反膠團(tuán)萃取牛血清白蛋白論文(編輯修改稿)
2025-07-23 01:07 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 離心后上層為油相，下層為水相↓分液漏斗分出水相，并用紫外分光光度計的標(biāo)準(zhǔn)對照法測萃取后BSA的濃度↓求萃取率圖1 萃取操作R%=(c0c1)/c0100%c0萃取前蛋白質(zhì)的濃度(g/L)c1萃取后蛋白質(zhì)的濃度(g/L)R%蛋白質(zhì)的萃取率3 結(jié)果與討論 最大吸收波長的選取。圖2最大吸收波長的選取表4 不同PH值的波峰、波谷值PH值峰波長/(nm)峰值/(nm)谷波長/(nm)谷值/(nm)1″2″1′2′12，但曲線不平滑，趨于與X軸平行，，在210nm左右有波峰，故選取210nm處進(jìn)行測量，這樣得到萃取后的A值才能有比較。 水相PH值對萃取率的影響 水相PH值的初步選擇 、、。在λ=210nm用紫外分光光度計測其吸光度A，平行三次，結(jié)果見表5：表5 λ=210nm不同PH值下BSA的吸光度PHA平均，所以其吸光度值為0，也沒有吸收，所以吸光度值也為0。從表中可看出分別在酸性、中性、堿性區(qū)域，、有較大A值。、。若A值較大，在萃取后通過紫外分光光度計能測量出A值，不至于因為能量低而測不出來，影響萃取率的計算。 萃取最佳PH值的選擇 mol/L的CTAB/正辛醇/三氯甲烷(4：1，V/V)的反膠團(tuán)溶液提取ckcl = mol/、并在λ為210nm下測A，平行三次，結(jié)果見表6：表6 水相PH值對萃取率的影響PH值平均測量號波長/(nm)A標(biāo)C標(biāo)/(g/L)A樣C樣/(g/L)R%123210負(fù)值負(fù)值01232108612321065水相的PH值決定了蛋白質(zhì)表面電荷的狀態(tài)，從而對萃取過程造成影響。只有當(dāng)反膠團(tuán)內(nèi)表面電荷，也就是表面活性劑極性基團(tuán)所帶的電荷與蛋白質(zhì)表面電荷相反時，兩者產(chǎn)生靜電引力，蛋白質(zhì)才有可能進(jìn)入反膠團(tuán)。故對于陽離子表面活性劑，溶解的PH值需高于PI值時，反膠團(tuán)萃取才能進(jìn)行，表明蛋白質(zhì)所帶的凈電荷與表面活性劑極性頭所帶電荷符號相反，兩者的靜電作用對萃取蛋白質(zhì)有利，如果PH值很低，在界面上會產(chǎn)生白色絮凝物，并且萃取率也降低。由表可看出，水相的pH值對BSA的萃取率影響甚大，萃取BSA的最佳液相為pH=pI(plBsA=)的蒸餾水體系，pH=pI時萃取率為零，所以本文選擇PH=。 離子強(qiáng)度對反膠團(tuán)萃取BSA的影響用濃度為0．1mol/L的CTAB/正辛醇/三氯甲烷(4：1，V/V )反膠團(tuán)溶液提取pH值為7．0，不同離子強(qiáng)度KCI(mol/L)的BSA水溶液。在λ=210nm下測吸光度A，結(jié)果見表7：表7 離子強(qiáng)度對萃取率的影響Ckcl/(g/L)平均測量號波長/(nm)A標(biāo)C標(biāo)/(g/L)A樣C樣/(g/L)R%123210911232104812321067離子強(qiáng)度對萃取率的影響主要是由離子對表面電荷的屏蔽作用所決定的。鹽離子濃度增大，反膠團(tuán)內(nèi)表面的雙電層變薄，反膠團(tuán)與蛋白質(zhì)分子的靜電作用變?nèi)酢＿€有可能使表面活性劑極性頭之間的排斥力減小，導(dǎo)致反膠團(tuán)的“水池”變小，不利于BSA的萃取，在Ckcl=，在Ckcl=，在Ckcl==，所以本文選擇Ckcl=。 不同離子對萃取率的影響，Ckcl，CkBr，方法：，加入4ml反膠團(tuán)體系溶液 ，平行三次，結(jié)果見表8：表8 不同離子對萃取率的影響平均測量號波長/(nm)A標(biāo)C標(biāo)/(g/L)A樣C樣/(g/L)R%氯化鉀12321095溴化鉀12321096氯化鈉12321094由表可看出，在相同離子強(qiáng)度下，其影響程度遵循Hofmeister序[6]，F(xiàn)ClBr。陰離子種類對萃取率的影響并不是蛋白質(zhì)與膠束相互作用的特異性造成的，而是由于陰離子種類使得反膠束的大小發(fā)生了變化。離子影響蛋白質(zhì)表面電荷的分布及表面活性劑的電離程度，一個重要因素是萃取過程中隨蛋白質(zhì)一起進(jìn)入反膠團(tuán)極性核的離子會產(chǎn)生“屏蔽”作用，減小表面活性劑極性頭之間的相斥力[13]，反膠團(tuán)變小，性能改變。Br離子半徑較cl大通常用作反萃取中[5]，由于其分層速度快，可能分離不夠完全，會給測量帶來誤差，因此一般文獻(xiàn)中也都采用cl，較穩(wěn)定。所以本文選擇氯化鉀為最佳萃取條件。 水相與有機(jī)相體積比對萃取率的影響用反膠團(tuán)體系分別對pH=，ckcl= mol/L，水相與有機(jī)相的體積比分別為1：2：3：1的BSA水溶液進(jìn)行萃取，測其A值，平行三次，結(jié)果見表9：表9 水相與有機(jī)相體積比對萃取率的影響V水相/V有機(jī)相平均測量號波長/(nm)A標(biāo)C標(biāo)/(g/L)A樣C樣/(g/L)R%1:1123210212:1123210953:112321075萃取體系的兩液相的體積之比對萃取蛋白質(zhì)的結(jié)果也有較大的影響。從表3可看出，當(dāng)兩液相體積比為2：1時萃取結(jié)果最好，可達(dá)95％，而體積比為1：3：1的兩種情況萃取率較低。尤其是1：1時結(jié)果更低,因此兩液相體積比選擇2：1時萃取效果最好。因為水相過少，則有機(jī)相層較厚，蛋白質(zhì)在兩相界面間的接觸不充分，萃取率不高，水相過多，則有機(jī)相層會呈顆粒狀，水相與有機(jī)相不能形成良好界面，也不利于萃取，所以本文選擇水相與有機(jī)相體積比為2：1時為最佳萃取條件。 不同濃度的PH=、用分光光度計進(jìn)行波長掃描，測其A值，平行三次，其結(jié)果見表10：表10 不同濃度的PH=BSA的濃度平均測量號波長/(nm)A
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