分子標(biāo)記ssr標(biāo)記ppt課件-文庫(kù)吧資料
2025-05-12 08:13本頁(yè)面
【正文】 2022)發(fā)表了一種改良 SAM PL程序，獲得 SAM PL圖譜，在分了標(biāo)記連鎖圖上定位 SAIVI(seectively anplified m isatellite)位點(diǎn)選擇有興趣的 SAP位點(diǎn)，然后有選擇的克隆、測(cè)序，根據(jù)這個(gè)微衛(wèi)星序列一側(cè)設(shè)計(jì)一個(gè)特異性引物，用與 F fisher( 1996)相同的方法來(lái)獲得單位點(diǎn)的共顯性的微衛(wèi)星標(biāo)記 . 構(gòu)建富集微衛(wèi)星序列的基因組文庫(kù) ? 構(gòu)建富集微衛(wèi)星序列的基因組文庫(kù)是現(xiàn)在分離單微衛(wèi)星位點(diǎn)的主要方法，它與傳統(tǒng)方法不同在于有一個(gè)富集微衛(wèi)星序列的步驟，按照富集方法的不同，主要有兩種方法 : ? 引物延伸反應(yīng)富集微衛(wèi)星序列 ? 它的大致步驟為 :首先建立以噬菌?；?M13噬菌體為載體的小片段基因組文庫(kù)這種文庫(kù)叫初級(jí)文庫(kù) .然后用輔助噬菌體、超感染初級(jí)文庫(kù)，產(chǎn)生單鏈環(huán)狀 DNA，以單鏈 DNA為摸板，用微衛(wèi)星序列為引物合成雙鏈 DNA， 然后富集雙鏈 .其卞要步驟如下 : ? （ 1）經(jīng)酶切的基因組 DNA與噬菌粒相連，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌菌株，構(gòu)建初級(jí)文庫(kù) .在這種菌株 .由于缺乏 (IUTP ase和 UDG(尿哈陡一 DNA糖基化酶 )，在復(fù)制過(guò)程中 (IUTP可以有效地代替 cII39。因此在以后開(kāi)發(fā)的分離單位點(diǎn)微衛(wèi)星序列的方法中很多都運(yùn)用了這種引物 . SAM PL技術(shù)分離 SSR標(biāo)記 ? SAMP是 Witsenboer等 1997創(chuàng)立的一種分離微衛(wèi)星標(biāo)記的技術(shù) .它同 AFLP一樣具有擇性堿基的 AFLP引物 接頭的連接 和 預(yù)擴(kuò)增 的過(guò)程 .但是在第二步選擇性擴(kuò)增時(shí)，運(yùn)用的是一個(gè) 末端 帶有 3個(gè)選物和 539。錨定 PCR 分離 SSR標(biāo)記 ? （ 3）采用 539。 ? ( 2)利用 1SSR技術(shù)分離單基因座微衛(wèi)星序列 ? 1SSR是 1994報(bào)道的一種方法 .這種方法是用 3’或 5’端帶有 1一 4個(gè)錨定堿基的微衛(wèi)星引物，來(lái)擴(kuò)增基因組獲得在兩端帶有相反排列的微衛(wèi)星序列的 DNA片段，經(jīng)電泳后，顯示復(fù)雜的指紋圖譜 .用 1SSR引物在基因組 DNA中擴(kuò)增，獲得 1SSR DNA片段，然后克隆，經(jīng)測(cè)序后，根據(jù)微衛(wèi)星序列間的 DNA序列設(shè)計(jì)兩個(gè)巢式引物 .然后運(yùn)用巢式引物用“步查”的方法在不同酶切片段的基因組文庫(kù)中擴(kuò)增，直至獲得微衛(wèi)星序列的另外一側(cè)的序列，再設(shè)計(jì)微衛(wèi)星位點(diǎn)另一端的引物。 SSR標(biāo)記的優(yōu)勢(shì) ? 與其他分了標(biāo)記如 :如 RAPD ,RFLP等相比， SSR標(biāo)記具有以下的優(yōu)點(diǎn) : （ 1）在植物基因組中大量地、隨機(jī)地分布，具有廣泛的位點(diǎn)變異，揭示比 RAPD , RFLP更多的多態(tài)性 . ? （ 2） SSR標(biāo)記揭示的是單個(gè)位點(diǎn)上復(fù)等位基因的信息，為共顯性標(biāo)記，能夠區(qū)分純合型和雜合型，提供完整的遺傳信息 . ? （ 3）微衛(wèi)星序列多態(tài)性可
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