hxj血清清、球蛋白分離新(編輯修改稿)
2025-06-21 22:47 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 學期 14 （電泳） 血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳結(jié)果 生物化學與分子生物學實驗教學中心 2022年秋季學期 15 三、實驗材料 ?人血清 ?葡聚糖凝膠（ G25)層析柱 ? DEAE纖維離子交換層析柱 ?飽和硫酸銨溶液 ? 20%磺基水楊酸 ? 1%BaCl2溶液 ?電泳儀、電泳槽 生物化學與分子生物學實驗教學中心 2022年秋季學期 16 四、實驗過程 ?鹽析（粗分離） ?葡聚糖凝膠層析（脫鹽） ? DEAE纖維素離子交換層析（純化） ?醋酸纖維素薄膜電泳（純度鑒定） 用 1ml 洗層析柱內(nèi)壁 , 取血清 ， 邊搖邊緩慢滴加 飽和硫酸銨溶液 ，混勻室溫放置 10min， 4000r/min離心 10min 沉淀 （ 含球蛋白 ） 加水 上清液 （ 含清蛋白 、 少量 α球蛋白和 β球蛋白 ） 約 用 1ml 洗層析柱內(nèi)壁 , 凝 膠 柱 層 析 除 鹽 繼續(xù)用 沖液 (2ml)洗脫 ， 流出液量約 2ml 磺基水楊酸檢測蛋白質(zhì) 收集含有蛋白質(zhì)的峰液 12d 此時磺基水楊酸和 BaCl2檢測可能同時陽性 繼續(xù)用 洗滌約 2ml BaCl2檢測SO42陰性 用 2~3ml 過葡聚糖凝膠 G25層析柱（ 7cm） 過葡聚糖凝膠 G25層析柱（ 7cm） 繼續(xù)用 沖液洗脫 ， 流出液量約 2ml 磺基水楊酸檢測蛋白質(zhì) 收集含有蛋白質(zhì)的峰液 12d 此時磺基水楊酸和 BaCl2檢測可能同時陽性 繼續(xù)用 洗滌約 2ml BaCl2檢測SO42陰性 用 2~3ml 鹽析 操作流程 離子交換柱層析純化 加樣 加樣 用 1ml mol/L NH4AC緩沖液清洗層析柱內(nèi)壁 , 離 子 交 換
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