【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 養(yǎng)細(xì)胞的種類(lèi)：原代細(xì)胞培養(yǎng)和傳代細(xì)胞培養(yǎng)。②根據(jù)培養(yǎng)基的不同：液體培養(yǎng)和固體培 養(yǎng)。） ？ 答：優(yōu)點(diǎn)：適用的細(xì)胞較廣；容易更換培養(yǎng)液； 容易采用灌流培養(yǎng)的方式使細(xì)胞達(dá)到高密度。 缺點(diǎn)：操作比較麻煩； 培養(yǎng)條件不易均一；傳質(zhì)、傳氧較差；不能有效監(jiān)測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)；需要合適的貼附材料和足夠的面積； 擴(kuò)大培養(yǎng)比較困難，投資大。 ？ 答：優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，培養(yǎng)的體積大、成本低；培養(yǎng)條件比較均一； 傳質(zhì)、傳氧較好；傳代時(shí)無(wú)需消化分散；容易擴(kuò)大培養(yǎng)規(guī)模。 缺點(diǎn)：由于細(xì)胞體積較小，難采用灌流培養(yǎng)，細(xì)胞密度較低 ？ 答： （ 1）、 包埋在在體內(nèi)的細(xì)胞可以獲得保護(hù)，避免了剪切力的損害。 （ 2） 、可以獲得較高的細(xì)胞密度，一般都在 10^7~10^8 個(gè) /ml以上。 （ 3） 、可以使產(chǎn)品濃縮在微囊內(nèi)，利于下游產(chǎn)物的純化。 （ 4） 、可以采用多種生物反應(yīng)器進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)。 、類(lèi)型及應(yīng)滿(mǎn)足哪些條件？ 答：應(yīng)滿(mǎn)足的條件：材質(zhì)無(wú)毒；結(jié)構(gòu)的傳質(zhì)、傳熱和混合性能；密封性好；參數(shù)能自動(dòng)檢測(cè)和調(diào)控；長(zhǎng)期連續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)；內(nèi)面光滑、無(wú)死角；拆裝、清潔、維修和消毒；設(shè)備成本。 動(dòng)物生物反應(yīng)器的作用： 是給動(dòng)物細(xì)胞的生長(zhǎng)代謝提供一個(gè)最優(yōu)化的環(huán)境，從而使其在生長(zhǎng)代謝過(guò) 程中產(chǎn)生出最大量、最優(yōu)質(zhì)的所需產(chǎn)物。 反應(yīng)器類(lèi)型：攪拌罐式反應(yīng)器、氣升式生物反應(yīng)器、中空纖維式生物反應(yīng)器、透析袋或膜式生物反應(yīng)器和固定床或流化床式生物反應(yīng)器。 第四章 ？從哪些方面可以對(duì)單克隆抗體進(jìn)行改造？ 答：阻礙： A．單克隆抗體的均是鼠源性抗體，應(yīng)用于人體可內(nèi)可產(chǎn)生人鼠源抗體，加速了排斥反應(yīng)，在人體內(nèi)的半衰期只有 56h，難以維持有效藥物的作用靶組織時(shí)間。 B．完整的抗體份子 Ig分子質(zhì)量過(guò)大，難以穿透實(shí)體腫瘤組織，達(dá)不到有效的治療濃度。 改造： A．降低單克 隆抗體的免疫原性。 B．降低單克隆抗體的相對(duì)分子質(zhì)量 （ 1）人 鼠嵌合抗體：由人抗體的恒定區(qū)與鼠源單抗的可變區(qū)融合得到。 （ 2） .改型抗體：把鼠抗體的 CDR序列移植到人抗體的可變區(qū)內(nèi)，所得到的抗體 （ 3）小分子抗體小分子抗體包括： Fab、 Fv或 ScFv、 單域抗體、 最小識(shí)別單位。這些部位都可以改造。 。 流程：將有用抗原免疫過(guò)的淋巴細(xì)胞與骨髓瘤用 PEG進(jìn)行雜交融合。 ① 把融合的細(xì)胞在 HAT培養(yǎng)基上選擇出來(lái)。 ② 將選擇后的整合細(xì)胞分散，培養(yǎng)成雜交瘤細(xì)胞。 ③ 使能產(chǎn)生單 克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞克隆化。 ④ 雜交瘤細(xì)胞抗體的性狀的鑒定。 ⑤ 單克隆抗體的大量制備，一是在培養(yǎng)液中大更是繁殖，二是注入純系小鼠腹腔中大量繁殖。 ⑥ 單克隆抗體的純化。 制備方法： 體內(nèi)誘生法和體外法。 答：優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單，比較經(jīng)濟(jì)，所得單克隆抗體量較多且效價(jià)較高，可有效地保存雜交瘤細(xì)胞株和分分離已污染的雜菌的雜交瘤細(xì)胞株。 