基因工程概述ppt課件(2)(編輯修改稿)
2024-10-08 18:25 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 轉(zhuǎn)化原理 負(fù)對(duì)照 實(shí)驗(yàn)組 正對(duì)照 藍(lán)白篩選結(jié)果 一. 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化植物的方法 1. 根癌農(nóng)桿菌（ Agrobacterium tumefaciens)的一般性質(zhì)： 冠癭病 Ti質(zhì)粒（ Tumor inducing plasmid) TDNA (Tramsferred DNA)區(qū) Vir區(qū) * 冠癭瘤的特點(diǎn)： 激素自主性 冠癭堿 幻燈片 5 無(wú)正常分化能力 * 農(nóng)桿菌與 Ti－質(zhì)粒的類(lèi)型： 章魚(yú)堿型（ octopine type） 胭脂堿型（ nopaline type） 農(nóng)桿堿型（ agropine type） * 冠癭堿可以分為四類(lèi)： 章魚(yú)堿族 胭脂堿族 甘露堿族 農(nóng)桿素 Octopine Vir 基因的基本結(jié)構(gòu)與功能 A: TDNA的同源序列，還有 pBR的序列， 進(jìn)入農(nóng)桿菌后高頻同源重組 ， 便于篩選共整合質(zhì)粒 的限制內(nèi)切酶切點(diǎn)，多克隆位點(diǎn) Ti質(zhì)粒的邊界序 列 bom位點(diǎn)序列，可以在不同細(xì)菌細(xì)胞間轉(zhuǎn)移 ： LB和 RB cell EI復(fù)制點(diǎn) TDNA的整個(gè) 轉(zhuǎn)化過(guò)程 缺失啟動(dòng)子 GUS表達(dá)載體轉(zhuǎn)化煙草 對(duì)照 抗性芽（ Km:100ug/ml） 生根的轉(zhuǎn)基因煙草苗（ Km:100ug/ml） 轉(zhuǎn)化煙草土培苗 開(kāi)花的土培苗 電轉(zhuǎn)化法（ electrotransfortion） 也稱(chēng)電穿孔術(shù) （ electroporation） ,是利用高壓脈沖瞬時(shí)放電 ， 使電場(chǎng)中的細(xì)胞膜穿孔 ， 位于溶液中的外源基因得以進(jìn)入細(xì)胞 。 影響轉(zhuǎn)化率的因素很多 ， 如：電場(chǎng)強(qiáng)度 、 電脈沖的長(zhǎng)度 、 DNA的構(gòu)象和濃度 、 培養(yǎng)液的離子成分等 ， 需摸索反應(yīng)條件 ， 優(yōu)
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