【文章內(nèi)容簡介】 0。SolventonSpectra溶劑對紫外 — 可見光譜的影響較為復(fù)雜。溶劑對紫外 可見吸收光譜的影響有兩個方面：1．有些溶劑特別是 極性溶劑可能會影響溶質(zhì)的最大吸收波長改變?nèi)軇┑臉O性，可能會使吸收帶的最大吸收波長發(fā)生變化。 原因是 溶劑和溶質(zhì)之間常形成氫鍵，或溶劑的偶極使溶質(zhì)的極性增強，引起 n*躍遷及 *躍遷的吸收帶遷移。 π ππ例 1.對亞異丙酮 (異丙叉丙酮 )紫外吸收光譜下表 (Table95)為溶劑對亞異丙酮 (異丙叉丙酮 )紫外吸收光譜的影響。正己烷 CHCl3CH3OHH2O*max/nm230238237243n*max/nm329315309305例 2.苯酰丙酮 (SeePowerPoint)非極性 → 極性， n→ π*躍遷：蘭移 ； ， ； →* 躍遷 ：紅移 ； ； →→→→λλλλ由上表可以看出， 當(dāng)溶劑的極性增大時，由 nπ*躍遷產(chǎn)生的吸收帶發(fā)生藍(lán)移，而由 ππ*躍遷產(chǎn)生的吸收帶發(fā)生紅移。 因此，在測定紫外、可見吸收光譜時，應(yīng)注明在何種溶劑中測定。 πεε πππ π異丙叉丙酮苯酰丙酮2．溶劑的極性可能會影響溶質(zhì)吸收帶的強度及形狀溶劑的極性不僅會影響溶質(zhì)的吸收波長，而且會影響溶質(zhì)吸收帶的強度及形狀。苯酚 B帶的精細(xì)結(jié)構(gòu)在庚烷中清晰可見，但在苯酚在乙醇中則完全消失，而呈現(xiàn)一個寬峰。庚烷乙醇改變?nèi)軇┑臉O性，會引起吸收帶形狀的變化。例如，當(dāng)溶劑的極性由非極性改變到極性時，精細(xì)結(jié)構(gòu)消失，吸收帶變向平滑。由于溶劑對電子光譜圖影響很大，因此，在吸收光譜圖上或數(shù)據(jù)表中 必須注明所用的溶劑 。與已知化合物紫外光譜作對照時也應(yīng)注明所用的溶劑是否相同。在進(jìn)行紫外光譜法分析時，必須正確選擇溶劑。選擇溶劑時 注意 下列幾點：① ．溶劑應(yīng)能很好地溶解被測試樣，溶劑對溶質(zhì)應(yīng)該是惰性的。即所成溶液應(yīng)具有良好的化學(xué)和光化學(xué)穩(wěn)定性。 ② ．在溶解度允許的范圍內(nèi)，盡量選擇極性較小的溶劑。③ ．溶劑在樣品的吸收光譜區(qū)應(yīng)無明顯吸收。第五節(jié) 紫外 可見分光光度計一、組成部件分光光度計按使用的波長范圍可分為：紫外分光光度計（200~400nm）、可見分光光度計（ 400~800nm）和紫外 可見分光光度計（ 200~1000nm，現(xiàn)在多用）。紫外 可見分光光度計的基本結(jié)構(gòu)是由五個部分組成：即光源、單色器、吸收池、檢測器和信號指示系統(tǒng)。1．光源對光源的基本要求是應(yīng)在儀器操作所需的光譜區(qū)域內(nèi)能夠發(fā)射連續(xù)輻射，有足夠的輻射強度和良好的穩(wěn)定性，而且輻射能量隨波長的變化應(yīng)盡可能小。分光光度計中常用的光源有熱輻射光源和氣體放電光源兩類。熱輻射光源 用于可見光區(qū)，如鎢絲燈和鹵鎢燈；鎢燈和碘鎢燈可使用的范圍在 340~2500nm。氣體放電光源 用于紫外光區(qū)，如氫燈和氘燈。在近紫外區(qū)測定時常用 氫燈和氘燈 。它們可在 160~375nm范圍內(nèi)產(chǎn)生連續(xù)光源。氘燈的燈管內(nèi)充有氫的同位素氘，它是紫外光區(qū)應(yīng)用最廣泛的一種光源，其光譜分布與氫燈類似，但光強度比相同功率的氫燈要大 3~5倍。