組織/細(xì)胞裂解液，Solarbio；BCA法蛋白定量試劑盒，GENEray；ECL 發(fā)光試劑，PIERCE；顯影膠片，柯達(dá)；TTC 上海化學(xué)試劑采購供應(yīng)站分裝；PVDF膜 Millipore；Tris Solarbio；SDS Sigma；ECL Thermo；TWEEN20 Solarbio；甘氨酸 Solarbio；Beta抗體 北京博奧森生物技術(shù)有限公司；NPRC抗體 abcam；辣根酶標(biāo)記抗兔 IgG Solarbio；丙烯酰胺 Solarbio；甲叉雙丙烯酰胺 Solarbio；過硫酸胺 Solarbio；麗春紅 Solarbio；顯影液 石家莊市化工十廠；定影液 石家莊市化工十廠；過硫酸銨 Solarbio；考馬斯亮藍(lán)R250 Solarbio；TEMED usb 主要試劑的配制HCl（） Tris () g 蒸餾水 150 ml 蒸餾水 至250 ml SDS g10％過硫酸胺（AP） 過硫酸胺 g 超純水 mlHCl（） Tris () g 蒸餾水 150 ml 蒸餾水 至250 ml SDS g30% Arc/Bis Arc g Bis g 蒸餾水 至100 ml5X電泳液緩沖