植物生長(zhǎng)過程葉綠素含量的分析研究畢業(yè)論文(編輯修改稿)
2025-07-25 05:42 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 直接浸泡提取法 將樣品直接放入有機(jī)溶劑中提取葉綠素，是最簡(jiǎn)單，目前應(yīng)用最廣泛的一種葉綠素的提取方法之一。使用不同的浸提劑，浸提時(shí)間、浸提溫度以及浸提效率也各不相同。因此，如何選擇溶劑在直接浸泡提取法中就顯得非常重要。在浸提法中溶劑應(yīng)該具有提取效率高、揮發(fā)性小、毒性低、價(jià)格不貴、易于獲取等特點(diǎn)。目前使用過的溶劑主要有丙酮（Acetone）、甲醇（Methanol）、二甲基亞砜（DMSO）、N N二甲基甲酰胺（DMF）、乙醇（Ethanol）等幾種。因葉綠素浸提法受到重視，陳福明、陳順偉[6]和張憲政[4]分別對(duì)不同配比的丙酮、乙醇和水的混合液的浸提效果進(jìn)行了研究，證明利用混合液進(jìn)行葉綠素浸提的可行性。洪法水等研究表明，丙酮與乙醇混合液提取葉綠素存在協(xié)同效應(yīng)，且兩者在等濃度混合時(shí)提取效果最好。另外，彭運(yùn)生、劉恩[12]和劉絢霞、董振生[11]等研究認(rèn)為，丙酮乙醇（1：1）混合液浸提葉綠素效果較好。由于本試驗(yàn)擬采取丙酮與乙醇的1：1溶液提取葉綠素，下面主要對(duì)這兩種溶劑進(jìn)行介紹。(1)丙酮（Acetone） 1940年，Mackinney首先提出用丙酮作為提取劑，并得出了葉綠素a和葉綠素b的消光系數(shù)。（）；1949年，Arnon用80%的丙酮作為提取液來提取菠菜苗葉綠素并進(jìn)行分光光度法測(cè)定，他所使用的方法在國際上被廣泛應(yīng)用至今(）。1952年，Richard等用丙酮將樣品浸泡了9個(gè)小時(shí)得到葉綠素a. b和c(Richard et al., 1952)。 1960年、Vernon用80%丙酮作溶劑用分光光度法測(cè)定葉綠素a、葉綠素b和脫鎂葉綠素a、脫鎂葉綠素b，并得出了計(jì)算公式(Vernon,1960)。后來又經(jīng)Humphrey和Wooton在1966年證實(shí)90%丙酮是提取海洋浮游植物中葉綠素的一種理想溶劑(Humphrey et al., 1966)。 1966年國際海洋研究科學(xué)委員會(huì)推薦使用將樣品浸泡于90%丙酮中低溫過夜浸提的方法。Parsons等人和其后的許多人都是用90%丙酮提取色素(Parsonset a1.,1963。 Parsons, 1984).1985年Inskeep等認(rèn)為Arnon的研究結(jié)果有誤，在80%，而且對(duì)等消光系數(shù)也進(jìn)行了修正(Inskeep,1985)。丙酮和90%丙酮作溶劑，測(cè)定葉綠素a、b和c的光譜數(shù)據(jù)己為眾人所知，Jeffery和Humphrey給出了計(jì)算葉綠素的光譜經(jīng)驗(yàn)公式，并為后人所證實(shí)(Jeffery et al., 1975)。到目前為止，以90%丙酮為溶劑的方法仍然在廣泛使用。 葉綠素的光學(xué)性質(zhì)隨溶劑中水分的增加而改變。1960年Vernon將100%,90%和80%丙酮的葉綠素譜圖進(jìn)行比較，認(rèn)為隨著水分的增加，葉綠素a, b的最大吸收波長(zhǎng)由小向大移動(dòng)(葉綠素a從662移至665nm，葉綠素b從647移至 649nm )，而且含水分樣品比脫水樣品更易提取色素(Vernon, 1960)。1974年Jeffery建議先用100%丙酮提取葉綠素，進(jìn)行光譜測(cè)定時(shí)再稀釋成90%的丙酮。但是丙酮易揮發(fā)、易燃的性質(zhì)仍是使用時(shí)需要考慮的問題(Jeffery, 1974)。(2)乙醇（Ethanol） 在迄今己知的色素提取溶劑中，乙醇是最安全的提取溶劑，但多數(shù)時(shí)間用于提取淡水浮游植物的色素提取，后來一些科學(xué)家也將乙醇用于提取海洋浮游植物。 研磨法 研磨法主要是通過研磨機(jī)械破碎植物細(xì)胞，使溶劑更易進(jìn)入細(xì)胞提取色素。，讓溶劑浸入。這種方法至今仍被廣泛使用。但這種方法也有缺點(diǎn)，首先錘與攪拌器之間的距離直接影響提取結(jié)果，距離太小容易引起局部過熱而且濾液不宜進(jìn)入縫隙，提取效率低。其次轉(zhuǎn)移過程不可避免會(huì)引起遺漏而使操作者直接接觸溶劑。