【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 ，為藥代動(dòng)力學(xué)和臨床提供專一依據(jù)，從而發(fā)展個(gè)性化用藥途徑。③研究藥物不良反應(yīng)。毒副作用方面的蛋白質(zhì)組學(xué)，為合理用藥提供依據(jù)，從而建立個(gè)體的蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫，用于患者的蛋白質(zhì)譜分類和執(zhí)行個(gè)性化用藥。④應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，從傳統(tǒng)中藥中尋找天然活性物質(zhì)，為實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化提供生物技術(shù)手段，如對(duì)昆蟲毒素的系統(tǒng)活性分析，可以找到提供DNA重組生產(chǎn)的目的蛋白及其功能基因。 4．研究與開發(fā)生物技術(shù)藥物的新劑型 生物技術(shù)藥物多數(shù)易受胃酸及消化酶的降解破壞，其生物半衰期也普遍較短，需頻繁注射給藥，造成患者心理與身體的痛苦。即使皮下或肌內(nèi)注射，其生物利用度也較低。另外多數(shù)多肽與蛋白質(zhì)類藥物不易被親脂性膜所攝取，很難通過生物屏障。因此生物技術(shù)藥物的新劑型發(fā)展十分迅速，如對(duì)藥物進(jìn)行化學(xué)修飾，制成前體藥物，應(yīng)用吸收促進(jìn)劑，添加酶抑制劑，增加藥物透皮吸收及設(shè)計(jì)各種給藥系統(tǒng)等。 （1）埋植劑 微型滲透泵埋植劑，其外形像膠囊的埋植劑，植入后，體液可透進(jìn)外殼，溶解夾層電解質(zhì)層，使夾層的體積膨脹，壓迫塑性內(nèi)腔，使藥物從開口處定速釋出，已有肝素、胰島素和NGF等埋植劑在動(dòng)物體內(nèi)外的研究報(bào)道。 可注射的埋植劑，以生物降解聚合物作為埋植劑或注射型緩釋劑的骨架，常用的有兩類：①天然聚合物，如明膠、葡聚糖、清蛋白、甲殼素等。②合成聚合物如聚乳酸、聚丙交酯、聚乳酸羥乙酸（PLGA）、聚丙交酯乙交酯（PLCG）、聚己內(nèi)酯、聚羥丁酸等。其中PLGA在體內(nèi)降解為乳酸、羥乙酸進(jìn)一步分解為CO2和H2O具有良好生物相容性，無免疫原性，安全性高，并可通過聚合單體比例和聚合條件調(diào)節(jié)聚合物在體內(nèi)的降解速度，其應(yīng)用越來越廣泛。Zenica公司研制成功Zoladex注射型埋植劑，將多肽藥物戈舍瑞林（goserelin）與PLGA熔融混合，經(jīng)一多孔裝置擠出直徑為1mm的條狀物切成小段，滅菌后，密封于一次性注射器內(nèi)待用?？晒┢は禄蚣∪鈨?nèi)注射用。 （2）微球注射劑 有多種注射型微球的制備方法，如相分離法、復(fù)乳液中干燥法、噴霧干燥法、低溫噴霧提取法、熔融擠出法等。 另外，可以研究開發(fā)方便合理的給藥途徑如呼吸道吸入、直腸給藥、鼻腔、口服和透皮給藥等。 五、國(guó)內(nèi)臨床使用的主要生物技術(shù)藥物簡(jiǎn)介（一）乙型肝炎疫苗 乙型肝炎病毒（HBV）感染已是人類健康的嚴(yán)重威脅。據(jù)調(diào)查，％，全國(guó)約有一億以上人口為無癥狀乙肝病毒攜帶者；有乙肝病人約2700萬，每年發(fā)病人數(shù)在百萬以上。