分子雜交技術(shù)ppt課件(2)(參考版)
2025-05-09 08:13本頁(yè)面
【正文】 本方法結(jié)合了凝膠電泳分辨率高和免疫檢測(cè)靈敏特異的特點(diǎn)，能從混雜的蛋白質(zhì)中檢測(cè)出特定的抗原。 （ 3）在膜上以相應(yīng)的抗體進(jìn)行 抗原／抗體反應(yīng) 。 WESTERN BLOTTING 其基本過(guò)程為： （ 1）首先做蛋白質(zhì)的 SDSPAGE電泳 。 組織原位雜交 （ Tissue in situ hybridization） 第四節(jié) 蛋白質(zhì)分子雜交 ? 自從 1975年蘇格蘭愛(ài)丁堡大學(xué) Southern EM 首先提出 DNA的印跡術(shù)（ Southern Blotting)以來(lái)，給后人許多的啟示， 1977年 Alwine將此技術(shù)應(yīng)用于 RNA的研究 ——Nouthern Blotting。 因此 ,原位雜交可以確定探針的互補(bǔ)序列在胞內(nèi)的空間位置 ， 這一點(diǎn)具有重要的生物學(xué)和病理學(xué)意義 。 流程 為多個(gè)片段 （或者電泳之后變性），使各片段分離 段轉(zhuǎn)移到固相支持物上 雜交 流程 為多個(gè)片段 （或者電泳之后變性），使各片段分離 段轉(zhuǎn)移到固相支持物上 雜交 Northern 印跡雜交 ? 檢測(cè) RNA（主要是 mRNA）的方法 ? 與 Southern雜交的不同 ?靶核酸： RNA ? RNA電泳 ?轉(zhuǎn)膜：不需變性 ?組織原位雜交簡(jiǎn)稱原位雜交 ， 指組織或細(xì)胞的原位雜交 ， 它與菌落的原位雜交不同 。為使點(diǎn)樣準(zhǔn)確方便，市售有多種多管吸印儀（ manifolds），如Minifold I和 II、 BioDot (Bio –Rad )和 Hybri –Dot,它們有許多孔，樣品加到孔中，在負(fù)壓下就會(huì)流到膜上呈斑點(diǎn)狀或狹縫狀，反復(fù)沖洗進(jìn)樣孔，取出膜烤干或紫外線照射以固定標(biāo)本，這時(shí)的膜就可以進(jìn)行雜交。 固相核酸分子雜交類型 斑點(diǎn)雜交（ Dot blot） 斑點(diǎn)雜交法是將被檢標(biāo)本點(diǎn)到膜上，烘烤固定。 －－雜交本底較高 固相雜交的一般程序 流程 DNA在硝酸纖維薄膜上的固定 菌落原位雜交 （ Colony in situ hybridization） 菌落原位雜交是將細(xì)菌從培養(yǎng)平板轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素濾膜上，然后將濾膜上的菌落裂菌以釋出 DNA。 ? 低鹽也能很好結(jié)合（可用于核酸電轉(zhuǎn)移）。 ? 韌性較強(qiáng)，操作方便。 ?真空烘干后或紫外線照射可強(qiáng)化結(jié)合（短波 UV照射后 , 部分嘧啶堿基與其氨基交聯(lián)，更加牢固）。 g/ cm2 ～ 500181。 ?雜交本底較低。 g/ cm2 ）。 固相雜交支持物的選擇 幾種常用固相支持物 1)硝酸纖維素慮膜（ nitrocel
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