缺點(diǎn)：小鼠腹水中混有來(lái)自小鼠的多種雜蛋白，給純化帶來(lái)難度。 ？ 答：①人 鼠嵌合抗體：保持鼠源性單克隆抗體 的抗原結(jié)合特異性，但對(duì)人免疫原性大幅下降了。 ②改型抗體：鼠源性單克隆抗體的互補(bǔ)決定區(qū)（ CDR區(qū)）序列替換人的 Ig分子中的 CDR序列?；鞠庖咴?。 ③小分子抗體： 7 a) Fab 將 Iｇ的重鏈在鉸鏈區(qū)的 C端裂解，獲得兩個(gè)完全相同的抗原結(jié)合片段。才鉸鏈區(qū)和二硫鍵相連。有完整的生雙價(jià)抗體活性，相對(duì)分子質(zhì)量減少為三分之一，排斥反應(yīng)也降低，人體內(nèi)很穩(wěn)定。 b) Fv 含有 L鏈和 Fd鏈一半的 N端可變區(qū)。有完整的抗體相似的結(jié)能力，相對(duì)分子質(zhì)量減少為六分之一。 ④單鏈抗體 scFv：?jiǎn)捂溡赘脑欤惑w內(nèi)半衰期短，免疫原性低；穩(wěn)定性 低，重輕鏈之間的分子間作用力弱；功能單一，只能與一種抗原特異性結(jié)合；親和力低，穩(wěn)定性差，體內(nèi)清除過(guò)快。 ⑤ 單域抗體：只由一個(gè) CDR構(gòu)成。 5．多功能抗體的優(yōu)點(diǎn)。 答：具有高親和力性能，由于具有多個(gè)結(jié)合價(jià)，可同時(shí)與細(xì)胞膜上相鄰的兩個(gè)或多個(gè)靶抗原結(jié)合，與腫瘤細(xì)胞表面抗原的多價(jià)結(jié)合有利于腫瘤的影像分析及治療。 6． 有應(yīng)用價(jià)值的多功能抗體應(yīng)具備有哪些特征。 a) 能高選擇性，高親和性地同靶抗原或腫瘤相關(guān)抗原結(jié)合。 b) 在血循環(huán)中，與效應(yīng)細(xì)胞或細(xì)胞毒觸發(fā)分子有較低親和力。 c) 應(yīng)為人源化抗體，最大限度地減少人抗鼠蛋白的排斥反應(yīng)，使得 復(fù)給藥不受限制。 d) 分子應(yīng)大小適中，既能滲透到腫瘤組織內(nèi)部，又能保證適當(dāng)?shù)臏魰r(shí)間。 7． 抗體導(dǎo)向酶 前藥療法中酶和前藥有哪些要求？ 答： （ 1）、對(duì)酶的要求：活化酶最好來(lái)自非哺乳動(dòng)物，而人體內(nèi)不存在相應(yīng)的類(lèi)似物，以保證高度的特異性。酶還能通過(guò)化學(xué)交聯(lián)與單抗結(jié)合，在較長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)保持穩(wěn)定性和活性。 對(duì)前藥的要求：前藥本身應(yīng)無(wú)活性或活性很低，只能被相應(yīng)的酶活化為高度擴(kuò)散性的小分子，以實(shí)現(xiàn)在腫瘤組織內(nèi)的廣泛分布和殺傷腫瘤細(xì)胞。而且前藥還 應(yīng)具有極短的生物半衰期，避免重新進(jìn)入循環(huán)產(chǎn)生非特異性毒性。 第五章 次級(jí)代 謝作用的定義及產(chǎn)物的特征？ 答：（ 1）定義：是由特異蛋白質(zhì)調(diào)控產(chǎn)生的內(nèi)源化合物的合成、代謝及分解作用的綜合體現(xiàn)。 2）產(chǎn)物特征： a：有明顯的分類(lèi)學(xué)區(qū)域界限。 b：其生物合成需在一定的條件下才能發(fā)生。 c：缺乏明確的生理功能。 d：是生物活動(dòng)的多余成分。 植物細(xì)胞培養(yǎng)中細(xì)胞團(tuán)產(chǎn)生的原因？ 答： 1）、細(xì)胞分裂之后沒(méi)有進(jìn)行細(xì)胞分離。 2）、在間歇培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后期是，開(kāi)始分泌黏多糖和蛋白質(zhì)，或者以其他方式形成粘性表面，從而形成細(xì)胞團(tuán)。 植物細(xì)胞培養(yǎng)中常用的滅菌劑有哪些？ 答：次氯酸鈣、次氯酸鈉、氯化 汞。還有（過(guò)氧化氫、溴水、硝酸銀、抗生素） 細(xì)胞的兩步培養(yǎng)法各有什么目的？ 答：第一步采用適合細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)基 —— 生長(zhǎng)培養(yǎng)基 第二步采用適合次級(jí)代謝產(chǎn)物合成的培養(yǎng)基 —— 生產(chǎn)培養(yǎng)基 前者是為了實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的高生產(chǎn)率，后者獲得一定含量的硝酸鹽和磷酸鹽，并含有較低的糖分或較少的碳源，得到最佳生長(zhǎng)。 