除因乙肝病毒感染導(dǎo)致慢性活動(dòng)性肝炎和肝硬化等而引起死亡外，在肝癌患者中，約有80％是由乙肝病毒感染引起的。因此預(yù)防乙肝感染對(duì)我國(guó)來說，是關(guān)系子孫后代健康和振興中華大業(yè)的緊迫任務(wù)。根據(jù)現(xiàn)有的病毒攜帶率，預(yù)計(jì)從20世紀(jì)90年代初起，在疫苗目前已能保證充分供應(yīng)的條件下，積極推行計(jì)劃免疫，進(jìn)行母嬰阻斷接種，那么也要到21世紀(jì)中葉才有可能使我國(guó)的乙肝病毒攜帶率降至現(xiàn)在的一半以下。由此可見，在我國(guó)，控制乙肝傳播須經(jīng)過幾代人的努力，是一項(xiàng)非常嚴(yán)峻而艱巨的任務(wù)。 20世紀(jì)70年代初開始使用乙肝表面抗原（HBsAg）陽性血清制備乙肝疫苗預(yù)防乙肝病毒感染，開創(chuàng)了病毒尚不能在實(shí)驗(yàn)室繁殖的情況下制備疫苗的先例。但這種血源疫苗存在一些問題，如血源有限、成本較高、帶有一定的潛在性危險(xiǎn)等。特別是近年來艾滋病流行，血液制品易受HIV污染，致使乙肝血源疫苗的使用在一些國(guó)家受到限制。然而乙肝血源疫苗的生產(chǎn)和使用，說明HBsAg的主蛋白可以誘生良好的保護(hù)性抗體，使人免受HBV的侵襲，這一事實(shí)為研制乙肝第二代疫苗奠定了良好基礎(chǔ)?；蚬こ碳夹g(shù)的飛速發(fā)展，使基因工程乙肝疫苗的研制成為可能。 (A)重組乙肝疫苗 20世紀(jì)80年代以來，國(guó)內(nèi)外學(xué)者應(yīng)用基因工程試圖制成乙肝疫苗，做了大量工作。比較成功的有以下幾條研制路線：①使用哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)HBsAg，大體上分為兩類：一是用SV40早期啟動(dòng)子調(diào)控乙肝病毒表面抗原基因，以dhfr為擴(kuò)增基因構(gòu)建的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CHOdhfr細(xì)胞，選出高產(chǎn)HBsAg的細(xì)胞系用于制備乙肝疫苗；二是用mMT或hMT為啟動(dòng)子調(diào)控乙肝病毒表面抗原基因，以BPV為擴(kuò)增基因構(gòu)建的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化為小鼠乳瘤細(xì)胞C127，選出高產(chǎn)HBsAg的細(xì)胞系，用其分泌的HBsAg純化后制備疫苗。 這兩種方式分別在法國(guó)和美國(guó)研制成功。第一種方式在我國(guó)也研制成功，投人生產(chǎn)；②使用病毒載體組建重組病毒以表達(dá)HBsAg，用作活疫苗或滅活疫苗，如用痘苗病毒載體。我國(guó)組建了不經(jīng)傳代細(xì)膩的重組病毒株VTH2，它是以天然株為起始株的帶乙肝表面抗原主蛋白基因的毒株（adr亞型HBsAg基因）?，F(xiàn)已投入試生產(chǎn)；③使用重組酵母生產(chǎn)乙肝疫苗，即用DNA重組技術(shù)構(gòu)建的重組酵母菌表達(dá)HBsAg，然后經(jīng)過分離純化制成疫苗，我國(guó)已引進(jìn)美國(guó)Merck公司的技術(shù)投入試生產(chǎn)。 ［1］重組乙肝表面抗原疫苗（酵母） 簡(jiǎn)稱“重組酵母乙肝疫苗” 1．