生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制(編輯修改稿)
2025-02-14 02:16 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 70%～ 130%標示量 細胞基礎(chǔ)的生物活性測定 80%～ 120%標示量 體外酶法的生物活性測定 85%～ 115%標示量 受體結(jié)合的生物活性測定 85%～ 115%標示量 生物學活性效價測定過程中 標準品的作用 生物學活性測定變異范圍大，同樣制品在不同實驗室測定結(jié)果差異很大，必須有一個統(tǒng)一的標準。 標準品的使用，最大限度地減少實驗室之間和各種影響測定因素地干擾。 二、蛋白質(zhì)純度檢查 蛋白質(zhì)純度檢查是重組蛋白質(zhì)藥物地重要指標之一。 按 WHO規(guī)定必須用 HPLC和非還原 SDSPAGE兩種方法測定，其純度都應達到 95%以上，有的甚至要求達到 99%以上。 純度的檢查通常是在 原液 中進行。 方法：非還原 SDSPAGE電泳法、 HPLC法、毛細管電泳。 非還原 SDSPAGE電泳法： 銀染加樣量 ≥ 5ug （ 1～ 10ng） 考馬斯亮藍 R250 加樣量 ≥ 10ug （ 100ng） 結(jié) 果：無明顯雜蛋白帶出現(xiàn)；目標蛋白量應不低于總蛋白量的 95%或 98%。蛋白質(zhì)樣品在荷質(zhì)比均一。 HPLC法：分子篩、反相層析，離子交換層析，盡量采用與 SDSPAGE原理不同的反相或離子交換層析，不主張用分子篩分析。 毛細管電泳：簡便、快速、靈敏度和分辨率高；價格高、重現(xiàn)性差。 幾種檢定重組蛋白純度方法的比較 特性 HPLC SDSPAGE、 IEF CE 分離機制 極性、非極性分配， 電荷、等電點 電荷等 分子大小、離子交換 分析所需時間 10～ 120min 幾小時 10～ 30min 分辨力 好 好 好 樣品體積 10～ 50ul 1～ 50ul 1～ 50nl 靈敏度范圍 ng ～ ug ng～ ug pg 定量準確性 + 177。 + 分析方式 紫外、熒光、折射 紫外（可見、熒光） 同 HPLC 電化學、放射性 銀染、放射自顯影 儀器價格 中～高 低 中～高 日常消耗 低 高 低 自動化 中～高 低 中～高 人力操作 低 高 低 制備級 中 中 微量級制備 收集樣品 可以 可以 較困難 用于研究蛋白質(zhì)純度的方法和機制 方法 分析機制 反相 HPLC 疏水性 疏水性相互作用 HPLC 疏水性 毛細管電泳 荷質(zhì)比 離子交換 HPLC 電荷 等電聚焦 電荷 聚丙烯酰胺凝膠電泳 電荷比 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 電荷，分子大小 分子排阻 HPLC 分子大小 質(zhì)譜測量法 分子大小 三、蛋白質(zhì)含量測定 此項目主要用于原液比活性計算和成品規(guī)格的控制。 可根據(jù)物理化學性質(zhì)采用 Folin酚試劑法（ Lowry法 ） 、 染色法（ Bradford法 ） 、雙縮脲法、 紫外吸收法、 HPLC法和凱氏定氮等方法。 蛋白質(zhì)常用的定量方法的比較 方法 所需蛋白質(zhì) 破壞 蛋白質(zhì) /蛋白 技術(shù) 方法的變異 的量（ mg/ml） 與否 質(zhì)變化情況 復雜性 系數(shù)（ %） 雙縮脲 ～ 5 是 少 簡單、快速 5 Lowry ～ 5 是 中等 顯色慢、試劑多 5 凱氏定氮 ～ 3 是 少 干擾、復雜、慢 紫外吸收法 ～ 2 否 大 簡單、快速、 （ 280nm） 干擾物質(zhì)多 染料結(jié)合法 ～ 是 中等
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