核酸分子雜交ppt課件(2)(參考版)
2025-05-15 04:01本頁面
【正文】 8,天然鹽堿地 End! 。 6, 200mM Na2CO3處理 48h。 4, 200mM Na2CO3處理 12h。 2, 200mM Na2CO3處理 2h。 ? 分析實驗結(jié)果。 作業(yè) ? 按要求認真撰寫報告，包括實驗?zāi)康?、實驗原理、實驗材料、實驗用品及藥品、實驗步驟、實驗結(jié)果。 ? 保證洗膜的質(zhì)量，保證雜質(zhì)的洗脫。 ? 掌握紫外固定的時間，時間過長會造成核酸的斷裂。 ? 低電壓長時間電泳，以保證雜交質(zhì)量。注意器具的消毒，實驗過程中帶手套，減少說話和走動等防止 RNase的污染，來保證 RNA不被降解。 ? 觀察、分析雜交結(jié)果。 實驗步驟 實驗步驟－轉(zhuǎn)膜 實驗步驟－轉(zhuǎn)膜 瓊脂糖凝膠 醋酸纖維素膜 預(yù)雜交 buffer中含有 ‘ blocking reagents’ 能占據(jù)膜上的可結(jié)合位點 實驗步驟 實驗步驟－雜交 實驗步驟－加入抗體 AntiDig 實驗步驟－加入發(fā)光底物 CDPSTAR 實驗步驟－洗膜 ? X光片的曝光 – 將封好的膜放在暗盒中，暗室中在其上放臵好 X光片，蓋好暗盒， X光片曝光 45min。 ? 鮭精 DNA 100℃ ，變性 5min，之后冰上備用 ? 將結(jié)合了 RNA的硝酸纖維素膜臵于雜交袋內(nèi)并加入 5ml預(yù)雜交液， 25ul變性好的鮭精 DNA ，排除袋內(nèi)的氣泡后，封口， 50℃ 恒溫水浴，震蕩 1h。 ? 交聯(lián) ? 短波紫外線固定 30s。用封口膜封邊，放上疊好的吸水紙，壓上約 1000 g的重物。紫外凝膠成像檢測電泳效果。 ? 電泳 ? 制備大板膠。一般調(diào)節(jié)總 RNA的濃度到 1 ug/uL。 ? 根據(jù)測定的吸光度 (A260)進行濃度的調(diào)整和稀釋（ OD260 40181。 ? 放臵合適大小的梳子，將溫?zé)岬沫傊悄z倒入膠模中，凝膠厚度在 35 mm之間，大約需要凝固 20min。 ? 配制 %的瓊脂糖凝膠（ 于 50ml三角瓶中 ，加入 1 MOPS 20ml） ，在微波爐中加熱至瓊脂糖溶解。 ? 260nm和 280nm讀數(shù)比值（ A260/A280）可反映核酸的純度 ? 純品的 A260/A280的值為 ， ? 低于 A260/A280，有蛋白質(zhì)或酚的污染。 實驗步驟－ RNA濃度檢測 ? RNA濃度測定 ? 取 1ul RNA樣品，加水 199ul后讀取 260nm處的吸光度值 ? 260nm處的吸光度值相當(dāng)于 40181。 ? 沉淀溶于 20 181。 ? 棄上清， 70%乙醇洗沉淀，離心， 4℃ 12022 rpm離心 5 min。 ? 取上清，加入等體積的異丙醇和 1/2體積的 mol/L NaCl，充分混勻。L，混勻 10min， 4℃ 8000rpm離心 10min。 ? 取適量材料，在液氮充分研磨成粉末后，裝入離心管中，用力充分混勻。 ? 膜上印跡雜交 – 將待測的 DNA或 RNA分子經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分離后原位轉(zhuǎn)移到固相支持物（硝酸纖維素膜或尼龍膜）上 – 雜交液（液相）中的探針與印跡到固相膜上的特異片段發(fā)生雜交 實驗原理 ? 分子雜交的實驗涉及到的三項技術(shù) – 核酸凝膠電泳技術(shù) – 印跡技術(shù) – 分子雜交技術(shù) ? 分子雜交的實驗涉及到的三大內(nèi)容 –
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1