結(jié)構(gòu)與性質(zhì) HBsAg的基本結(jié)構(gòu)是P24多肽鏈，它由226個(gè)氨基酸組成。以澳化氰裂解可產(chǎn)生5個(gè)肽段。其中80個(gè)氨基酸序列和位點(diǎn)已確認(rèn)，與DNA序列編碼的氨基酸相符合。本品電泳結(jié)果只在分子量20000～25000之間有一條主帶，這條主帶有HBsAg特異性，且未糖基化，不存在HBsAg中P27糖基化帶。電鏡檢查結(jié)果表明與血源疫苗一樣，均為22nm的球形顆粒。 本品系由重組酵母合成的乙肝表面抗原經(jīng)純化、滅活及吸附后制成，用于預(yù)防所有亞型的乙肝病毒感染，它與血源性乙肝疫苗具有同樣的效力和保護(hù)效果，但不含任何人血清成分，故更安全，更易為人們所接受。接種對(duì)象是乙肝易感者，包括嬰幼兒、兒童和因職業(yè)關(guān)系接觸乙肝病毒的成年人。但主要接種對(duì)象為嬰幼兒。接種對(duì)象應(yīng)為乙肝病毒表面抗原陰性和轉(zhuǎn)氨酶正常者，接種于上臂三角肌內(nèi)。 接種重組酵母乙肝疫苗所產(chǎn)生的抗體與接種血源乙肝疫苗產(chǎn)生的抗體具有類似的免疫學(xué)性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)，這兩種乙肝疫苗在健康人群中產(chǎn)生相同的抗體譜，因而這兩種疫苗可以互換使用。使用血源性乙肝疫苗進(jìn)行第一或第一、第二針免疫接種的人，可以用重組酵母疫苗完成第二、三針或第三針免疫接種，反之亦然。 已經(jīng)患有肝炎、急性傳染病或其他嚴(yán)重疾病者禁用。對(duì)酵母或疫苗中任何成分過敏者禁用。注射時(shí)應(yīng)備有腎上腺素，當(dāng)過敏反應(yīng)發(fā)生時(shí)使用。每一接種對(duì)象必須使用單獨(dú)的注射器和注射針頭，以防止乙肝病毒和其他致病因子的相互傳染。用前搖勻，有搖不散塊狀物不得使用。 3．不良反應(yīng) 本品一般沒有嚴(yán)重的副反應(yīng)，偶有注射部位紅腫或疼痛，發(fā)燒或頭痛。都為一過性反應(yīng)。 ［2」重組乙肝表面抗原疫苗（CHO細(xì)胞） 簡(jiǎn)稱“乙肝基因疫苗” 1．結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 乙肝病毒包膜蛋白的基因有三個(gè)基因序列，共用一個(gè)終止密碼，因而該基因的翻譯蛋白產(chǎn)物有三種：①HBsAg的主蛋白，有226個(gè)氨基酸；②中等蛋白，在主蛋白的N端，另有55個(gè)氨基酸；③大蛋白，含389400個(gè)氨基酸。本品主要是HBsAg的主蛋白，含226個(gè)氨基酸。電泳結(jié)果表明除有分子量為23000和27000兩條特異性蛋白區(qū)帶外，尚有三條糖蛋白區(qū)帶即GP30及其二聚體、多聚體，共五條區(qū)帶，都具有活性。 ，電鏡檢查HBsAg顆粒是均勻的，有時(shí)存在少數(shù)大或小的空心顆粒。5＋端氨基酸序列分析結(jié)果與編碼堿基序列完全相符。 2．臨床應(yīng)用 本品用于預(yù)防乙型肝炎。接種對(duì)象是乙型肝炎易感者（表面抗原陰性、轉(zhuǎn)氨酶正常），主要用于嬰幼兒。一般易感者（嬰兒、兒童和成人）每次注射1ml（10μg），免疫間隔為零月（注射當(dāng)時(shí)）、一月、六月共三針。三針后1個(gè)月100％抗體陽轉(zhuǎn)。用于高危病人如腎透析病人及其他與乙肝密切接觸者，可用20μg/1ml規(guī)格。