影響植物次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)生和累積的因素？ 答： 生物條件：外植體 季節(jié) 休眠等。 2 、物理?xiàng)l件：溫度 光 通氣 滲透壓 。 化學(xué)因素：無(wú)機(jī)鹽 、碳源 、植物生長(zhǎng)劑 、維生素、 氨基酸 、前體。 工業(yè)培養(yǎng)條件：培養(yǎng)灌類(lèi)型 、 通氣、培養(yǎng)方法等。 植物細(xì)胞和微生物相比具有什么的差異？ 答：（一）、結(jié)構(gòu)組成： 細(xì)胞壁的組成不同：植物細(xì)胞的成分主要是纖維素，微生物的細(xì)胞壁主要是由肽聚糖組成。 植物細(xì)胞擁有大的液泡和質(zhì)體（如葉綠體）。（二）、 用于培養(yǎng)時(shí)： 植物細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求較復(fù)雜，而微生物要求較簡(jiǎn)單。植物細(xì)胞會(huì)有有限的分化，而微生物不會(huì)。 由于細(xì)胞壁的組成不同，植物細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)不能攪拌，而微生物可以。 7．植物細(xì)胞培養(yǎng)的生物反應(yīng)器類(lèi)型？ 答： 1）、機(jī)械攪拌生物反應(yīng)器 2）、鼓泡塔生物反 應(yīng)器 3）、氣升式生物反應(yīng)器 4)、轉(zhuǎn)鼓式生物反應(yīng)器 5)、 固定化生物反應(yīng)器 在植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)中應(yīng)綜合考慮哪些因素？ 8 1）、供養(yǎng)能力的及氣泡分散程度 2）、剪切力大小及對(duì)細(xì)胞的影響。 3）、高密度培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)液的混合程度。 4）、溫度、 PH、級(jí)營(yíng)養(yǎng)物濃度的控制能力。 5）細(xì)胞團(tuán)大小的控制能力。 6）易于放大。 兩相培養(yǎng)系統(tǒng)須滿(mǎn)足什么條件？ 答：添加相無(wú)毒，易吸附易溶解。兩相易分開(kāi)，不吸附培養(yǎng)基 第六章 ： 答：（ 1）微生物種類(lèi)多，品種齊全 （ 2）微生物 生長(zhǎng)繁殖快，生長(zhǎng)周期短，產(chǎn)量高 （ 3）培養(yǎng)方法簡(jiǎn)單，原料來(lái)源豐富，價(jià)格低廉，經(jīng)濟(jì)效益高，并可以通過(guò)控制培養(yǎng)條件來(lái)提高酶的產(chǎn)量 （ 4微生物具有較強(qiáng)的適應(yīng)性和應(yīng)變能力 ： 答： 1繁殖快，產(chǎn)酶量高，酶的性質(zhì)應(yīng)符合使用要求，最好是產(chǎn)生胞外酶的菌， 2不是致病菌，在系統(tǒng)發(fā)育上與病原體無(wú)關(guān)，也不產(chǎn)生有毒物質(zhì)， 3產(chǎn)酶性能穩(wěn)定，不易變異退化，不易感染噬菌體， 4能利用廉價(jià)的原料，發(fā)酵周期短，易于培養(yǎng) ： 答： 1可以較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)多次使用，酶的穩(wěn)定性高。 2反應(yīng)后，酶與底 物和產(chǎn)物易于分開(kāi)，易于純化，產(chǎn)品質(zhì)量高。 3反應(yīng)條件易于控制。 4酶的利用率高。 5比水溶性酶更適合于多酶反應(yīng)。 ： 答：優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，可選用不同電荷和不同形狀的載體，固定化過(guò)程和純化過(guò)程同時(shí)實(shí)現(xiàn)，酶失活后載體仍可以再生。 缺點(diǎn)：最適吸附酶量五規(guī)律可循，對(duì)不同的載體和不同酶的吸附條件不同，吸附量和酶活力不一定成平行關(guān)系，同時(shí)載體與載體之間結(jié)合力不強(qiáng)，酶易于脫落，導(dǎo)致酶活力下降并污染產(chǎn)物。 。 答：酶以共價(jià)鍵結(jié)合于載體上即將酶分 子上非活性部位功能團(tuán)與載體表面反應(yīng)基團(tuán)進(jìn)行共價(jià)結(jié)合的方法。 優(yōu)點(diǎn)：酶與載體結(jié)合牢固，穩(wěn)定性好， 缺點(diǎn)：條件苛刻，操作復(fù)雜，而且采用了比較強(qiáng)烈的反應(yīng)條件，會(huì)引起酶蛋