核酸分子雜交ppt課件(2)-展示頁
2025-05-21 04:01本頁面
【正文】 可以利用 Northern雜交來檢測不同生長發(fā)育階段和不同的組織部位相關(guān)基因的表達(dá)情況。 實驗原理－分子雜交 植物材料 RNA DNA 合成探針 Southern雜交 Northern雜交 原位雜交 組織切片 ? 分子雜交是進行核酸序列分析，重組子鑒定，及檢測外源基因整合及表達(dá)的強有力的手段。 ? 核酸分子雜交是指非同一分子來源但具有互補序列(或某一區(qū)段互補 )的兩條多核苷酸鏈，通過 Watson—Crick堿基配對形成穩(wěn)定的雙鏈分子的過程。 ? 分子雜交 – 核酸分子雜交，其中又包括 Southern雜交及Northern雜交。 ? 放置合適大小的梳子，將溫?zé)岬沫傊悄z倒入膠模中，凝膠厚度在 35 mm之間，大約需要凝固 20min。 ? 配制 %的瓊脂糖凝膠（ 瓊脂糖于 500ml三角瓶中 ，加入1 MOPS 200ml） ，在微波爐中加熱至瓊脂糖溶解。 ? 260nm和 280nm讀數(shù)比值（ A260/A280）可反映核酸的純度 ? 純品的 A260/A280的值為 ， ? 低于 A260/A280，有蛋白質(zhì)或酚的污染。 五、實驗步驟 ? RNA濃度測定 ? 取 1ul RNA樣品，加水 199ul后讀取260nm處的吸光度值 ? 260nm處的吸光度值相當(dāng)于 40181。 8. 沉淀溶于 20 181。 6. 棄上清， 70%乙醇洗沉淀，離心， 4℃ 12022 rpm離心 5 min。 5. 取上清，加入等體積的異丙醇和 1/10體積的 5 mol/L NaCl，充分混勻。L，混勻 10min， 4℃ 8000rpm離心 10min。 2. 取適量材料，在液氮充分研磨成粉末后，裝入離心管中，用力充分混勻。 實驗設(shè)備 ? 常規(guī)設(shè)備 – 移液器 ， tip頭， 離心機 ? RNA電泳 – 金屬浴，水 平凝膠電泳儀，微波爐， 紫外凝膠成像系統(tǒng) ? 紫外分光光度計 實驗試劑 ? RNA提取液 – 100 mmol/L Tris–Cl – 20 mmol/L EDTA – NaCl – 1%SDS ? β巰基乙醇 、 苯酚 、 氯仿 、異戊醇、異丙醇、乙醇 ? 瓊脂糖、 MOPS、 EB替代品 實驗步驟 新鮮植物材料 液氮研磨 抽提液 混勻 酚 /氯仿抽提 水層 中間層 有機層 加入異丙醇沉淀 干燥 水融 反復(fù)抽提 實驗步驟 1. 向 mL 離心管中加入 700?L RNA提取液， 35181。 ? 核酸的純化 – DNA的去除 – 酚、氯仿抽提使 蛋白質(zhì) 變性、沉淀，可去除蛋白?，F(xiàn)代分子生物學(xué)大實驗 實驗三 總 RNA的提取與 Northern雜交 實驗?zāi)康? ? 掌握植物總 RNA的提取及凝膠電泳檢測的原理及方法并能熟練操作 ? 對于不同的植物組織，選取不同的提取方法，提取植物的總 RNA ? 重點掌握 Northern雜交基本原理、基本實驗步驟和檢測方法 ? 利用 Northern雜交檢測目的基因的時空表達(dá)情況，如不同生長發(fā)育階段、不同的組織部位、不同生長環(huán)境等條件下相關(guān)基因的表達(dá)情況 植物總 RNA 的提取及電泳檢測 ?掌握植物總 RNA的提取及凝膠電泳檢測的原理
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