人胰島素的制備生物技術(shù)制藥(編輯修改稿)
2025-02-12 12:42 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 用 50mmol／ LGly— NaOH(pH 9． 5)平衡的 DEAESepharose FF柱，用 0． 1mol／ L的氯化鈉梯度洗脫，通過 SDSPAGE確定 RRhPI位置，用 DEAESepharoseFF做離子交換層析， 收集含 RRhPI的洗脫峰 2，層析圖譜見（圖 6）。電泳檢測顯示 (圖 11)峰 2主要為 RRhPI，及少量高分子雜質(zhì)， 收集峰 2做再復性。峰 1為 pH高于 9． 5及一些疏水性蛋白質(zhì)形成的穿透峰，絕大部分 pH低于 RRhPI的蛋白質(zhì)和核酸類雜質(zhì)則牢固地結(jié)合在柱子上，在較高鹽濃度及 2mol／ L NaCl的條件下被洗脫下來，形成其他峰 3和峰 4。胰島素原（ RRhPI）的再復性及酶切轉(zhuǎn)化：1,復性將初步復性及純化后的 RRhPI通過透析濃縮，先后轉(zhuǎn)換到緩沖液 B和 D(50mmol／ L G1yNaOH，氧化型谷胱甘肽 (GSSG)一還原型谷胱甘 (GSH)pH9． 5)中，使蛋白濃度為 0． 1～ O． 6 mg／ ml， 4℃ 靜置過夜。2,酶切復性后的 RRhPI復性液調(diào)節(jié) pH后加入一定量的胰蛋白酶 (trypsin)和羧肽酶 B(carboxypeptidase B)在 37。 C進行協(xié)同酶切一段時間，然后滴加 2 mol／ L ZnCI：至 ZnCl：濃度為 0． 1mol／ L終止反應并沉淀生成的hI，用雙蒸水洗滌沉淀得較純 B9重組人胰島素約 79 mg/L培養(yǎng)基。重組胰島素粗品的純化：胰島素粗品用 0． 2mol／ LNaAcHAc， pH4． 0溶解。溶解后的樣品通過Superdex75進行純化 (圖 10)，得 3峰，收集峰 3，透析后凍干即為胰島素產(chǎn)品所得胰島素產(chǎn)品用 SDSPAGE分析為單帶，電泳檢測見圖 11。傳統(tǒng)過濾只能濾去空氣中的塵埃、液體中的異物微粒，很難去除微生物活體（細菌、病毒及熱原體）；薄膜過濾是微孔篩分，大于孔徑的微粒均被截留，微生物粒子大小為 ，只要選用 的微孔濾膜即可將微生物截留去除，用 膜則可能將病毒、熱原體去除。注射用藥液除用傳統(tǒng)過濾器去除藥液中的異物外，現(xiàn)已采用微孔濾膜將澄清的藥液再次除菌、除熱原，其濾膜孔徑最好在 以下。制藥空氣的過濾亦因 GMP的不同級別要求而采用相應的器材、過濾器。要指出的是，制藥無菌空氣的供應僅采用傳統(tǒng)濾材、濾器往往不能達到要求，其終端必須選用微孔薄膜，孔徑必須在 0。 45微米以下。注射用無菌藥液的處理 ：按 GMP要求，注射用藥液應當無菌無熱原，本品藥液配制好后，經(jīng)過粗砂棒、細砂棒（ 適當使用滑石粉或碳粉）過濾成澄明液后，再經(jīng)過 多層微孔濾芯除菌，終端通過 ?；旌侠w維素酯 常用來制成圓形的單片平板濾膜，用于液體和氣體的精過濾； 聚丙烯 (PP) 做成折疊式，常用于筒式過濾器，有較大的孔徑，其具有親水性，屬粗過濾材料；聚偏二氟乙烯 (PVDF) 屬精過濾材料，耐熱和耐化學穩(wěn)定，蒸汽滅菌承受性良好，可制成親水性濾膜，較廣泛應用于制藥工業(yè)無菌制劑用水及注射用水的過濾；聚醚砜 (PES) 做成折疊式，常用于筒式過濾器，耐溫耐水解性能好，親水性材料，用于精度較高的溶液的精過濾； 尼龍 做成折疊式，常用于筒式過濾器，親水性材料，常用作液體的精過濾；聚四氟乙烯 (PTFE) 做成折疊式，常用于筒式過濾器，疏水性材料，其是使用相當廣泛的一種材料，耐熱耐化學穩(wěn)定，常用于水、無機溶劑及空氣的精過濾。除菌 過濾 器的特點 （ 1）除菌 過濾 器一般采用十字 懸 掛式，水平 進 出。多芯 過濾 器可 設(shè)計 成落地式?！ 。?2）有些使用 場 合根據(jù) 實際 需要分成 預過濾 器、精 過濾 器兩種?！ 。?3）空氣流向：從外向內(nèi)穿
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