血清蛋白的醋酸薄膜電泳-在線瀏覽
2025-02-23 09:06本頁(yè)面
【正文】 般需平衡 1520min。 ⑵ 點(diǎn)樣 點(diǎn)樣 ? 取一張干凈濾紙 （ 10 10cm） ， 在距紙邊 用鉛筆劃一平行線 ， 此線為點(diǎn)樣標(biāo)志區(qū) 。 無(wú)光澤面向上平放在點(diǎn)樣模板上 ，使其底邊與模板底邊對(duì)齊 。點(diǎn)樣時(shí) ， 先用玻璃棒或血色素吸管取 23181。 ? 此步是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵 ， 點(diǎn)樣前應(yīng)在濾紙上反復(fù)練習(xí) ，掌握點(diǎn)樣技術(shù)后再正式點(diǎn)樣 。 如一電泳槽中同時(shí)安放幾張薄膜 ，則薄膜之間應(yīng)相隔幾毫米 。 ? 用導(dǎo)線將電泳槽的正 、 負(fù)極與電泳儀的正 、 負(fù)極分別連接 ， 注意不要接錯(cuò) 。 通電 1015min后 ， 將電流調(diào)節(jié)到每厘米膜寬電流強(qiáng)度為 （ 8片共 8mA） ， 電泳時(shí)間約 5080min。 圖 37 電泳裝置剖視示意圖 ⑷ 染色與漂洗（血清蛋白染色與漂洗脫色） 染色與漂洗 （ 血清蛋白染色與漂洗脫色 ） ? 用解剖鑷子取出電泳后的薄膜 ， 放在含 %氨基黑 10B染色液的培養(yǎng)皿中 ， 浸染 5min， 取出后再用漂洗液浸洗脫色 ， 每隔 10min 換漂洗液一次 ， 連續(xù)數(shù)次 ， 直至背景藍(lán)色脫盡 。 圖 38 血清蛋白與脂蛋白醋酸纖維素薄膜電泳圖譜比較示意圖 ⑹ 結(jié)果判斷與定量 結(jié)果判斷與定量 ? 一般血清蛋白電泳經(jīng)蛋白染色后 ， 可顯示 5條區(qū)帶 ， 其排列順序見(jiàn)圖 38a， 未經(jīng)透明處理的電泳圖譜可直接用于定量測(cè)定 。 本實(shí)驗(yàn)不要求進(jìn)行定量分析 ， 如有需要 ， 可采用薄層掃描儀進(jìn)行掃描定量 ， 或采用洗脫后再進(jìn)行比色的方法進(jìn)行定量 。 約半小時(shí)后 ， 用分光光度計(jì)進(jìn)行比色 ， 波長(zhǎng)用 650nm， 以空白薄膜條洗出液為空白對(duì)照 ， 讀取白蛋白 A、 α α β 、 γ 球蛋白各管的光密度 。 蛋白質(zhì)名稱(chēng) 等電點(diǎn) 泳動(dòng)脈 /(cm2S1) 分子量 清蛋白 105 69000 α1 球蛋白 105 202200 α2 球蛋白 105 300000 β 球蛋白 105 9000150000 γ 球蛋白 105 156000300000 纖維蛋白元 105 正常值：白蛋白 57～ 72% α 1球蛋白 2～ 5％ α 2球蛋白 4～ 9％ β 球蛋白 ～ 12％ γ 球蛋白 12～ 20％ 表 312 人血漿蛋白質(zhì)的等電及遷移率備注 備注： ① 醋酸纖維薄膜電泳分析血清蛋白的正常結(jié)果不同于紙上電泳 ， 主要是白蛋白偏高 ， 個(gè)別正常人白蛋白僅超過(guò) 70％ 。 上述正常值僅供參考 。 干燥過(guò)程中 ， 薄膜漸變透明 。目前國(guó)內(nèi)已有自動(dòng)定量的光密度計(jì)生產(chǎn) 。 【 注意事項(xiàng) 】 5 注意事項(xiàng) ⑴ 醋酸纖維素薄膜的預(yù)處理 ⑴ 醋酸纖維素薄膜的預(yù)處理 ? 薄膜的浸潤(rùn)與選膜是電泳成敗的重要關(guān)鍵之一 。 ?
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