用于母體HBsAg陽性（特別是e抗原陽性）的新生兒，應(yīng)在出生后48h內(nèi)注射，用20μg/1ml規(guī)格。注射間隔同上，亦可與乙肝高價(jià)免疫球蛋白（HBIG）聯(lián)合使用。 本品注射時(shí)要充分搖均，注射部位為上臂三角肌內(nèi)。對(duì)患有肝炎、發(fā)熱、急性慢性嚴(yán)重疾病或有過敏史者禁用本品。如有安瓿破裂、變質(zhì)或有搖不散的塊狀物不得使用。本品貯存過程中嚴(yán)防凍結(jié)。 (B)新型乙型肝炎疫苗 20世紀(jì)80年代早期開始的乙型肝炎（HB）疫苗接種無疑取得了巨大成功，在廣泛使用疫苗的人群中，HB發(fā)病率顯著下降，近十幾年來，已證明HB疫苗安全有效，具有高度免疫原性，90％以上的接種者達(dá)到保護(hù)性HBsAb水平，所有成功接種者（HBsAb水平）10U／L）都能抵抗HB。并且該疫苗耐受性良好，從未觀察到明顯由該疫苗引起的嚴(yán)重不良反應(yīng)。 然而，HB疫苗的一些缺點(diǎn)阻礙了它的應(yīng)用。全程免疫需接種3次疫苗，這會(huì)降低免疫覆蓋率；1％～10％的健康者對(duì)疫苗應(yīng)答不佳，該百分率在老年人中保持恒定；另外，有可能逃避現(xiàn)有疫苗保護(hù)作用的HBsAg突變株存在爭(zhēng)論。鑒于這些原因，目前正在研制新的更好的HB疫苗，以增強(qiáng)疫苗的免疫原性，簡(jiǎn)化HB疫苗接種。 ［1］改進(jìn)現(xiàn)有疫苗的方法 1．聯(lián)合疫苗 HB疫苗可與其他疫苗（尤其是兒童期疫苗）聯(lián)合使用，這樣只需一針注射，其結(jié)果元疑會(huì)提高免疫覆蓋率，HB與DTP或甲型肝炎與乙型流感桿菌（Hib）聯(lián)合疫苗已有一些國(guó)家應(yīng)用，目前正在開發(fā)DTP、HB。脊髓灰質(zhì)炎和Hib聯(lián)合疫苗。 2．單劑疫苗 人們正在用控釋微粒技術(shù)研制單劑疫苗。該法是利用滅活疫苗一針注射誘導(dǎo)強(qiáng)的長(zhǎng)期免疫應(yīng)答。將疫苗包裹于無反應(yīng)性且能很好耐受的可生物降解聚合物（聚丙交酯—聚乙交酯）中。疫苗依其在這些微球內(nèi)的分布于不同時(shí)間點(diǎn)釋放出不同的量，這樣可模擬不同時(shí)間間隔接種數(shù)劑疫苗。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已獲成功：1劑含HBsAg的微粒誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答幾乎與不同時(shí)間接種3劑的常規(guī)HB疫苗相同。 3．口服疫苗 含HBsAg編碼基因的重組沙門菌實(shí)驗(yàn)疫苗可在小鼠中誘導(dǎo)HBsAb應(yīng)答。今后的方法是研制表達(dá)HBsAg的轉(zhuǎn)基因植物（如香蕉等）作為可食用疫苗。 ［2」增強(qiáng)HB疫苗免疫原性的方法 1．新遞釋系統(tǒng) 目前正在對(duì)幾種增強(qiáng)HB疫苗免疫原性的方法進(jìn)行研究。第一種是使用替代的遞釋系統(tǒng)：正在對(duì)新佐劑進(jìn)行檢測(cè)，痘苗、腺病毒或沙門菌等重組微生物正在被用作感染后的表達(dá)宿主，并誘導(dǎo)其特異性免疫力。 2．新佐劑 為增強(qiáng)免疫缺陷者（如血液透析病人）的免疫應(yīng)答，用α干擾素作為常規(guī)疫苗的佐劑已取得一定成功，Meuer等將白細(xì)胞介素2與疫苗一起注射的預(yù)試研究已取得較好結(jié)果。