豬血清白蛋白的分ppt課件(編輯修改稿)
2025-06-21 23:55 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 DEAE纖維素裝入柱內(nèi)，至 810cm高度，平衡過夜； 2. 洗脫液流速調(diào)節(jié)為 1mL/min； 3. 上樣：將透析袋剪開，用移液管轉(zhuǎn)至層析柱內(nèi)，待樣品進(jìn)入凝膠后再加入少量緩沖液，使樣品完全進(jìn)入膠內(nèi)； 4. 洗脫：采用連續(xù)梯度洗脫，用 ～ ／ L醋酸－醋酸銨緩沖液（ ）進(jìn)行洗脫，收集； 5. 記錄出現(xiàn)峰值的管號(hào) (樣品 4,… ) 洗脫速度慢，可直接換 B液（ ／ L醋酸－醋酸銨緩沖液） 五、 血清白蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量 測(cè)定 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 ? 電泳遷移率與顆粒的電荷、形狀、大?。ǚ肿恿浚┯嘘P(guān)，如電荷、形狀都一樣，則電泳遷移率只與分子量有關(guān)。 ? SDS的作用： ，破壞蛋白質(zhì)的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)，強(qiáng)還原劑（巰基乙醇）能使二硫鍵斷裂，使蛋白質(zhì)完全變性； 蛋白質(zhì)按比例結(jié)合，形成 SDS蛋白質(zhì)復(fù)合物。 ? SDS蛋白質(zhì)復(fù)合物的特點(diǎn)： 1. 由于結(jié)合大量的 SDS，使蛋白質(zhì)喪失了原有的電荷狀態(tài)； 圓棒狀。 ? 因此在進(jìn)行電泳時(shí)，蛋白質(zhì)分子的遷移速度取決于分子量 大小。 測(cè)定各條帶的相對(duì)遷移率，根據(jù)已知蛋白質(zhì)分子量和它們的相對(duì)遷移率，以相對(duì)遷移率為橫坐標(biāo)， lgMW為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)未知蛋白質(zhì)的相對(duì)遷移率從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出它們的lgMW，再換算成蛋白質(zhì)分子量． 測(cè)定各條帶的相對(duì)遷移率，根據(jù)已知蛋白質(zhì)分子量和它們的相對(duì)遷移率，以相對(duì)遷移率為橫坐標(biāo)為 lgMW為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)未知蛋白質(zhì)的相對(duì)遷移率從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出它們的 lgMW，再換算成蛋白質(zhì)分子量． ? 在一定范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)的遷移率和分子量的對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系，符合下式： logMW=KBx（ MW為分子量， X為遷移率， k、 B均為常數(shù)） ? 若將已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的遷移率對(duì)分子量對(duì)數(shù)作圖，可獲得一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，未知蛋白質(zhì)在相同條件下進(jìn)行電泳，根據(jù)它的電泳
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