免疫標記技術ppt課件(已修改)
2024-11-15 17:36 本頁面
【正文】 免疫標記技術 主要內(nèi)容 ? 免疫熒光技術 ? 放射免疫分析法 ? 酶免疫分析法 ? 免疫印跡法 用標記抗體或抗原進行的抗原抗體反應 ? 用熒光素、放射性核素或酶標記的抗體或抗原是目前廣泛應用的敏感可靠的方法。 ? 上述三種常用的標記物與抗原或抗體化學連接之后不改變后者的免疫特性。 ? 本方法可用于定性、定量或定位檢測。 ? 免疫熒光技術（ Immunofluorescence technique） ? 又稱熒光抗體技術，是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。 ? 此技術是用不影響抗原抗體活性的熒光色素標記抗體（或抗原），再與組織或細胞中的相應的抗原（或抗體）結合后，通過熒光反應檢測抗原抗體的一種技術。 ? 三種方法 ? 直接染色法：將標記的特異熒光抗體直接加在抗原標本上，經(jīng)一定溫度和時間染色，洗去未參加反應的多余熒光抗體，在熒光顯微鏡下見到被檢抗原與熒光抗體形成的特異性結合物而發(fā)出的熒光。 直接免疫熒光 ? 可用于病毒感染細胞、帶某種特異抗原的細胞（如T細胞和 B細胞）或病原體的檢查；也可用于組織者沉著的免疫復合物檢查。 ? 優(yōu)點是特異性高，操作簡便，比較快速 ? 缺點是檢查多種抗原，需分別制備相應的多種標記抗體。 ? 間接染色法：如果檢查組織或細胞上的未知抗原，可將抗原直接與相應抗體（不標記熒光）結合，此為第一抗體，作用一定時間后，洗去未反應的抗體，再把能與第一抗體特異結合有熒光標記的抗抗體即免疫球蛋白抗體（第二抗體）加入，如果第一步中的抗原抗體互相發(fā)生了反應，則抗體被固定，并與第二步加入的熒光素標記的抗抗體結合，形成抗原 抗體 抗抗體復合物，再洗去未反應的標記抗抗體，在熒光顯微鏡下可見熒光。 間接免疫熒光 ? 間接染色法克服直接法需制備多種熒光素標記抗體的復雜操作，用一種標記的抗球蛋白抗體就能與種屬相同的所有動物的抗體結合，檢查各種未知抗原或抗體，且敏感性高。 ? 缺點是，由于參加反應的因素較多，受干擾的可能性也較大，判斷結果有時較難，對照較多，時間長。 ? 抗補體染色法：簡稱補體法，是間接染色法的一種改良法。利用補體結合反應的原理，用熒光素標記抗補體抗體，鑒定未知抗原或未知抗體（待檢血清）。染色程序分為兩步： ? 先將未標記的抗體和補體加在抗原標本上，使其發(fā)生反應，水洗，再加標記的抗補體抗體。 ? 如果第一步中抗原抗體發(fā)生反應，形成復合物，則補體被抗原抗體復合物結合。第二步加入的熒光素標記的抗補體抗體便與補體發(fā)生特異性反應，使之形成 抗原 抗體 補體 抗補體抗體復合物，發(fā)出熒光。 ? 該法優(yōu)點與間接法相同，且只需一種標記抗補體抗體，便能檢測各種抗原 抗體系統(tǒng)。因為補體的作用沒有特異性，可與任何哺乳動物的抗原 抗體系統(tǒng)發(fā)生反應。 ? 缺點是參與反應的成分多，染色程序較復雜，操作較麻煩。 技術特點 ? 免疫熒光技術將抗原和抗體的特異性與形態(tài)學檢查結合，能實現(xiàn)快速、敏感、定位。 ? 但不能觀察組織細胞的細微結構，標本不能永久保存，熒光有自然消退現(xiàn)象，需及時觀察及時照相；在實驗中容易有非特異性熒光干擾。 ? 放射免疫分析法 （ radio immunoassay，RIA） ? 放射免疫分析法應用競爭性結合原理，用放射性核素標記抗原（或抗體）與相應抗體（或抗原）結合，通過測定抗原抗體結合物的放射性活性判斷結果。 ? 可進行超微量分析，敏感性高，特異性強，準確性好，可用于測定抗原、抗體、抗原抗體復合物。 ? 兩種方法 ? 液相法：將待檢標本（含胰島素抗原）與定量放射性核素標記的胰島素（抗原）和定量抗胰島素抗體混合，經(jīng)一定時間作用后
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