為避免溶劑遺漏可能帶來的危險(xiǎn)，操作者應(yīng)注意保護(hù)眼睛和手，佩戴安全眼罩和手套。 超聲波提取法 超聲波提取法主要是先通過超聲波來破壞植物細(xì)胞，然后用溶劑提取色素。超聲波在狹小的空間內(nèi)可產(chǎn)生20,000個(gè)大氣壓的壓力，并可產(chǎn)生穿越幾個(gè)微米的震動(dòng)波，產(chǎn)生的瞬間高溫可達(dá)10，000K。1975年Alliger使用超聲波在溶劑中形成破壞空穴使細(xì)胞破裂(Alliger, 1975)。.，時(shí)效果不如研磨法，而當(dāng)功率達(dá)到398 W.，時(shí)效果優(yōu)于研磨法(Chang et al., 19$2。 Wright et al., 1984)。如果總傳輸功率只有60 W，超聲波很少能穿透置入超聲儀中的樣品容器外壁進(jìn)入溶液(Sartory et al., 1984)。研究證明傳輸功率大小很大程度上會(huì)影響提取時(shí)間的長(zhǎng)短。使用大功率超聲儀超聲10分鐘的操作會(huì)導(dǎo)致提取液溫度上升和色素降解(Sartory et al., 1984)。雖然超聲波法有一定的優(yōu)勢(shì)，但由于設(shè)計(jì)和幾何學(xué)不同的超聲儀提取色素效果不同，而且換算相當(dāng)復(fù)雜，所以難以廣泛應(yīng)用。（1）洪法水對(duì)菠菜葉綠素提取的研究[5]方法：將從市場(chǎng)采購的菠菜洗凈，除去葉脈，剪碎、混勻，稱菠菜葉2g放入棕色試劑瓶中，加入60 ml 下列有機(jī)溶劑:丙酮，乙醇，甲醇，(丙酮):n(乙醇)=1:1混合液，浸泡至發(fā)白，用U V V is測(cè)定光吸收，每隔24 h測(cè)1次，測(cè)5次后，光吸收不再增加，計(jì)算葉綠素含量，并在350700 m1，過濾后測(cè)定光吸收，、直接浸提法和Arnon法提取葉綠素的效率. 結(jié)果:用n(丙酮):n(乙醇)=1:、乙醇單獨(dú)浸提的效率高. （2）李得孝對(duì)玉米葉綠素提取的研究[7]方法：按體積比配制提取液:80%丙酮，丙酮：乙醇（1：1），丙酮：乙醇：水（：：1），丙酮：甲醇（1：1），丙酮：甲醇：水（：：1），分別用上述幾種提取液浸提提取玉米葉綠素。 結(jié)果：在室溫10攝氏度下浸提和冷凍處理后浸提，不同提取液表現(xiàn)同樣的趨勢(shì):丙酮和乙醇（甲醇）混合液比同類含水的提取液要好，其中丙酮：乙醇為1:1的提取液提取葉綠素快而完全，丙酮：乙醇：水為4. 5 ：4. 5 ：1的提取液最慢，丙酮：甲醇：水為4. 5：4. 5 ：1的提取液提取較快但提取量最少。因此，采用丙酮：乙醇為l：1的提取液提取葉綠素的方法最好。（3）馮雙華對(duì)水稻葉綠素提取的研究[9]方法：在水稻各生育時(shí)期自上而下取三片葉，用剪刀剪碎(長(zhǎng)1 cm以下)，各處理分別稱2g鮮重，放入帶塞的三角瓶中，分別用95%乙醇和80%丙酮作為浸提液，將浸提液小心傾入100 ml容量瓶中定容至100 m1搖勻后吸5 ml該液于50 ml容量瓶中用95%乙醇和80%丙酮分別定容至50 ml然后用分光光度計(jì)比色測(cè)定。結(jié)果：用95%乙醇作為浸提液，測(cè)得的葉綠素含量在所有處理中均比用80%丙酮作浸提液的高，其差值平均為0. 274士0. 204,平均高13. 10%，說明用95%乙醇浸提效果比80%丙酮的好。（4）于相麗對(duì)牡丹葉綠素提取的研究[8]方法：將新鮮的牡丹品種趙粉葉片洗凈、用濾紙吸干，去大葉脈后剪碎混勻，稱取0. 05g，放人比色管中，分別加人l0ml 1丙酮；295%乙醇；380%丙酮；4丙酮:95%乙醇1:1；5丙酮:95%乙醇2:1；6丙酮：無水乙醇：：：1；7丙酮:95%乙醇:：：1 ；880%乙醇提取液，定容。避光處浸取至預(yù)定時(shí)間，每一處理均重復(fù)3次. 結(jié)果：一種好的提取溶劑應(yīng)該是提取速度快、葉綠素得率高、穩(wěn)定性好且測(cè)定結(jié)果精密度高.，浸取8h提取液的提取效果并不是很理想，葉綠素含量普遍較低。其中以丙酮:95%乙醇=2:1提取液效果最好，達(dá)到1. 987mg/, 80%乙醇提取液中得到最大提取量， mg/，葉綠素得率最大的為丙酮:95%乙醇2:1， mg/g。丙酮:95%乙醇2
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1