植物dna分子標(biāo)記ppt課件(存儲(chǔ)版)
【正文】 只能看到彌散狀的連成一片的電泳結(jié)果。 生物能快速、精確地復(fù)制自身的 DNA，但這種精確性是相對(duì)的。 DNA分子標(biāo)記（ DNA molecular marker）直接在 DNA分子水平上檢測(cè)生物間的差異，是 DNA水平上遺傳變異的直接反應(yīng)。 隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)在 DNA分子標(biāo)記技術(shù)已有數(shù)十種，廣泛應(yīng)用于遺傳育種、基因組作圖、基因定位、物種親緣關(guān)系鑒別、基因庫(kù)構(gòu)建、基因克隆等方面。實(shí)際上，在植物的自然群體中存在大量的 DNA序列變異。然而，各限制片段在凝膠中還是分開(kāi)的，但不能分辨。 5. 將凝膠浸于 1ug/ml的 EB中 30min~60min，用水清洗約 10min，觀察、拍照。 （ 5）可以對(duì) RFLP難以分析的基因組區(qū)域做遺傳連鎖圖。 AFLP的基本原理 植物基因組 DNA經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化形成相對(duì)分子量大小不等的隨機(jī)限制性酶切片段，隨后將特定的接頭連接在這些 DNA片段兩端，接頭序列和鄰近限制性酶切位點(diǎn)作為引物進(jìn)行 PCR擴(kuò)增，最后通過(guò) PAGE分離擴(kuò)增的特異限制性片段。 CORE ENZ EXT AFLP的優(yōu)缺點(diǎn) ? 優(yōu)點(diǎn)： （ 1）少量引物可獲得較多標(biāo)記， 50~150條帶 （ 2）多為顯性標(biāo)記或共顯性標(biāo)記，受環(huán)境影響 小，無(wú)復(fù)等位效應(yīng) （ 3）帶型清晰，具高分別率 （ 4）由于用兩種引物經(jīng)兩步選擇擴(kuò)增，帶型穩(wěn)定，帶紋豐富，靈敏度高，重復(fù)性好 （ 5）不需事先知道 DNA序列信息 ? 缺點(diǎn)：操作復(fù)雜，費(fèi)用較高 SSR標(biāo)記 ?SSR：簡(jiǎn)單重復(fù)序列（ simple sequence repeat）多態(tài)性，也叫微衛(wèi)星標(biāo)記。g 50ng 50ng 50ng 50ng 使用同位素 是 否 是 /否 否 否 探針 DNA短片段 隨即引物 專一引物 專一引物 專一引物 費(fèi)用 中等 低 高 高 高 標(biāo)記系統(tǒng)在應(yīng)用時(shí)的選擇 分子標(biāo)記的應(yīng)用 ? 分子標(biāo)記遺傳圖譜的構(gòu)建和基因定位 ? 分子標(biāo)記對(duì)質(zhì)量性狀的基因定位 ? 數(shù)量性狀基因位點(diǎn)（ QTL）分子標(biāo)記對(duì)定位的研究 ? 分子標(biāo)記輔助選擇育種 ? 比較基因組分析 ? 分子標(biāo)記用于種質(zhì)鑒定的研究 基因芯片技術(shù)和應(yīng)用 概念：采用原位合成或直接點(diǎn)樣的方法將 大量 DNA片段 或 寡核苷酸片段 以預(yù)先設(shè)計(jì)的方式排列在 硅片、玻璃等介質(zhì) 上形成 微矩陣 ，待檢測(cè)樣品用熒光分子標(biāo)記后，與微矩陣雜交，通過(guò) 熒光掃描及計(jì)算機(jī)分析 即可獲得樣品中大量的 基因序列 及 表達(dá)信息 ，以達(dá)到快速、高效、高通量的分析生物信息的目的。正因?yàn)檎婧松镏懈缓?jiǎn)單重復(fù)序列，而重復(fù)序列兩端往往是相對(duì)保守的限制酶位點(diǎn)，所以通過(guò)特異引物進(jìn)行 PCR擴(kuò)增反應(yīng)、瓊脂糖凝膠電泳和放射自顯影，就可檢測(cè)到簡(jiǎn)單重復(fù)序列單位數(shù)不同的 DNA區(qū)域多態(tài)性。 MseI 5 180。不同個(gè)體相同分子量的片段 不一定同源；一條帶可能包含不同的產(chǎn)物。 （ 3）技術(shù)簡(jiǎn)單，需要樣品量少，成本低。 ? RAPD方法是在 PCR技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的，它利用一系列單個(gè)隨機(jī)引物（通常為 10個(gè)核苷酸），對(duì)所研究的基因組 DNA進(jìn)行 PCR擴(kuò)增，引物與基因組 DNA某一區(qū)段互補(bǔ)時(shí)，就與其結(jié)合，就可對(duì)引物下游 DNA進(jìn)行合成，即擴(kuò)增。但是在不同物種、不同品種、甚至同一品種的不同的兩個(gè)個(gè)體之間， DNA會(huì)發(fā)生變異，其中有些變異導(dǎo)致了限制性酶切位點(diǎn)的更動(dòng)，從而產(chǎn)生了 限制片段長(zhǎng)度 的 多態(tài)性 。 包括基因組 DNA
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