【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 這種由雜交瘤細(xì)胞的單一克隆所產(chǎn)生的抗體即是單克隆抗體。二、 體外診斷試劑的分類： 臨床血液、體液檢驗(yàn)類試劑： 臨床化學(xué)類試劑 臨床免疫學(xué)試劑 微生物學(xué)試劑 其他試劑：包括細(xì)胞組織學(xué)、遺傳性疾病、人類基因檢測(cè)、腫瘤標(biāo)記物、免疫組化與變態(tài)反應(yīng)原類及生物芯片等備注：*（盒）*（HBsAg）試劑（盒）*（HCV）抗體試劑（盒）*（1＋2型）抗體試劑（盒） 人類免疫缺陷病毒抗原/抗體診斷試劑（盒）*（盒）放免試劑(盒)：（參見意見稿）以上五個(gè)品種和放免試劑，預(yù)期用途為血源篩查使用，按藥品受理和審評(píng)。三、 常見的臨床檢測(cè)方法：常見臨床檢測(cè)方法包括化學(xué)發(fā)光和熒光免疫、放射免疫、電化學(xué)、電泳、色譜和質(zhì)譜、血?dú)夥治觥⒘魇椒治?、染色技術(shù)、以及聚合酶鏈免疫（PCR）、基因分析等。以下主要介紹現(xiàn)在臨床常用的生化、免疫試劑使用的幾種檢測(cè)方法。（一）光譜分析技術(shù)：是基于物質(zhì)與輻射能作用時(shí)，測(cè)量由物質(zhì)內(nèi)部發(fā)生量子化的能級(jí)之間的躍遷而產(chǎn)生的發(fā)射、吸收或散射輻射的波長(zhǎng)和強(qiáng)度進(jìn)行分析的方法。其按作用對(duì)象不同可分為原子光譜法（測(cè)量微量元素）和分子光譜法（分光光度計(jì)），按獲得方式不同分為吸收光譜法和發(fā)射光譜法。吸收光譜技術(shù)：吸光光度法是根據(jù)溶液中物質(zhì)對(duì)光選擇性吸收而進(jìn)行分析的方法。實(shí)踐證明，無論物質(zhì)有無顏色，當(dāng)一定波長(zhǎng)的光通過該物質(zhì)的溶液時(shí)，根據(jù)物質(zhì)對(duì)光的吸收程度（吸光度），求出該物質(zhì)的含量，這種方法稱為吸光光度法。吸光光度法可分為比色法和分光光度法兩大類。比色法又可分為目視比色法和光電比色法。分光光度法與光電比色法的原理類似，都是通過光電池或光電管測(cè)量溶液透光度的強(qiáng)度進(jìn)行分析的方法。兩者主要的區(qū)別在于獲得單色光的方式不同。光電比色法使用濾光片所獲得的是一般光譜帶，分光光度法使用棱鏡或光柵得到波長(zhǎng)范圍較窄的單色光，根據(jù)光源的不同，分光光度法又可分為可見光分光光度法、紫外光分光光度法和紅外光分光光度法三種。①比色法是以生成有色化合物的顯色反應(yīng)為基礎(chǔ)，通過比較或測(cè)量有色物質(zhì)溶液顏色深度來確定待測(cè)組分含量的方法。選擇適當(dāng)?shù)娘@色反應(yīng)和控制好適宜的反應(yīng)條件，是比色分析的關(guān)鍵。常用的比色法有兩種：目視比色法和光電比色法。當(dāng)利用比色法測(cè)定溶液中某種化學(xué)成分時(shí)，通常需加入某種顯色劑，使其產(chǎn)生有色化合物，而且其顏色的深淺與待測(cè)化學(xué)成分的含量成正比，據(jù)此測(cè)定待測(cè)物的濃度。顯色試劑有：A、 無機(jī)顯色劑：KSCN（測(cè)Fe、Mo、W等）、鉬酸胺（測(cè)P、As等）、過氧化氫：測(cè)Ti、V等B、 有機(jī)顯色劑：螯合劑（磺基水楊酸、二苯硫腙、結(jié)晶紫等）、絡(luò)合物、雜多酸、有色溶液對(duì)光線有選擇性的吸收作用，不同物質(zhì)由于其分子結(jié)構(gòu)不同，對(duì)不同波長(zhǎng)線的吸收能力也不同，因此，每種物質(zhì)都具有其特異的吸收光譜。