不同條件的固相合成分析研究畢業(yè)論文(編輯修改稿)
2025-07-21 06:38 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 選定實驗肽以及一系列所需的試劑和反應儀器。試劑：DMF（二甲基甲酰胺），DCM（二氯甲烷），Deblock（脫帽液），甲醇，茚三酮檢測液（A:80%苯酚：20%無水乙醇=W:V B:重蒸吡啶 C:5g茚三酮溶于100ml無水乙醇）固體縮合劑：TBTU， HOBT液體縮合劑：DIEA 合成柱，洗瓶，裝滿氮氣的氮氣罐，固定架，真空泵，廢液瓶，電子天平，水浴檢測儀 實際使用時，一個系統(tǒng)中，合成柱的數(shù)量可以達到1015個，氮氣供應很穩(wěn)定，少于8個或超過15個，合成柱之間的氮氣會相互影響，使攪拌作用不太穩(wěn)定；而廢氣主管道應考慮比單柱廢氣管道直徑大一倍左右。真空則不限制，一般使用很小的真空泵，即可滿足很多個合成柱的要求: （1）按圖安裝并檢漏，確認氮氣、真空、廢氣系統(tǒng)連接正確，密封。（2）卸下合成柱，按要求清洗，120度烘干，自然冷卻到室溫，再安裝上去，加入合成柱體積2/3的二氯甲烷/二氯甲硅烷（1：1）浸泡合成柱，同時將氮氣開啟，使壓力最小，以液體不下漏為宜。目的有兩個，一是對合成柱內(nèi)表面進行硅化，減少對樹脂顆粒的吸附，二是在使用前保護柱內(nèi)環(huán)境，隔絕空氣大量進入。（3）該系統(tǒng)通常是在常溫下使用，如果環(huán)境溫度太低或認為溫度對偶鏈速度至觀重要時，可對氮氣加熱，在緩沖器后，將約20米的乳膠管浸入熱水中可以簡單完成，或用銅管也可以，加熱器可以用恒溫水浴鍋替代，由于使用乳膠管時，會漂浮起來，所以要將乳膠管纏在一個鋼棒上，放在水浴鍋中，可使其完全浸泡在水中。（4）安裝好的合成要打開上蓋，添加樹脂、反應物、溶劑等之前，必須先開啟氮氣，以避免空氣的大量進入而影響合成。（5）樹脂活度的選擇原則：長肽和疏水性多肽用活度低的樹脂，；短肽和親水性多肽用活度高的樹脂，以1mmol/g左右為宜，十個氨基酸以上的多肽，一般不要使用1mmol/g以上的樹脂。（6）樹脂用量的選擇原則：以總收率15%來預測樹脂用量，用目標純肽的需求量除以分子量，再除1000得毫摩爾數(shù)，在此基礎上取小數(shù)點后一位整數(shù)，寧大勿小，樹脂毫摩爾數(shù)除以樹脂活度得樹脂用量。 （7）樹脂的膨脹：抽走合成柱內(nèi)的溶劑，按工藝單要求，稱量所需量的的樹脂粉末，揭開合成柱上蓋，直接將樹脂倒入合成柱中，加入溶劑，蓋上合成柱上蓋，溶劑使用兩約為：每克樹脂10毫升的DMF或DCM，浸泡樹脂30分鐘以上，使其充分膨脹待用，如果樹脂粉末黏附在合成柱內(nèi)壁上，設法用溶劑沖至底部，氮氣使用量控制到最小，以使液體不下漏為宜。（8）將三通換向閥切換到真空，抽走溶劑，再切換到氮氣。揭開合成柱上蓋，按工藝單要求將第一個氨基酸反應混合物倒入合成柱中，然后用適量溶劑將柱壁上的濃反應物沖到底部，蓋上合成柱上蓋。將氮氣控制到最小，使樹脂顆?；静怀恋淼綐渲采蠟橐?，當多數(shù)合成柱正在抽廢液是，氮氣壓力會集中在少數(shù)幾個合成柱上，有可能造成沖出樹脂的現(xiàn)象，所以必須隨時觀察調(diào)整攪拌狀態(tài)。（9）在合成柱上執(zhí)行的操作只有揭開上蓋、加入溶劑或取樣、蓋上合成柱上蓋、切換真空和氮氣等幾個動作，按工藝單的要求直到完成一條肽的合成，需要特別注意的是脫保護后的樹脂清洗操作時，一定要將黏附在合成柱內(nèi)壁上的脫保護劑沖洗干凈，以免影響下一步的偶鏈反應選定AC—ER—6（編號為54947）為實驗肽，合成量為10mmol，多肽序列:AC EEMQR R NH2 （E:谷氨酸 M:蛋氨酸 Q:谷氨酰胺 R:精氨酸 AC:乙酸酐+吡啶）樹脂量：10/=各氨基酸量：m=n*M*投料倍數(shù)固體縮合劑量：m=n*M*投料倍數(shù)DIEA：（n*投料倍數(shù)*2）/
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