【文章內(nèi)容簡介】 0。SolventonSpectra溶劑對紫外 — 可見光譜的影響較為復(fù)雜。溶劑對紫外 可見吸收光譜的影響有兩個方面：1．有些溶劑特別是 極性溶劑可能會影響溶質(zhì)的最大吸收波長改變?nèi)軇┑臉O性，可能會使吸收帶的最大吸收波長發(fā)生變化。 原因是 溶劑和溶質(zhì)之間常形成氫鍵，或溶劑的偶極使溶質(zhì)的極性增強(qiáng)，引起 n*躍遷及 *躍遷的吸收帶遷移。 π ππ例 1.對亞異丙酮 (異丙叉丙酮 )紫外吸收光譜下表 (Table95)為溶劑對亞異丙酮 (異丙叉丙酮 )紫外吸收光譜的影響。正己烷 CHCl3CH3OHH2O*max/nm230238237243n*max/nm329315309305例 2.苯酰丙酮 (SeePowerPoint)非極性 → 極性， n→ π*躍遷：蘭移 ； ， ； →* 躍遷 ：紅移 ； ； →→→→λλλλ由上表可以看出， 當(dāng)溶劑的極性增大時，由 nπ*躍遷產(chǎn)生的吸收帶發(fā)生藍(lán)移，而由 ππ*躍遷產(chǎn)生的吸收帶發(fā)生紅移。 因此，在測定紫外、可見吸收光譜時，應(yīng)注明在何種溶劑中測定。 πεε πππ π異丙叉丙酮苯酰丙酮2．溶劑的極性可能會影響溶質(zhì)吸收帶的強(qiáng)度及形狀溶劑的極性不僅會影響溶質(zhì)的吸收波長，而且會影響溶質(zhì)吸收帶的強(qiáng)度及形狀。苯酚 B帶的精細(xì)結(jié)構(gòu)在庚烷中清晰可見，但在苯酚在乙醇中則完全消失，而呈現(xiàn)一個寬峰。庚烷乙醇改變?nèi)軇┑臉O性，會引起吸收帶形狀的變化。例如，當(dāng)溶劑的極性由非極性改變到極性時，精細(xì)結(jié)構(gòu)消失，吸收帶變向平滑。由于溶劑對電子光譜圖影響很大，因此，在吸收光譜圖上或數(shù)據(jù)表中 必須注明所用的溶劑 。與已知化合物紫外光譜作對照時也應(yīng)注明所用的溶劑是否相同。在進(jìn)行紫外光譜法分析時，必須正確選擇溶劑。選擇溶劑時 注意 下列幾點(diǎn)：① ．溶劑應(yīng)能很好地溶解被測試樣，溶劑對溶質(zhì)應(yīng)該是惰性的。即所成溶液應(yīng)具有良好的化學(xué)和光化學(xué)穩(wěn)定性。 ② ．在溶解度允許的范圍內(nèi)，盡量選擇極性較小的溶劑。③ ．溶劑在樣品的吸收光譜區(qū)應(yīng)無明顯吸收。第五節(jié) 紫外 可見分光光度計一、組成部件分光光度計按使用的波長范圍可分為：紫外分光光度計（200~400nm）、可見分光光度計（ 400~800nm）和紫外 可見分光光度計（ 200~1000nm，現(xiàn)在多用）。紫外 可見分光光度計的基本結(jié)構(gòu)是由五個部分組成：即光源、單色器、吸收池、檢測器和信號指示系統(tǒng)。1．光源對光源的基本要求是應(yīng)在儀器操作所需的光譜區(qū)域內(nèi)能夠發(fā)射連續(xù)輻射，有足夠的輻射強(qiáng)度和良好的穩(wěn)定性，而且輻射能量隨波長的變化應(yīng)盡可能小。分光光度計中常用的光源有熱輻射光源和氣體放電光源兩類。熱輻射光源 用于可見光區(qū)，如鎢絲燈和鹵鎢燈；鎢燈和碘鎢燈可使用的范圍在 340~2500nm。氣體放電光源 用于紫外光區(qū)，如氫燈和氘燈。在近紫外區(qū)測定時常用 氫燈和氘燈 。它們可在 160~375nm范圍內(nèi)產(chǎn)生連續(xù)光源。氘燈的燈管內(nèi)充有氫的同位素氘，它是紫外光區(qū)應(yīng)用最廣泛的一種光源，其光譜分布與氫燈類似，但光強(qiáng)度比相同功率的氫燈要大 3~5倍。