植物dna分子標(biāo)記ppt課件(參考版)
2025-05-07 02:52本頁(yè)面
【正文】 基因芯片技術(shù)和應(yīng)用 ? 實(shí)驗(yàn)操作： ? 準(zhǔn)備探針： RNA提取 → 標(biāo)記 → 熒光染料 ? 雜交反應(yīng) ? 雜交后的處理 ? 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：異種 DNA平行試驗(yàn)； RNA質(zhì)量 檢測(cè)對(duì)照；封閉對(duì)照；規(guī)整化對(duì)照 ? 成像分析 Gene chip 基因芯片技術(shù)和應(yīng)用 ?基因芯片的應(yīng)用： 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究；藥物篩選；臨床診斷；指導(dǎo)用藥；預(yù)防醫(yī)學(xué)研究；環(huán)境保護(hù)；軍事、司法；農(nóng)業(yè)等 ?基因芯片使用應(yīng)注意的問(wèn)題： 類(lèi)型的選擇；基因芯片數(shù)量；取材；取材量；結(jié)果分析；多種芯片結(jié)合應(yīng)用 。g 50ng 50ng 50ng 50ng 使用同位素 是 否 是 /否 否 否 探針 DNA短片段 隨即引物 專(zhuān)一引物 專(zhuān)一引物 專(zhuān)一引物 費(fèi)用 中等 低 高 高 高 標(biāo)記系統(tǒng)在應(yīng)用時(shí)的選擇 分子標(biāo)記的應(yīng)用 ? 分子標(biāo)記遺傳圖譜的構(gòu)建和基因定位 ? 分子標(biāo)記對(duì)質(zhì)量性狀的基因定位 ? 數(shù)量性狀基因位點(diǎn)（ QTL）分子標(biāo)記對(duì)定位的研究 ? 分子標(biāo)記輔助選擇育種 ? 比較基因組分析 ? 分子標(biāo)記用于種質(zhì)鑒定的研究 基因芯片技術(shù)和應(yīng)用 概念：采用原位合成或直接點(diǎn)樣的方法將 大量 DNA片段 或 寡核苷酸片段 以預(yù)先設(shè)計(jì)的方式排列在 硅片、玻璃等介質(zhì) 上形成 微矩陣 ，待檢測(cè)樣品用熒光分子標(biāo)記后，與微矩陣雜交，通過(guò) 熒光掃描及計(jì)算機(jī)分析 即可獲得樣品中大量的 基因序列 及 表達(dá)信息 ，以達(dá)到快速、高效、高通量的分析生物信息的目的。正因?yàn)檎婧松镏懈缓?jiǎn)單重復(fù)序列，而重復(fù)序列兩端往往是相對(duì)保守的限制酶位點(diǎn)，所以通過(guò)特異引物進(jìn)行 PCR擴(kuò)增反應(yīng)、瓊脂糖凝膠電泳和放射自顯影，就可檢測(cè)到簡(jiǎn)單重復(fù)序列單位數(shù)不同的 DNA區(qū)域多態(tài)性。 真核生物基因組中散布著大量的微衛(wèi)星 DNA，微衛(wèi)星DNA由更短的重復(fù)單位串聯(lián)而成，重復(fù)長(zhǎng)度一般為2~6bp，一個(gè) SSR總長(zhǎng)度可達(dá)幾十到幾百 bp。以人類(lèi)基因組為例，平均每 1520kb就存在 1個(gè) STR座位，據(jù)此估計(jì)整個(gè)人類(lèi)基因組中大約有 50,000100,000個(gè) STR位點(diǎn)。 CORE ENZ EXT AFLP的優(yōu)缺點(diǎn) ? 優(yōu)點(diǎn)： （ 1）少量引物可獲得較多標(biāo)記， 50~150條帶 （ 2）多為顯性標(biāo)記或共顯性標(biāo)記，受環(huán)境影響 小，無(wú)復(fù)等位效應(yīng) （ 3）帶型清晰，具高分別率 （ 4）由于用兩種引物經(jīng)兩步選擇擴(kuò)增，帶型穩(wěn)定，帶紋豐富，靈敏度高，重復(fù)性好 （ 5）不需事先知道 DNA序列信息 ? 缺點(diǎn)：操作復(fù)雜，費(fèi)用較高 SSR標(biāo)記 ?SSR：簡(jiǎn)單重復(fù)序列（ simple sequence repeat）多態(tài)性，也叫微衛(wèi)星標(biāo)記。 MseI 5 180。 如： EcoRI引物和 MseI引物 EcoRI 5 180。 AFLP的基本原理 AFLP引物是一種人工合成的單鏈寡核苷酸，一般長(zhǎng)度為 18~20個(gè)核苷酸。 AFLP的基本原理 植物基因組 DNA經(jīng)限制性?xún)?nèi)切酶消化形成相對(duì)分子量大小不等的隨機(jī)限制性酶切片段，隨后將特定的接頭連接在這些 DNA片段兩端，接頭序列和鄰近限制性酶切位點(diǎn)作為引物進(jìn)行 PCR擴(kuò)增，最后通過(guò) PAGE分離擴(kuò)增的特異限制性片段。不同個(gè)體相同分子量的片段 不一定同源；一條帶可能包含不同的產(chǎn)物。模板濃度、 Mg 2+濃度， PCR反應(yīng)中條件的變化等。 RAPD的優(yōu)缺點(diǎn) 缺點(diǎn)： （ 1）顯性標(biāo)記，無(wú)法區(qū)別
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