免疫標記技術ppt課件(編輯修改稿)
2024-11-30 17:36 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 異性抗體，且只要標記一種抗抗體，即可達到多種應用。 ? 抑制性測定法：先用抗原包被固相載體，然后分為兩組，一組加入用參考抗體和待檢標本混合孵育后的混合溶液，另一組不加待檢標本只加參考抗體。假如標本中不含抗原，則參考抗體未被結(jié)合，因此它可以和包被于固相載體上的抗原結(jié)合。 ? 加入酶標記抗抗體和底物顯色，顯色的深淺僅表示剩余的抗體量。與另一組不加待檢標本的參考系統(tǒng)比較，被檢標本對底物顯色的抑制程度與標本中所含抗原量成比例，二者之差，即為待檢抗原的量。 ? 測定抗體的方法 ? 間接法 ? 雙抗原夾心法 ? 競爭法 ? 捕獲包被法 ? ABSELISA法 ? 間接法：是目前最常用的方法。先將抗原包被于固相載體，這些包被的抗原必須是可溶性的，或至少是極微小的顆粒；經(jīng)洗滌，加入含有被測抗體的標本；再經(jīng)孵育洗滌后，加入酶標記抗抗體（對人的標本來說即加酶標抗人球蛋白 IgG、 IgM）；再經(jīng)孵育洗滌后，加底物顯色；底物降解的量，即為待測抗體量。 ? 主要用于檢測病原體抗體診斷傳染病。 ? 優(yōu)點是只要變換包被抗原就可利用同一酶標抗抗體建立檢測相應抗體的方法。 ? 間接法成功的關鍵在于抗原純度。雖然有時用粗提抗原包被也能取得實際有效的結(jié)果，但應盡可能予以純化，以提高實驗的特異性。 ? 雙抗原夾心法：反應模式與檢測抗原類似。用特異性抗原包被和制備酶結(jié)合物，以檢測相應抗體。與間接法測抗體不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。 ? 此法中受檢標本不需稀釋，可直接用于測定，因此其敏感度相對高于間接法。 ? 制備關鍵在于酶標抗原，應根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同，尋找合適的標記方法。 ? 競爭法：當抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去，或不易得到足量純化抗原時，可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量酶標記抗體競爭與固相抗原結(jié)合。標本中抗體量越多，結(jié)合在固相上的酶標記愈少，因此陽性反應呈色淺于陰性反應。 ? 如抗原純度高，可直接包被固相。 ? 如抗原中有干擾物質(zhì)，直接包被不易成功，可采用捕獲包被法。即先包被與固相抗原相應的抗體，再加入抗原形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質(zhì) ，然后再加標本和酶標抗體進行競爭結(jié)合反應。 ? 捕獲包被法：臨床檢驗中測定 抗體 IgM時多采用捕獲包被法。 間接法 ELISA一般僅適用于檢測總抗體或 IgG抗體。如用抗原包被的間接法直接測定 IgM抗體，因標本中一般同時存在較高濃度的 IgG抗體，后者將競爭結(jié)合固相抗原而使部份 IgM抗體不能結(jié)合到固相上。因此用抗人 IgM作為二抗，間接測定IgM抗體。此時必須先將標本用抗 IgG抗體處理，以除去 IgG干擾。 ? 先用抗人 IgM抗體包被固相，以捕獲血清標本中的IgM（其中包括針對抗原的特異性 IgM抗體和非特異性的 IgM）。然后加入抗原，此抗原僅與特異性IgM相結(jié)合。繼而加酶標記針對抗原的特異性抗體。再與底物作用，呈色即與標本中的 IgM成正相關。此法常用于病毒性感染的早期診斷。 ? ABSELISA法： ABS為親和素（ avidin）生物素（ biotin）系統(tǒng)（ system）的略語。生物素與親和素的結(jié)合具有很強的特異性，其親和力較抗原抗體反應大得多，兩者一經(jīng)結(jié)合就極為穩(wěn)定。一個親和素可與 4個生物素分子結(jié)合，把 ABS與 ELISA法可分為酶標記親和素 生物素（ LAB）法和橋聯(lián)親和素 生物素（ ABC）法兩種類型 。 ? 兩者均以生物素標記的抗體（或抗原）代替原 ELISA系統(tǒng)中的酶標抗體（或抗原）。在 LAB中，固相生物素先與不標記的親和素反應，再加酶標記的生物素以進一步提高敏感度。由于 ABSELISA較普通 ELISA多用了兩種試劑，增加了操作步驟，在臨床檢驗中
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1