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正文內(nèi)容

豬血清白蛋白的分ppt課件(編輯修改稿)

2025-06-21 23:55 本頁面
 

【文章內(nèi)容簡介】 DEAE纖維素裝入柱內(nèi),至 810cm高度,平衡過夜; 2. 洗脫液流速調(diào)節(jié)為 1mL/min; 3. 上樣:將透析袋剪開,用移液管轉(zhuǎn)至層析柱內(nèi),待樣品進入凝膠后再加入少量緩沖液,使樣品完全進入膠內(nèi); 4. 洗脫:采用連續(xù)梯度洗脫,用 ~ / L醋酸-醋酸銨緩沖液( )進行洗脫,收集; 5. 記錄出現(xiàn)峰值的管號 (樣品 4,… ) 洗脫速度慢,可直接換 B液( / L醋酸-醋酸銨緩沖液) 五、 血清白蛋白的相對分子質(zhì)量 測定 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 ? 電泳遷移率與顆粒的電荷、形狀、大?。ǚ肿恿浚┯嘘P(guān),如電荷、形狀都一樣,則電泳遷移率只與分子量有關(guān)。 ? SDS的作用: ,破壞蛋白質(zhì)的二級和三級結(jié)構(gòu),強還原劑(巰基乙醇)能使二硫鍵斷裂,使蛋白質(zhì)完全變性; 蛋白質(zhì)按比例結(jié)合,形成 SDS蛋白質(zhì)復合物。 ? SDS蛋白質(zhì)復合物的特點: 1. 由于結(jié)合大量的 SDS,使蛋白質(zhì)喪失了原有的電荷狀態(tài); 圓棒狀。 ? 因此在進行電泳時,蛋白質(zhì)分子的遷移速度取決于分子量 大小。 測定各條帶的相對遷移率,根據(jù)已知蛋白質(zhì)分子量和它們的相對遷移率,以相對遷移率為橫坐標, lgMW為縱坐標作標準曲線。根據(jù)未知蛋白質(zhì)的相對遷移率從標準曲線上查出它們的lgMW,再換算成蛋白質(zhì)分子量. 測定各條帶的相對遷移率,根據(jù)已知蛋白質(zhì)分子量和它們的相對遷移率,以相對遷移率為橫坐標為 lgMW為縱坐標作標準曲線。根據(jù)未知蛋白質(zhì)的相對遷移率從標準曲線上查出它們的 lgMW,再換算成蛋白質(zhì)分子量. ? 在一定范圍內(nèi),蛋白質(zhì)的遷移率和分子量的對數(shù)呈線性關(guān)系,符合下式: logMW=KBx( MW為分子量, X為遷移率, k、 B均為常數(shù)) ? 若將已知分子量的標準蛋白質(zhì)的遷移率對分子量對數(shù)作圖,可獲得一條標準曲線,未知蛋白質(zhì)在相同條件下進行電泳,根據(jù)它的電泳
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