2．單色器單色器是能從光源輻射的復(fù)合光中分出單色光的光學(xué)裝置，其主要功能：產(chǎn)生光譜純度高的波長且波長在紫外可見區(qū)域內(nèi)任意可調(diào)。單色器一般由入射狹縫、準(zhǔn)光器、色散元件、聚焦元件和出射狹縫等幾部分組成。其核心部分是色散元件，起分光的作用。單色器的性能直接影響入射光的單色性，從而也影響到測定的靈敏度、選擇性及校準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系等。能起分光作用的色散元件主要是棱鏡和光柵。3．吸收池吸收池用于盛放分析試樣，一般有石英和玻璃材料兩種。石英池適用于可見光區(qū)及紫外光區(qū)，玻璃吸收池只能用于可見光區(qū)。 為減少光的損失，吸收池的光學(xué)面必須完全垂直于光束方向 。在高精度的分析測定中（紫外區(qū)尤其重要），吸收池要挑選配對。因?yàn)槲粘夭牧系谋旧砦馓卣饕约拔粘氐墓獬涕L度的精度等對分析結(jié)果都有影響。4．檢測器 檢測器的功能是檢測信號、測量單色光透過溶液后光強(qiáng)度變化的一種裝置。常用的檢測器有光電池、光電管和光電倍增管等。硒光電池對光的敏感范圍為 300~800nm，其中又以 500~600nm最為靈敏。這種光電池的特點(diǎn)是能產(chǎn)生可直接推動微安表或檢流計的光電流，但由于容易出現(xiàn)疲勞效應(yīng)而只能用于低檔的分光光度計中。光電管在紫外 可見分光光度計上應(yīng)用較為廣泛。光電倍增管是檢測微弱光最常用的光電元件，它的靈敏度比一般的光電管要高 200倍，因此可使用較窄的單色器狹縫，從而對光譜的精細(xì)結(jié)構(gòu)有較好的分辨能力。5．信號指示系統(tǒng)它的作用是放大信號并以適當(dāng)方式指示或記錄下來。常用的信號指示裝置有直讀檢流計、電位調(diào)節(jié)指零裝置以及數(shù)字顯示或自動記錄裝置等。很多型號的分光光度計裝配有微處理機(jī)，一方面可對分光光度計進(jìn)行操作控制，另一方面可進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。二、紫外 可見分光光度計的類型紫外 可見分光光度計的類型很多，但可歸納為三種類型，即單光束分光光度計、雙光束分光光度計和雙波長分光光度計。1．單光束分光光度計 經(jīng)單色器分光后的一束平行光，輪流通過參比溶液和樣品溶液，以進(jìn)行吸光度的測定。這種簡易型分光光度計結(jié)構(gòu)簡單，操作方便，維修容易，適用于常規(guī)分析。2．雙光束分光光度計 經(jīng)單色器分光后經(jīng)反射鏡分解為強(qiáng)度相等的兩束光，一束通過參比池，一束通過樣品池。光度計能自動比較兩束光的強(qiáng)度，此比值即為試樣的透射比，經(jīng)對數(shù)變換將它轉(zhuǎn)換成吸光度并作為波長的函數(shù)記錄下來。雙光束分光光度計一般都能自動記錄吸收光譜曲線。 由于兩束光同時分別通過參比池和樣品池，還能自動消除光源強(qiáng)度變化所引起的誤差 。 3．雙波長分光光度計由同一光源發(fā)出的光被分成兩束 不同波長 （ l1和 l2）的單色光；利用切光器使兩束光以一定的頻率交替照射同一吸收池，然后經(jīng)過光電倍增管和電子控制系統(tǒng)，最后由顯示器顯示出兩個波長處的 吸光度差值 ΔA（ ΔA=Al1Al2）。對于多組分混合物、混濁試樣（如生物組織液）分析，以及存在背景干擾或共存組分吸收干擾的情況下，利用雙波長分光光度法，往往能提高方法的靈敏度和選擇性。利用雙波長分光光度計，能獲得導(dǎo)數(shù)光譜。 三、分光光度計的校正