不同條件的固相合成分析研究畢業(yè)論文-資料下載頁
2025-06-24 06:38本頁面
【正文】 面）三個(gè)合成柱的反應(yīng)時(shí)間分別為1h、2h、3h。（6）偶聯(lián)時(shí)檢測(cè)：用滴管取少量樹脂與小試管中，用DMF潤洗一遍然后倒掉，注意不能將試管中樹脂倒掉，再分別滴加2滴A液、2滴B液、2滴C液。然后取出來看樹脂是否無色透明，若無色透明，即可偶聯(lián)下一個(gè)氨基酸。若不透明則需復(fù)投（復(fù)投即洗滌后重新投料反應(yīng)）（7）偶聯(lián)后洗滌：偶聯(lián)完畢后，用DMF洗滌3遍。（洗滌時(shí)DMF量為樹脂的3倍，一次洗滌時(shí)間不少于10秒）（8）以上是偶聯(lián)一個(gè)氨基酸的步驟，接下來依次類推，也就是重復(fù)第3步驟——第6步驟的過程直到最后一個(gè)氨基酸偶聯(lián)完畢。（9）最后一個(gè)氨基酸偶聯(lián)好后，再去保護(hù)，去保護(hù)完后收縮，即DMF洗滌3遍，DCM洗滌3遍，甲醇洗滌3遍，然后抽干樹脂。（10）稱取完成的干肽樹脂裝入袋中封口并貼上標(biāo)簽。 合成過程中，我們可明顯看出1號(hào)合成柱復(fù)投次數(shù)最多，3差不多。因此最初判斷反應(yīng)時(shí)間太短合成效果差。選定AC—ER—6（編號(hào)為54947）為實(shí)驗(yàn)肽，合成量為10mmol，多肽序列:AC EEMQR R NH2 （E:谷氨酸 M:蛋氨酸 Q:谷氨酰胺 R:精氨酸 AC:乙酸酐+吡啶）樹脂量：10/=各氨基酸量：m=n*M*投料倍數(shù)固體縮合劑量：m=n*M*投料倍數(shù)DIEA：（n*投料倍數(shù)*2）/Deblock的配制：六氫吡啶:DMF=1:3 編號(hào)123反應(yīng)時(shí)間2h2h2h投料倍數(shù)1倍2倍3倍反應(yīng)溫度25℃25℃25℃由前兩個(gè)實(shí)驗(yàn)可知溫度條件為25℃，反應(yīng)條件不低于1h時(shí)，合成效果最佳。所以為了方便實(shí)驗(yàn)反應(yīng)時(shí)間定為2h，溫度仍為25℃.（1）樹脂的稱取：，（2）樹脂的溶脹：把稱取好的樹脂分別放入編號(hào)為3的合成柱中（都在25℃恒溫水浴中），然后用DCM溶脹30分鐘，DCM加的量為樹脂高度的23倍，也就是把樹脂充分溶脹完全。可以微量鼓氣。（3）去保護(hù)：把DCM抽干，然后用DMF洗滌3遍，去除DCM，然后用脫帽液去保護(hù)，一般30分鐘。（4）去保護(hù)后洗滌：去保護(hù)完成后，殘留的脫帽液對(duì)后面的合成影響很大。用DMF洗滌6遍，抽干，徹底洗掉脫帽液。（5）偶聯(lián)：我們現(xiàn)在按照氨基酸的計(jì)算公式來算出3號(hào)合成柱中分別要投的氨基酸的量并稱取。此外我們還要稱取固體縮合劑，它要稱取的質(zhì)量按照氨基酸質(zhì)量計(jì)算公式計(jì)算。液體縮合劑DIEA為10*4/。 投完料后加入DMF至合成柱中（量為樹脂高度的兩倍），充入氮?dú)馐箻渲诤铣芍蟹瓭L（要控制充入氮?dú)饬?，不能使樹脂沉底，也不能使之漂浮在表面）反?yīng)時(shí)間2h。（6）偶聯(lián)時(shí)檢測(cè)：用滴管取少量樹脂與小試管中，用DMF潤洗一遍然后倒掉，注意不能將試管中樹脂倒掉，再分別滴加2滴A液、2滴B液、2滴C液。然后取出來看樹脂是否無色透明，若無色透明，即可偶聯(lián)下一個(gè)氨基酸。若不透明則需復(fù)投（復(fù)投即洗滌后重新投料反應(yīng)）（7）偶聯(lián)后洗滌：偶聯(lián)完畢后，用DMF洗滌3遍。（洗滌時(shí)DMF量為樹脂的3倍，一次洗滌時(shí)間不少于10秒）（8）以上是偶聯(lián)一個(gè)氨基酸的步驟，接下來依次類推，也就是重復(fù)第3步驟——第6步驟的過程直到最后一個(gè)氨基酸偶聯(lián)完畢。（9）最后一個(gè)氨基酸偶聯(lián)好后，再去保護(hù)，去保護(hù)完后收縮，即DMF洗滌3遍，DCM洗滌3遍，甲醇洗滌3遍，然后抽干樹脂。（10）稱取完成的干肽樹脂裝入袋中封口并貼上標(biāo)簽。 通過上述實(shí)驗(yàn)初步判定投料倍數(shù)不低于兩倍為佳。 ，根據(jù)序列配制切割試劑， 三氟乙酸：水：對(duì)甲苯酚：乙二硫醇：苯甲硫醚 :5:5:5:(體積比) 等，然后把多肽樹脂加到溶液中，615毫升/克，密封好在室溫振蕩14小時(shí)，過濾，用三氟乙酸洗，濾液中加無水乙醚，析出沉淀。固體用乙醚洗若干次，然后抽干。得到多肽的粗品3合成肽的純化與分析 經(jīng)過樣品分析、選擇流動(dòng)相后開始進(jìn)
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