血清蛋白的醋酸薄膜電泳(編輯修改稿)
2025-02-02 09:06 本頁面
【文章內容簡介】 用解剖鑷子取出電泳后的薄膜 ， 放在含 %氨基黑 10B染色液的培養(yǎng)皿中 ， 浸染 5min， 取出后再用漂洗液浸洗脫色 ， 每隔 10min 換漂洗液一次 ， 連續(xù)數(shù)次 ， 直至背景藍色脫盡 。 ? 取出薄膜放在濾紙上 ， 用吹風機的冷風將薄膜吹干 。 圖 38 血清蛋白與脂蛋白醋酸纖維素薄膜電泳圖譜比較示意圖 ⑹ 結果判斷與定量 結果判斷與定量 ? 一般血清蛋白電泳經蛋白染色后 ， 可顯示 5條區(qū)帶 ， 其排列順序見圖 38a， 未經透明處理的電泳圖譜可直接用于定量測定 。 ? 可采用洗脫法或光吸收掃描法 ， 測定各蛋白組分相對百分含量 。 本實驗不要求進行定量分析 ， 如有需要 ， 可采用薄層掃描儀進行掃描定量 ， 或采用洗脫后再進行比色的方法進行定量 。 下面為后者的具體操作步驟： 取試管 6支 ， 編好號碼 ， 分別用吸管取 4ml， 剪開薄膜上各條蛋白色帶 ， 另于空白部位剪一平均大小的薄膜條 ， 將各條分別浸于上述試管內 ， 不時搖動 ，使藍色洗出 。 約半小時后 ， 用分光光度計進行比色 ， 波長用 650nm， 以空白薄膜條洗出液為空白對照 ， 讀取白蛋白 A、 α α β 、 γ 球蛋白各管的光密度 。 光密度總和 T＝ A+α 1＋ α 2＋ β ＋ γ 各部分蛋白質的分數(shù)為： A（ 清蛋白 ） % = A / T 100 α 1球蛋白 % = α 1 / T 100 α 2球蛋白 % =α 2 / T 100 β 球蛋白 % = β / T 100 γ 球蛋白 % =γ / T 100 附：遷移率是膠體顆粒的一個物理常數(shù) ， 可用來鑒定蛋白質等物質以及研究它們的某些理化性質 ． 現(xiàn)將人血漿蛋白質的等電點 ， 遷移率等列于下表 ， 供分析參考 。 蛋白質名稱 等電點 泳動脈 /(cm2V1S1) 分子量 清蛋白 105 69000 α1 球蛋白 105 202200 α2 球蛋白 105 300000 β 球蛋白 105 9000150000 γ 球蛋白 105 156000300000 纖維蛋白元 105 正常值：白蛋白 57～ 72% α 1球蛋白 2～ 5％ α 2球蛋白 4～ 9％ β 球蛋白 ～ 12％ γ 球蛋白 12～ 20％ 表 312 人血漿蛋白質的等電及遷移率備注 備注： ① 醋酸纖維薄膜電泳分析血清蛋白的正常結果不同于紙上電泳 ， 主要是白蛋白偏高 ， 個別正常人白蛋白僅超過 70％ 。 Α ， α ， 和 β ， γ 都偏低 ， 個別正常人 γ 球蛋臼可低到 12％ 左右 。 上述正常值僅供參考 。 ② 經電泳 ， 染色之干燥膜浸于冰醋酸： 95％ 乙醇 （ 2:8）溶
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