免疫標(biāo)記技術(shù)ppt課件(編輯修改稿)
2024-11-30 17:36 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 異性抗體，且只要標(biāo)記一種抗抗體，即可達到多種應(yīng)用。 ? 抑制性測定法：先用抗原包被固相載體，然后分為兩組，一組加入用參考抗體和待檢標(biāo)本混合孵育后的混合溶液，另一組不加待檢標(biāo)本只加參考抗體。假如標(biāo)本中不含抗原，則參考抗體未被結(jié)合，因此它可以和包被于固相載體上的抗原結(jié)合。 ? 加入酶標(biāo)記抗抗體和底物顯色，顯色的深淺僅表示剩余的抗體量。與另一組不加待檢標(biāo)本的參考系統(tǒng)比較，被檢標(biāo)本對底物顯色的抑制程度與標(biāo)本中所含抗原量成比例，二者之差，即為待檢抗原的量。 ? 測定抗體的方法 ? 間接法 ? 雙抗原夾心法 ? 競爭法 ? 捕獲包被法 ? ABSELISA法 ? 間接法：是目前最常用的方法。先將抗原包被于固相載體，這些包被的抗原必須是可溶性的，或至少是極微小的顆粒；經(jīng)洗滌，加入含有被測抗體的標(biāo)本；再經(jīng)孵育洗滌后，加入酶標(biāo)記抗抗體（對人的標(biāo)本來說即加酶標(biāo)抗人球蛋白 IgG、 IgM）；再經(jīng)孵育洗滌后，加底物顯色；底物降解的量，即為待測抗體量。 ? 主要用于檢測病原體抗體診斷傳染病。 ? 優(yōu)點是只要變換包被抗原就可利用同一酶標(biāo)抗抗體建立檢測相應(yīng)抗體的方法。 ? 間接法成功的關(guān)鍵在于抗原純度。雖然有時用粗提抗原包被也能取得實際有效的結(jié)果，但應(yīng)盡可能予以純化，以提高實驗的特異性。 ? 雙抗原夾心法：反應(yīng)模式與檢測抗原類似。用特異性抗原包被和制備酶結(jié)合物，以檢測相應(yīng)抗體。與間接法測抗體不同之處為以酶標(biāo)抗原代替酶標(biāo)抗抗體。 ? 此法中受檢標(biāo)本不需稀釋，可直接用于測定，因此其敏感度相對高于間接法。 ? 制備關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原，應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同，尋找合適的標(biāo)記方法。 ? 競爭法：當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去，或不易得到足量純化抗原時，可用此法檢測特異性抗體。其原理為標(biāo)本中的抗體和一定量酶標(biāo)記抗體競爭與固相抗原結(jié)合。標(biāo)本中抗體量越多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)記愈少，因此陽性反應(yīng)呈色淺于陰性反應(yīng)。 ? 如抗原純度高，可直接包被固相。 ? 如抗原中有干擾物質(zhì)，直接包被不易成功，可采用捕獲包被法。即先包被與固相抗原相應(yīng)的抗體，再加入抗原形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質(zhì) ，然后再加標(biāo)本和酶標(biāo)抗體進行競爭結(jié)合反應(yīng)。 ? 捕獲包被法：臨床檢驗中測定 抗體 IgM時多采用捕獲包被法。 間接法 ELISA一般僅適用于檢測總抗體或 IgG抗體。如用抗原包被的間接法直接測定 IgM抗體，因標(biāo)本中一般同時存在較高濃度的 IgG抗體，后者將競爭結(jié)合固相抗原而使部份 IgM抗體不能結(jié)合到固相上。因此用抗人 IgM作為二抗，間接測定IgM抗體。此時必須先將標(biāo)本用抗 IgG抗體處理，以除去 IgG干擾。 ? 先用抗人 IgM抗體包被固相，以捕獲血清標(biāo)本中的IgM（其中包括針對抗原的特異性 IgM抗體和非特異性的 IgM）。然后加入抗原，此抗原僅與特異性IgM相結(jié)合。繼而加酶標(biāo)記針對抗原的特異性抗體。再與底物作用，呈色即與標(biāo)本中的 IgM成正相關(guān)。此法常用于病毒性感染的早期診斷。 ? ABSELISA法： ABS為親和素（ avidin）生物素（ biotin）系統(tǒng)（ system）的略語。生物素與親和素的結(jié)合具有很強的特異性，其親和力較抗原抗體反應(yīng)大得多，兩者一經(jīng)結(jié)合就極為穩(wěn)定。一個親和素可與 4個生物素分子結(jié)合，把 ABS與 ELISA法可分為酶標(biāo)記親和素 生物素（ LAB）法和橋聯(lián)親和素 生物素（ ABC）法兩種類型 。 ? 兩者均以生物素標(biāo)記的抗體（或抗原）代替原 ELISA系統(tǒng)中的酶標(biāo)抗體（或抗原）。在 LAB中，固相生物素先與不標(biāo)記的親和素反應(yīng)，再加酶標(biāo)記的生物素以進一步提高敏感度。由于 ABSELISA較普通 ELISA多用了兩種試劑，增加了操作步驟，在臨床檢驗中
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