有些無色溶液，光雖對(duì)可見光無吸收作光光度技術(shù)吸收用，但所含物質(zhì)可以吸收特定波長(zhǎng)的紫外線或紅外線。②分光光度法紫外可見分光光度技術(shù)（UVVis）是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜及光的吸收定律（郎伯—比耳定律），對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性、定量分析的一種方法。其具體是通常是把溶液的厚度固定不變，通過光密度值表現(xiàn)溶質(zhì)的濃度。若用待測(cè)物的純品配制不同的濃度，測(cè)出其光密度，繪出濃度對(duì)光密度的工作曲線，便可以此查得未知樣品的濃度，還可依據(jù)下列公式對(duì)未知樣品的濃度通過計(jì)算得出。紫外可見分光光度計(jì)：可見光區(qū)：400750nm；紫外光區(qū)：200400nm；遠(yuǎn)紫外區(qū)：10200nm（真空紫外區(qū)）。光源一般使用在可見光區(qū)用鎢燈，其輻射波長(zhǎng)為3202500nm；紫外區(qū)一般用氫、氘燈作為光源，而自動(dòng)生化儀多用鹵鎢燈。應(yīng)用情況：臨床上可用無機(jī)化學(xué)、有機(jī)化學(xué)和生物化學(xué)（酶法）反應(yīng)在紫外或可見光區(qū)顯色而測(cè)定（幾乎所有的無機(jī)離子和有機(jī)物都可直接或間接用可見光及紫外光分光光度法進(jìn)行定量測(cè)定和純度分析 ），具體可用于：A、 無機(jī)化學(xué)反應(yīng)：如氯、鈣、鎂、磷、鐵離子的檢測(cè)；B、 有機(jī)化學(xué)反應(yīng)：血清總蛋白、血清清蛋白、葡萄糖、膽固醇、肌酐等的檢測(cè)；C、 生物化學(xué)反應(yīng)：葡萄糖、膽固醇、尿素氮、總膽汗酸等的酶法檢測(cè)。使用分光分度計(jì)的常用檢測(cè)方法：1. 單組分定量方法；2. 多組分定量方法；3. 雙波長(zhǎng)法（等吸收點(diǎn)法）發(fā)射光譜技術(shù):是指通過測(cè)量物質(zhì)的發(fā)射光譜的波長(zhǎng)和強(qiáng)度進(jìn)行定性和定量分析的方法。 熒光分析法：某些物質(zhì)被紫外光照射后，物質(zhì)分子吸收了輻射而成為激發(fā)態(tài)分子，若在返回到基態(tài)時(shí)伴隨著光子的輻射，則發(fā)射出比入射光波長(zhǎng)更長(zhǎng)的熒光，測(cè)量熒光的強(qiáng)度進(jìn)行分析的方法稱為熒光分析法。常用于無機(jī)物和有機(jī)物（糖類、胺類、DNA、酶與維生素等）的元素測(cè)定。常用的儀器有：化學(xué)發(fā)光免疫分析儀ECLTAIIA、化學(xué)發(fā)光免疫分析儀GloRunner等常見熒光試劑：四氯熒光素（測(cè)定Ag）、桑色素（AL）、熒光素+AgNO3（CL）、溴化乙啶（核酸）、乙二胺（腎上腺素）、曙紅y（蛋白質(zhì)）等。散射光譜技術(shù)：光散射是電磁波經(jīng)過一個(gè)樣品時(shí)作用于微粒的結(jié)果。其分析法主要測(cè)定光線通過溶液混懸顆粒后的光吸收或光散射程度的一類定量方法。主要用于免疫檢測(cè)系統(tǒng)中，常稱為免疫濁度法。其測(cè)定方式可分為：透射濁度法、散射光濁度法（終點(diǎn)、散射）、粒子強(qiáng)化免疫濁度測(cè)定法（乳膠法或稱凝集反應(yīng)）。①應(yīng)用：主要用于各種蛋白質(zhì)、載脂蛋白、半抗原及微生物等的檢測(cè)。