然而，Jungers的大規(guī)模對(duì)照研究不能證實(shí)這些結(jié)果。實(shí)驗(yàn)性新佐劑單膦酸酯質(zhì)A的臨床試驗(yàn)結(jié)果比常規(guī)疫苗略好。 3．重組活載體 迄今，對(duì)重組活載體只進(jìn)行過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，Moss等對(duì)含HBsAg基因的重組痘苗病毒的試驗(yàn)表明，該疫苗能保護(hù)黑猩猩抵抗HB病毒的攻擊。然而，痘苗病毒副作用大，不能用于人類。 （二）干擾素 1980年國(guó)際干擾素命名委員會(huì)正確定名為interferon，簡(jiǎn)寫為IFN，定義如下：干擾素是一類在同種細(xì)胞上具有廣譜抗病毒活性的蛋白質(zhì)，其活性的發(fā)揮又受細(xì)胞基因組的調(diào)節(jié)和控制，涉及RNA和蛋白質(zhì)的合成。 目前認(rèn)為，干擾素是一種類似多肽激素的細(xì)胞功能調(diào)節(jié)劑，是一種細(xì)胞素，其含義如下： 第一，干擾素必須是一種蛋白質(zhì)，它對(duì)蛋白酶類是敏感的，而對(duì)DNA酶或RNA酶卻有抵抗能力。天然干擾素是一種糖蛋白，采用DNA重組技術(shù)由大腸桿菌表達(dá)的人干擾素多肽不帶糖分子。 第二，這種蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因與調(diào)節(jié)基因廣泛地存在于脊椎動(dòng)物或更高等動(dòng)物的細(xì)胞內(nèi)。在一般生理狀態(tài)下，細(xì)胞的干擾素基因呈靜止?fàn)顟B(tài)，只有在特定誘生劑的作用下，細(xì)胞的干擾素基因才活動(dòng)轉(zhuǎn)錄合成相應(yīng)的mRNA，進(jìn)而轉(zhuǎn)譯出具有種屬特異性的干擾素蛋白。 第三，干擾素本身并不能直接滅活病毒，干擾素作用于細(xì)胞后，使后者又產(chǎn)生多種其他蛋白質(zhì)（抗病毒蛋白），從而阻斷病毒的繁殖。 第四，干擾素必須具有廣譜的抗病毒活性。如果某一種抗病毒物質(zhì)僅對(duì)特定的病毒有作用，就不能稱為干擾素。 干擾素在生物界的分布是很廣泛的，不僅人和高等動(dòng)物的有關(guān)細(xì)胞能產(chǎn)生干擾素，而且許多低等動(dòng)物、昆蟲、植物和細(xì)胞也能產(chǎn)生干擾素，概括起來可以分為人干擾素、動(dòng)物干擾素、昆蟲干擾素、植物干擾素和細(xì)胞干擾素五大類。國(guó)際上對(duì)人和鼠干擾素提出了一種新的命名法，根據(jù)抗原特異性和分子結(jié)構(gòu)的不同分為α、β、γ三型，在命名法中還規(guī)定：①若今后繼續(xù)發(fā)現(xiàn)新干擾素，則在IFN右側(cè)標(biāo)以δ、ε等即可；②若要表示IFN的來源，則在IFN左側(cè)標(biāo)明種或?qū)俚目s寫或全名即可，如HuIFN（人干擾素）、MuIFN（鼠干擾素）、BovIFN（牛干擾素）；③若要區(qū)別不同細(xì)胞產(chǎn)生的同一型干擾素，則可在該型干擾素縮寫名稱的右側(cè)括弧內(nèi)標(biāo)以細(xì)胞名的縮寫即可，如HuIFNα（Le）為α人白細(xì)胞干擾素、HuIFNα（Ly）為α人淋巴細(xì)胞干擾素；