分子標(biāo)記ssr標(biāo)記ppt課件(參考版)
2025-05-09 08:13本頁面
【正文】 這項研究能夠填補(bǔ)國內(nèi)在這方面研究的空白，根據(jù)目前掌握的方法，開發(fā)這樣的大規(guī)模的 ssR標(biāo)記及連鎖圖的繪制已經(jīng)不是問題不是不可能的事。如果有兩套基因組，則可以通過電子 PCR方法找出多態(tài)性，這樣還可以減少做多態(tài)性篩選的費(fèi)用。 SNP具有比 SSR更高的多態(tài)性，大約高 10一 100倍，但尋找和研究 SNP的技術(shù)和方法還在發(fā)展之中，一般需要依賴 DNA芯片等設(shè)備，近階段還不能象 SSR一樣在普通實驗室中得到應(yīng)用，也不現(xiàn)實 .如果要完整開發(fā)、研究 SNP，和 STS、 sCAR、 EsT、 AFLP一樣，至少需要具有兩套同源全基因組數(shù)據(jù)，并且排除測序上可能存在的錯誤，這在目前背景中是難于實現(xiàn)的。 SSR標(biāo)記與 AFLP、 RAPD等標(biāo)記均是以 PCR為基礎(chǔ)的分子標(biāo)記，但 SSR標(biāo)記的特殊之處在于其具有針對性的微衛(wèi)星結(jié)構(gòu)域，不象其他屬于隨機(jī)多態(tài)性標(biāo)記，重復(fù)率要受到影響，所以尋找 SSR標(biāo)記的方法也是不一樣的。因而有必要充分的利用不斷增加的基因組序列數(shù)據(jù)資源。 STMP ? STMP技術(shù)一種快速、高效分離 SSR標(biāo)記的技術(shù) ? STMP(Sequence一 tagged m isatellite pnfiling)是 H ayden ( 2022年 )在 Nucleic acxlresearch發(fā)表的文章中介紹的一種方法 .它利用SAGE ( serial analysis of gene expressxn)原理，建立含微衛(wèi)星序列標(biāo)簽文庫，可以快速大通量 (比常規(guī)高 25倍 )的分離單位點微衛(wèi)星序列 .它通過 擴(kuò)增 含有微衛(wèi)星序列片段，再用限制性內(nèi)切酶在識別位點下游酶切 這些片段，產(chǎn)生了標(biāo)簽序列 .雖然這段序列僅有 16飾但卻可以區(qū)分4 3x10倒 6)個不同的微衛(wèi)星位點，大大超過了在植物中估計含有的微衛(wèi)星位點的數(shù)日 .然后把這些 標(biāo)簽序列連接 起來形成串聯(lián)體，再把它 連接到載體 上，經(jīng) 測序 后，獲得串聯(lián)體中各個標(biāo)簽的序列 .由于在一個載體上串聯(lián)有平均 25個左右的標(biāo)簽，所以一個克隆就可以鑒定出多個微衛(wèi)星位點 .在串聯(lián)體中標(biāo)簽和標(biāo)簽間由一段序列 (內(nèi)切酶識別序列 )來標(biāo)志，這樣就可以分辨每個標(biāo)簽和標(biāo)簽的方向 .每個標(biāo)簽長度足夠設(shè)計引物可以用在基因組 DNA或在酶切的基因組 DNA擴(kuò)增片段池中分離 SSR標(biāo)記了 .它包括 :雙酶切、加接頭經(jīng) PCR擴(kuò)增產(chǎn)生帶有 PstI,M seI頭的擴(kuò)增片段、用接頭引物與微衛(wèi)星錨定引物擴(kuò)增帶有微衛(wèi)星序列的片段、富積帶有微衛(wèi)星序列的擴(kuò)增片段、用且 s型限制性內(nèi)切酶酶切產(chǎn)生標(biāo)簽序列(啤 )、在 339。常鏈為模板替換另一條鏈中 (IUTP替換為 c}I39。錨定引物的組合，可以揭示基因組 DNA的所有微衛(wèi)星位點的多態(tài)性 . ? 然而用這種方法獲得的 大多是顯性標(biāo)記 ，共顯性標(biāo)記占少數(shù)，因此有必要把具有重要信息的位點轉(zhuǎn)化為帶有有用信息的微衛(wèi)星標(biāo)記，基于這種想法 H ayden Sharp(
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