分子標記ssr標記ppt課件(編輯修改稿)
2025-06-02 08:13 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 切片段的基因組文庫中擴增，直至獲得微衛(wèi)星序列的另外一側(cè)的序列，再設(shè)計微衛(wèi)星位點另一端的引物。 539。錨定 PCR 分離 SSR標記 ? （ 3）采用 539。錨定 PCR ( 5’anchored PCR)分離 SSR標記 ? 采用的 5’帶有 六個簡并堿基 錨定的微衛(wèi)星序列引物 .這種引物錨定效果要比 1SSR技術(shù)中的隨機錨定引物的特異性好，避免了引物在微衛(wèi)星序列上的滑動 .然后用這個單引物在基因組 DNA中 擴增 ，得到兩端帶有 反向 微衛(wèi)星序列 DNA片段，用 T載體 克隆 PCR產(chǎn)物，然后用Southern雜交 的方法，在高嚴謹度的條件下，獲得含微衛(wèi)星序列的克隆，然后對這些陽性克隆進行 測序 ，根據(jù)獲得的序列，在微衛(wèi)星序列的側(cè)翼 設(shè)計引物 ，用 5‘錨定簡并引物結(jié)合微衛(wèi)星特異性引物，經(jīng)擴增后獲得 單位點的 SSR標記 . ? 也可以通過步查獲得微衛(wèi)星序列另一側(cè)的序列，并設(shè)計另一個引物，然后用成對的特異性引物來擴增單個微衛(wèi)星位點 . 5’錨 定 PCR技術(shù)有兩個明顯的優(yōu)勢，其一，可以簡單而快捷地建立 SSR富集文庫 .第二，對于大多數(shù)位點僅僅需要一個特異性引物就可以獲得位點特異的共顯性標記。因此在以后開發(fā)的分離單位點微衛(wèi)星序列的方法中很多都運用了這種引物 . SAM PL技術(shù)分離 SSR標記 ? SAMP是 Witsenboer等 1997創(chuàng)立的一種分離微衛(wèi)星標記的技術(shù) .它同 AFLP一樣具有擇性堿基的 AFLP引物 接頭的連接 和 預(yù)擴增 的過程 .但是在第二步選擇性擴增時，運用的是一個 末端 帶有 3個選物和 539。錨定微衛(wèi)星引物的組合進行 PCR擴增 ，通過 電泳 獲得多位點的微衛(wèi)星圖，通過不同的 A FLP引物和 539。錨定引物的組合，可以揭示基因組 DNA的所有微衛(wèi)星位點的多態(tài)性 . ? 然而用這種方法獲得的 大多是顯性標記 ，共顯性標記占少數(shù)，因此有必要把具有重要信息的位點轉(zhuǎn)化為帶有有用信息的微衛(wèi)星標記，基于這種想法 H ayden Sharp( 2022)發(fā)表了一種改良 SAM PL程序，獲得 SAM PL圖譜，在分了標記連鎖圖上定位 SAIVI(seectively anplified m isatellite)位點選擇有興趣的 SAP位點，然后有選擇的克隆、測序，根據(jù)這個微衛(wèi)星序列一側(cè)設(shè)計一個特異性引物，用與 F fisher( 1996)相同的方法來獲得單位點的共顯性的微衛(wèi)星標記 . 構(gòu)建富集微衛(wèi)星序列的基因組文庫 ? 構(gòu)建富集微衛(wèi)星序列的基因組文庫是現(xiàn)在分離單微衛(wèi)星位點的主要方法，它與傳統(tǒng)方法不同在于有一個富集微衛(wèi)星序列的步驟，按照富集方法的不同，主要有兩種方法 : ? 引物延伸反應(yīng)富集微衛(wèi)星序列 ? 它的大致步驟為 :首先建立以噬菌?；?M13噬菌體為載體的小片段基因組文庫這種文庫叫初級文庫 .然后用輔助
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1