基因工程制藥新版(2)(編輯修改稿)
2025-06-22 06:02 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 基因內(nèi)，抗藥基因失活。 AmpR→Amp敏感 (AmpS )、 TetR→Tet 敏感 (TetS). pBR322:人工構(gòu)建重要質(zhì)粒 優(yōu)點：具有較小的分子量． 具有兩種抗生素抗性基因，作為篩選標(biāo)記． 具有高拷貝數(shù)． 是松弛型質(zhì)粒． [B]、 pUC系列質(zhì)粒 由 pBR322和 M13噬菌體構(gòu)建而成的雙鏈質(zhì)粒載體； （ 1） 2674bp； （ 2） 有 ampR和位于 lacZ+ 基因中靠近 5’端多克隆位點 (MCS)和 來源于 pBR322質(zhì)粒的復(fù)制起始點 （ 3） 大腸桿菌 β 半乳糖苷酶(lacZ)的啟動子及其編碼該基因氨基端 α 肽鏈的 DNA序列 ,此結(jié)構(gòu)特稱為 lacZ+基因 ，便于藍(lán)白篩選 pUC質(zhì)粒優(yōu)點： １．具有更小的分子，更高的拷數(shù) ２．適于組織化學(xué)檢測重組體． [C]、 pGEM3Z質(zhì)粒 含一個 ampR基因和一個lacZ’編碼基因 。 有多克隆位點（ MCS） 。 正選擇顏色標(biāo)記 lacZ’。 有兩個來自噬菌體的強啟動子 PT7和 PSP6,用于外源基因的高效表達(dá) 注意： T7和 SP6啟動子特異性地由噬菌體 DNA編碼的RNA聚合酶所識別，因此相應(yīng)的受體菌必須表達(dá)噬菌體 RNA聚合酶， 如： BL21（ DE3）等 2743 bp MCS lacZ’ PT7 ori Apr pGEM3Z PSP6 真核基因病毒 DNA （ 1）病毒載體的優(yōu)點 （ 2）已經(jīng)研究的真核基因病毒 DNA （ 1）病毒載體的優(yōu)點 [A]、具有很高的拷貝數(shù)量。 [B]、有強大的啟動子。 [C]、可保證目的基因的高效表達(dá)。 （ 2）已經(jīng)研究的真核基因病毒 DNA [A]、 SV40病毒 DNA [B]、牛乳頭瘤病毒 [C]、 RNA病毒 [D]、昆蟲桿狀病毒 [E]、人痘病毒 DNA [F]、 猴空泡病毒 DNA [G]、 人腺病毒 DNA [H]、 人牛痘病毒 DNA [ I ]、 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體 [A]、 SV40病毒 DNA （ A1）、 SV40病毒 DNA的特性 （ A2）、 SV40病毒 DNA的基因組 （ A3）、 SV40病毒 DNA載體的構(gòu)建 （ A4）、 SV40病毒 DNA載體的使用方法 （ A1）、 SV40病毒 DNA的特性 為 環(huán)狀雙螺旋 結(jié)構(gòu)。其宿主為動物細(xì)胞。 SV40病毒有二種表達(dá)方式： （ 1）游離表達(dá)方式， SV40DNA+外源性 DNA，形成重組 DNA，進入宿主體內(nèi)，以重組 DNA的方式表達(dá)。 （ 2）結(jié)合表達(dá)方式，重組 DNA整合 到宿主染色體的 DNA之中，與染色體基因一起表達(dá)。 （ A2）、 SV40病毒 DNA的基因組 （ A3）、 SV40病毒 DNA載體的構(gòu)建 （ A4）、 SV40病毒 DNA載體的使用方法 [G]、腺病毒 （ G1）、 腺病毒 DNA載體 （ G2）、 腺病毒 DNA載體的特點 λ 噬菌體 DNA （ 1） λ 噬菌體 DNA的特性 （ 2） λ 噬菌體 DNA的改造 （ 3） λ 噬菌體 DNA的體外包裝 （ 4） λ 噬菌體載體的構(gòu)建 （ 5） λ 噬菌體載體的使用 （ 6） λ 噬菌體載體的優(yōu)點 （ 1） λ 噬菌體 DNA的特性 λ 噬菌體 DNA為 雙鏈的 DNA病毒 ，宿主是大腸桿菌。 已發(fā)現(xiàn) λ 噬菌體 DNA可編碼 61個基因。 [A]、 λ 噬菌體 DNA在宿主體內(nèi)的生活方式 [B]、 λ 噬菌體 DNA的結(jié)構(gòu) [A]、 λ 噬菌體 DNA在宿主體內(nèi)的生活方式 （ 1）溶源方式 ： λ噬菌體DNA整合到大腸桿菌的DNA中，伴隨大腸桿菌DNA的復(fù)制而復(fù)制，這種方式是 λ噬菌體 DNA作為基因工程載體的理論依據(jù)。 （ 2）溶菌方式 ： λ噬菌體感染大腸桿菌后，終止了大腸桿菌染色體 DNA所控制的遺傳信息表達(dá)，并進一步分解大腸桿菌 DNA，最后導(dǎo)致大腸桿菌完全溶解。 [B]、 λ 噬菌體 DNA的結(jié)構(gòu) λ 噬菌體基因組 ? 基因組長度：約為 50kb的雙鏈 DNA分子，實際大小為 48502bp。 ? DNA是線狀雙鏈分子帶有單鏈的互補末端，末端長12個核苷酸，稱為粘性末端（ cos序列 ）。當(dāng)噬菌體感染宿主細(xì)胞后，雙鏈 DNA分子通過 cos而成環(huán)狀。 ? 61個基因，每個基因平均為 1000bp，其中 32個較為重要，它們的分布和排列與其功能有一定關(guān)系。 ? 基因組分為二部分： （ 1）其中一半基因，控制著生命活動周期。 （ 2）另一半基因，可被外源性目的基因所取代， 而不影響噬菌體的生命活動。 基因組分為幾個不連續(xù)的區(qū)域，三個片段組成： （ 1）左臂 ， ，含噬菌體頭、尾蛋白質(zhì)編碼基因， A～ J的 12基因都是構(gòu)成外殼蛋白的基因。 （ 2）中央片段 ， 12kb～ 24kb，含 PL控制 red和gam基因。 （ 3）右臂 ， 9kb～ 11kb，含 λDNA復(fù)制和溶菌有關(guān)蛋白編碼基因。與裂解有關(guān)的 S和 R基因、與DNA復(fù)制有關(guān)的 O基因和 P基因等分別聚集在一起。 噬菌體左右兩臂包含了 λ復(fù)
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