第十章核酸分子雜交技術(shù)-展示頁
2024-10-15 15:27本頁面
【正文】 影響雜 交效率 溫度： （ 1） DNA/DNA雜交，適宜溫度較 Tm值低 20~25℃ （ 2） RNA/DNA或 RNA/RNA雜交，加甲酰胺降低 Tm值 （ 3）用寡核苷酸探針雜交，適宜溫度較 Tm值低 5℃ 離子強度： （ 1）低鹽濃度時雜交率較低，隨著鹽濃度增加，雜交率增加 （ 2）高濃度的鹽使堿基錯配的雜交體更穩(wěn)定，當(dāng)進行序列不完全同源的核酸分子雜交時，必須維持雜交反應(yīng)液中較高的鹽濃度和洗膜溶液的鹽濃度 甲酰胺： （ 1）甲酰胺能降低核酸雜交的 Tm值，能降低雜交液的溫度，低溫時探針與待測核酸雜交更穩(wěn)定，當(dāng)待測核酸與探針同源性不高時，加 50%甲酰胺溶液在35~42 ℃ 雜交 （ 2）如待測核酸序列與探針同源性高時，則用水溶液在 68℃ 雜交 核酸分子的復(fù)雜性： （ 1）核酸的復(fù)雜性是指存在于反應(yīng)體系中不同順序的總長度 （ 2） Cot189。 變性后的理化性質(zhì)變化： 粘度降低 密度增加 紫外吸收值增加 DNA變性曲線 AT區(qū)先解鏈 GC區(qū)后解鏈 階梯式曲線 GC含量與 Tm值之間的關(guān)系 （ G+C） %=（ ) Tm =(G+C)% + （二）復(fù)性 定義：變性的單鏈核酸分子在一定條件下按堿基互補原則重新結(jié)合為雙鏈核酸的過程，稱復(fù)性或雜交。 （ 2）酸堿變性： pH值低于 3或高于 10時，雙鏈核 酸分子鏈 間的氫鍵斷裂。 ? 雜交有固一液相雜交和液相雜交。第十章 核酸分子雜交技術(shù) 第一節(jié) 核酸分子雜交的基本原理 ? 具有互補序列兩條單鏈核酸分子在一定條件下 按堿基互補配對原則退火形成雙鏈的過程。 ? 雜交的雙方是待測核酸和已知核酸序列，已知 核酸序列稱探針。 變性 復(fù)性 DNADNA 雜交雙鏈分子 一、 DNA變性與復(fù)性 （一） DNA變性 定義：某些理化因素導(dǎo)致兩條 DNA鏈間的氫鏈斷裂變?yōu)閱捂湹倪^程，稱 DNA變性 變性的方法： （ 1）熱變性：溫度升高到 90~100℃ 時，雙鏈核酸 分子鏈間的氫鍵完全斷裂。 （ 3）化學(xué)試劑變性：如尿素、甲酰胺、甲醛等使 雙鏈核酸分子鏈間的氫鍵斷裂。 具有互補序列的兩條單鏈核酸都可互補形成雙鏈： DNA/DNA、 RNA/DNA、 RNA/RNA、寡核苷酸/DNA和寡核苷酸 /RNA。與反應(yīng)體系中核酸復(fù)雜性成正比 （ 3）兩個 DNA樣品濃度絕對一致時，變性后的相對雜交率取決于 DNA的相對復(fù)雜性 非特異性雜交反應(yīng)： （ 1）雜交前封閉非特異性雜交位點，減少其對探針的非特異性吸附 （ 2）常用的封閉物有兩類：即非特異性 DNA和高分子化合物。缺點是
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