反膠團萃取牛血清白蛋白論文(編輯修改稿)
2025-07-23 01:07 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 離心后上層為油相，下層為水相↓分液漏斗分出水相，并用紫外分光光度計的標準對照法測萃取后BSA的濃度↓求萃取率圖1 萃取操作R%=(c0c1)/c0100%c0萃取前蛋白質(zhì)的濃度(g/L)c1萃取后蛋白質(zhì)的濃度(g/L)R%蛋白質(zhì)的萃取率3 結(jié)果與討論 最大吸收波長的選取。圖2最大吸收波長的選取表4 不同PH值的波峰、波谷值PH值峰波長/(nm)峰值/(nm)谷波長/(nm)谷值/(nm)1″2″1′2′12，但曲線不平滑，趨于與X軸平行，，在210nm左右有波峰，故選取210nm處進行測量，這樣得到萃取后的A值才能有比較。 水相PH值對萃取率的影響 水相PH值的初步選擇 、、。在λ=210nm用紫外分光光度計測其吸光度A，平行三次，結(jié)果見表5：表5 λ=210nm不同PH值下BSA的吸光度PHA平均，所以其吸光度值為0，也沒有吸收，所以吸光度值也為0。從表中可看出分別在酸性、中性、堿性區(qū)域，、有較大A值。、。若A值較大，在萃取后通過紫外分光光度計能測量出A值，不至于因為能量低而測不出來，影響萃取率的計算。 萃取最佳PH值的選擇 mol/L的CTAB/正辛醇/三氯甲烷(4：1，V/V)的反膠團溶液提取ckcl = mol/、并在λ為210nm下測A，平行三次，結(jié)果見表6：表6 水相PH值對萃取率的影響PH值平均測量號波長/(nm)A標C標/(g/L)A樣C樣/(g/L)R%123210負值負值01232108612321065水相的PH值決定了蛋白質(zhì)表面電荷的狀態(tài)，從而對萃取過程造成影響。只有當反膠團內(nèi)表面電荷，也就是表面活性劑極性基團所帶的電荷與蛋白質(zhì)表面電荷相反時，兩者產(chǎn)生靜電引力，蛋白質(zhì)才有可能進入反膠團。故對于陽離子表面活性劑，溶解的PH值需高于PI值時，反膠團萃取才能進行，表明蛋白質(zhì)所帶的凈電荷與表面活性劑極性頭所帶電荷符號相反，兩者的靜電作用對萃取蛋白質(zhì)有利，如果PH值很低，在界面上會產(chǎn)生白色絮凝物，并且萃取率也降低。由表可看出，水相的pH值對BSA的萃取率影響甚大，萃取BSA的最佳液相為pH=pI(plBsA=)的蒸餾水體系，pH=pI時萃取率為零，所以本文選擇PH=。 離子強度對反膠團萃取BSA的影響用濃度為0．1mol/L的CTAB/正辛醇/三氯甲烷(4：1，V/V )反膠團溶液提取pH值為7．0，不同離子強度KCI(mol/L)的BSA水溶液。在λ=210nm下測吸光度A，結(jié)果見表7：表7 離子強度對萃取率的影響Ckcl/(g/L)平均測量號波長/(nm)A標C標/(g/L)A樣C樣/(g/L)R%123210911232104812321067離子強度對萃取率的影響主要是由離子對表面電荷的屏蔽作用所決定的。鹽離子濃度增大，反膠團內(nèi)表面的雙電層變薄，反膠團與蛋白質(zhì)分子的靜電作用變?nèi)酢＿€有可能使表面活性劑極性頭之間的排斥力減小，導致反膠團的“水池”變小，不利于BSA的萃取，在Ckcl=，在Ckcl=，在Ckcl==，所以本文選擇Ckcl=。 不同離子對萃取率的影響，Ckcl，CkBr，方法：，加入4ml反膠團體系溶液 ，平行三次，結(jié)果見表8：表8 不同離子對萃取率的影響平均測量號波長/(nm)A標C標/(g/L)A樣C樣/(g/L)R%氯化鉀12321095溴化鉀12321096氯化鈉12321094由表可看出，在相同離子強度下，其影響程度遵循Hofmeister序[6]，F(xiàn)ClBr。陰離子種類對萃取率的影響并不是蛋白質(zhì)與膠束相互作用的特異性造成的，而是由于陰離子種類使得反膠束的大小發(fā)生了變化。離子影響蛋白質(zhì)表面電荷的分布及表面活性劑的電離程度，一個重要因素是萃取過程中隨蛋白質(zhì)一起進入反膠團極性核的離子會產(chǎn)生“屏蔽”作用，減小表面活性劑極性頭之間的相斥力[13]，反膠團變小，性能改變。Br離子半徑較cl大通常用作反萃取中[5]，由于其分層速度快，可能分離不夠完全，會給測量帶來誤差，因此一般文獻中也都采用cl，較穩(wěn)定。所以本文選擇氯化鉀為最佳萃取條件。 水相與有機相體積比對萃取率的影響用反膠團體系分別對pH=，ckcl= mol/L，水相與有機相的體積比分別為1：2：3：1的BSA水溶液進行萃取，測其A值，平行三次，結(jié)果見表9：表9 水相與有機相體積比對萃取率的影響V水相/V有機相平均測量號波長/(nm)A標C標/(g/L)A樣C樣/(g/L)R%1:1123210212:1123210953:112321075萃取體系的兩液相的體積之比對萃取蛋白質(zhì)的結(jié)果也有較大的影響。從表3可看出，當兩液相體積比為2：1時萃取結(jié)果最好，可達95％，而體積比為1：3：1的兩種情況萃取率較低。尤其是1：1時結(jié)果更低,因此兩液相體積比選擇2：1時萃取效果最好。因為水相過少，則有機相層較厚，蛋白質(zhì)在兩相界面間的接觸不充分，萃取率不高，水相過多，則有機相層會呈顆粒狀，水相與有機相不能形成良好界面，也不利于萃取，所以本文選擇水相與有機相體積比為2：1時為最佳萃取條件。 不同濃度的PH=、用分光光度計進行波長掃描，測其A值，平行三次，其結(jié)果見表10：表10 不同濃度的PH=BSA的濃度平均測量號波長/(nm)A
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