2．單色器單色器是能從光源輻射的復(fù)合光中分出單色光的光學(xué)裝置，其主要功能：產(chǎn)生光譜純度高的波長且波長在紫外可見區(qū)域內(nèi)任意可調(diào)。單色器一般由入射狹縫、準(zhǔn)光器、色散元件、聚焦元件和出射狹縫等幾部分組成。其核心部分是色散元件，起分光的作用。單色器的性能直接影響入射光的單色性，從而也影響到測定的靈敏度、選擇性及校準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系等。能起分光作用的色散元件主要是棱鏡和光柵。3．吸收池吸收池用于盛放分析試樣，一般有石英和玻璃材料兩種。石英池適用于可見光區(qū)及紫外光區(qū)，玻璃吸收池只能用于可見光區(qū)。 為減少光的損失，吸收池的光學(xué)面必須完全垂直于光束方向 。在高精度的分析測定中（紫外區(qū)尤其重要），吸收池要挑選配對。因為吸收池材料的本身吸光特征以及吸收池的光程長度的精度等對分析結(jié)果都有影響。4．檢測器 檢測器的功能是檢測信號、測量單色光透過溶液后光強度變化的一種裝置。常用的檢測器有光電池、光電管和光電倍增管等。硒光電池對光的敏感范圍為 300~800nm，其中又以 500~600nm最為靈敏。這種光電池的特點是能產(chǎn)生可直接推動微安表或檢流計的光電流，但由于容易出現(xiàn)疲勞效應(yīng)而只能用于低檔的分光光度計中。光電管在紫外 可見分光光度計上應(yīng)用較為廣泛。光電倍增管是檢測微弱光最常用的光電元件，它的靈敏度比一般的光電管要高 200倍，因此可使用較窄的單色器狹縫，從而對光譜的精細(xì)結(jié)構(gòu)有較好的分辨能力。5．信號指示系統(tǒng)它的作用是放大信號并以適當(dāng)方式指示或記錄下來。常用的信號指示裝置有直讀檢流計、電位調(diào)節(jié)指零裝置以及數(shù)字顯示或自動記錄裝置等。很多型號的分光光度計裝配有微處理機，一方面可對分光光度計進(jìn)行操作控制，另一方面可進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。二、紫外 可見分光光度計的類型紫外 可見分光光度計的類型很多，但可歸納為三種類型，即單光束分光光度計、雙光束分光光度計和雙波長分光光度計。1．單光束分光光度計 經(jīng)單色器分光后的一束平行光，輪流通過參比溶液和樣品溶液，以進(jìn)行吸光度的測定。這種簡易型分光光度計結(jié)構(gòu)簡單，操作方便，維修容易，適用于常規(guī)分析。2．雙光束分光光度計 經(jīng)單色器分光后經(jīng)反射鏡分解為強度相等的兩束光，一束通過參比池，一束通過樣品池。光度計能自動比較兩束光的強度，此比值即為試樣的透射比，經(jīng)對數(shù)變換將它轉(zhuǎn)換成吸光度并作為波長的函數(shù)記錄下來。雙光束分光光度計一般都能自動記錄吸收光譜曲線。 由于兩束光同時分別通過參比池和樣品池，還能自動消除光源強度變化所引起的誤差 。 3．雙波長分光光度計由同一光源發(fā)出的光被分成兩束 不同波長 （ l1和 l2）的單色光；利用切光器使兩束光以一定的頻率交替照射同一吸收池，然后經(jīng)過光電倍增管和電子控制系統(tǒng)，最后由顯示器顯示出兩個波長處的 吸光度差值 ΔA（ ΔA=Al1Al2）。對于多組分混合物、混濁試樣（如生物組織液）分析，以及存在背景干擾或共存組分吸收干擾的情況下，利用雙波長分光光度法，往往能提高方法的靈敏度和選擇性。利用雙波長分光光度計，能獲得導(dǎo)數(shù)光譜。 三、分光光度計的校正