植物dna分子標(biāo)記ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-31 02:52 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 如進(jìn)行電泳分離，只能看到彌散狀的連成一片的電泳結(jié)果。然而，各限制片段在凝膠中還是分開的，但不能分辨。 進(jìn)行 Southern印跡轉(zhuǎn)移操作，用特定的探針與濾膜上的 DNA雜交，經(jīng)過 放射自顯影 就能檢測(cè)到高等植物核 DNA的 RFLP。 (1) (2) 品系 1 品系 2 + – RFLP標(biāo)記方法與步驟 （ 1） DNA的分離：可用 CTAB法或 SDS法 （ 2）酶切：一般根據(jù)基因組總 DNA的復(fù)雜性選 用限制酶。 （ 3）瓊脂糖凝膠電泳 （ 4） Southern印跡轉(zhuǎn)移 （ 5） DNA雜交及放射自顯影 RFLP標(biāo)記優(yōu)點(diǎn) （ 1）不受性別、年齡局限，不會(huì)受表達(dá)的組 織、發(fā)育階段或外界環(huán)境的不同而受影 （ 2）標(biāo)記座位的等位基因間是 共顯性 的，通過 雜交后電泳帶型可直接區(qū)別雜合子和顯性 純合子 （ 3） RFLP標(biāo)記源于基因組 DNA自身變異，在 數(shù)量上幾乎不受限制。 RFLP標(biāo)記缺點(diǎn) （ 1） DNA需要量大。 （ 2）所需儀器較多 （ 3）技術(shù)較為復(fù)雜 （ 4）多數(shù) RFLP表現(xiàn)為二態(tài)性，提供的信息量較低 （ 5）與內(nèi)切酶選用密切相關(guān) RAPD標(biāo)記 ? 1990年， 美國杜邦公司 科學(xué)家 Williams推出。 ? RAPD方法是在 PCR技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，它利用一系列單個(gè)隨機(jī)引物（通常為 10個(gè)核苷酸），對(duì)所研究的基因組 DNA進(jìn)行 PCR擴(kuò)增，引物與基因組 DNA某一區(qū)段互補(bǔ)時(shí)，就與其結(jié)合，就可對(duì)引物下游 DNA進(jìn)行合成，即擴(kuò)增。 RAPD的基本概念和原理 RAPD的引物： （ 1）為隨機(jī)引物 （ 2）序列較短（通常為 10個(gè)核苷酸） （ 3）為一個(gè)寡核苷酸單鏈引物 品系 1 品系 2 RAPD的基本實(shí)驗(yàn)程序 1. DNA的提取 2. 模板 DNA濃度和質(zhì)量的檢測(cè) 3. PCR擴(kuò)增 4. 電泳檢測(cè)： PCR結(jié)束后每個(gè)樣品加 4ul凝膠上樣緩沖液，每個(gè)泳道點(diǎn)樣 20ul。 5. 將凝膠浸于 1ug/ml的 EB中 30min~60min，用水清洗約 10min，觀察、拍照。 6. 統(tǒng)計(jì)分析：記錄條帶清晰的 RAPD條帶，計(jì)算帶紋相似率；計(jì)算帶頻率、群內(nèi)遺傳純度； DNA片段大小。 RAPD結(jié)果 Timothy geic variation (Guo et al. 2022) RAPD的優(yōu)缺點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn)： （ 1）不需 DNA探針，設(shè)計(jì)引物不需知道序列信息。覆蓋整個(gè)基因組。具有廣泛適用性和通用性。 （ 2）用一個(gè)引物可擴(kuò)增出多片段。 （ 3）技術(shù)簡單，需要樣品量少，成本低。 （ 4）每個(gè) RAPD標(biāo)記相當(dāng)于基因組分析中的靶序列位點(diǎn)，簡化信息的轉(zhuǎn)移過程。 （ 5）可以對(duì) RFLP難以分析的基因組區(qū)域做遺傳連鎖圖。 （ 6）分析自動(dòng)化。 RAPD的優(yōu)缺點(diǎn) 缺點(diǎn)： （ 1）顯性標(biāo)記，無法區(qū)別顯性純合體和雜合體。 （ 2）對(duì)反應(yīng)條件敏感，重復(fù)性差。模板濃度、 Mg 2+濃度， PCR反應(yīng)中條件的變化等。 （ 3）存在共遷移問題。不同個(gè)體相同分子量的片段 不一定同源；一條帶可能包含不同的產(chǎn)物。 AFLP標(biāo)記 ? AFLP：擴(kuò)增片段長度多態(tài)性 （ amplified fragment length polymorp
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