抗體標記ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-26 02:46 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ℃ 結合 18～ 24h 離心，除去少量沉淀物裝入透析袋中，用 PBS透析， 4℃ 過夜 用 Sephadex G25或 50過濾，分離游離熒光素，收集標記的熒光抗體 ? 改良法： 稀釋抗體至 10mg/ml，降溫至 4℃ 加入 FITC（抗體蛋白： FITC＝ 50～80mg:1mg）， 4℃ 攪拌 12～ 14h 用半飽和硫酸銨將標記球蛋白沉淀分離，再用 將制備好的熒光抗體加 ％疊氮鈉，分裝保存 ? 透析標記法： pH9～ ，抗體蛋白含量 10～ 40 mg/ml 1)用 pH9～ 1mg/ ml的FITC溶液 2)將 10mg/ml抗體溶液對碳酸緩沖液透析過夜 3)攪拌，緩慢滴加一定體積的 FITC溶液（抗體 : FITC＝100:1），若 pH低于 9，用 NaOH調節(jié) 4)室溫，避光攪拌 2～ 4h；將標記液用 PBS溶液透析 4～ 8h 5)以 Sephadex G25層析柱提純標記物，除去過量 FITC，置于 4℃ 保存 ?熒光抗體的鑒定： 特異性和敏感性鑒定 ?熒光抗體的保存： 4℃ 或 20℃ 低溫保存，最好加入 1:5000~10000的柳硫汞或 1:1000~5000的疊氮鈉，分裝，真空干燥更易長期保存 放射性同位素標記技術 ? 將被標記物分子中某個原子或幾個原子被放射性同位素取代形成同位素標記化合物，是將同位素分析的高靈敏度于與抗原 抗體反應的特異性相結合，以放射性同位素作為示蹤物的標記免疫測定方法 ? 特異性強、靈敏度高、重復性強、樣品及試劑用量少、測定方法易規(guī)范化和自動化 ? 可利用其衰變時放出的放射線進行測量，測量較靈敏而方便 ? H3,C14,I131,I125 ? H3,C14：不改變抗原的結構及其免疫學活性，標記的抗體可長期使用，標記繁瑣，測定麻煩 ? 方法：氯胺 T碘化法和 Indogen包被法 ? 氯胺 T法： 原理： 氯胺 T是一種氧化劑，在水溶液重產(chǎn)生次氯酸，可使帶有負電荷的放射性碘離子氧化成
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