②分類及原理：散射光譜技術(shù)分為：散射光濁度法、透射濁度法；（按形成復(fù)合物的速度測(cè)定可發(fā)為終點(diǎn)濁度法、速率濁度法）A、散射光濁度法（有終點(diǎn)法與速率法之分）：在596角的方向上測(cè)量散射光強(qiáng)度和被測(cè)溶液中微粒關(guān)系的方法。當(dāng)復(fù)合物較小時(shí)“（3X10nm）時(shí)，透射與散射相當(dāng)。當(dāng)復(fù)合物大于入射光波的1/20,形成不對(duì)稱的前向散射，此時(shí)散射光的量代表復(fù)合物的量。速率散射濁度法，是在某單位時(shí)間內(nèi)形成大于3X10nm以上的復(fù)合物的量。當(dāng)儀器測(cè)定到某一時(shí)間內(nèi)形成的速度下降時(shí)，即出現(xiàn)速率峰，忘該峰值的高低，即代表抗原的量。B、透射濁度法：在0度亦即在直射角度上測(cè)定透射光強(qiáng)度和被測(cè)溶液中微粒濃度關(guān)系的方法。（大多為終點(diǎn)法）測(cè)量方式是測(cè)定因反射、散射或吸收后的衰減，讀數(shù)以吸收光單位（A）表示，這種A值反映了透射光和入射光的比率。一般在測(cè)定過程中形成復(fù)合物慢的反應(yīng)可加入促聚劑，如4%聚乙二醇。比濁一般復(fù)合物大于19s方可比濁。測(cè)定的復(fù)合物一般為35100nm間。透射濁度法因結(jié)果準(zhǔn)確，所用儀器多為全自動(dòng)，且能與其他光度（如酶測(cè)定）測(cè)定結(jié)合。其在許多自動(dòng)化儀器上皆有測(cè)試程序，大多為終點(diǎn)法。③儀器和試劑（包括質(zhì)控品、校準(zhǔn)品）透射濁度分析儀：A、分光光度儀 B、自動(dòng)生化分析儀 散射濁度分析儀：A、離心式濁度分析儀 B、氮氦激光分析儀 速率法濁度分析儀：④產(chǎn)品過程及控制要求：A、 因是用于散射光比濁的試劑，應(yīng)在樣品制備過程中，防止能產(chǎn)生散射光的物質(zhì)，如灰塵等。B、 內(nèi)部質(zhì)控時(shí)需注意，應(yīng)用合適的校正材料制備劑量反應(yīng)曲線。其曲線形狀取決于抗血清和促聚劑的濃度選擇，也與所用免疫濁度法類型、校正方法及校正材料的質(zhì)量有關(guān)。制備和選取合適的質(zhì)控材料，進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控是必要的。C、 濁度的中心問題是抗體的質(zhì)量，關(guān)注抗體的原料采購(gòu)及控制情況。（二）干化學(xué)分析法：是指建立在某些特殊固相支持物上的檢測(cè)分析技術(shù)，通常將測(cè)定某些項(xiàng)目所需的全部或部分試劑固定在具有一定結(jié)構(gòu)的載體上，通過滴加液態(tài)樣品溶解載體上的試劑，并與樣品中的待測(cè)成分發(fā)生反應(yīng)，在支持物的局部區(qū)域產(chǎn)生信號(hào)變化，再通過檢測(cè)以獲取等測(cè)物的濃度。干化學(xué)分析方法具有速度快、檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確度較高的特點(diǎn)，并可采用儀器進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)構(gòu)可分為：雙層膜法、多層膜法（如膠體金、尿試紙等）等。 應(yīng)用：尿試紙、血糖、生化、免疫（如早早孕試紙）檢測(cè)項(xiàng)目等； 檢測(cè)方法：①免疫膠體金分析技術(shù)：A、 應(yīng)用：尿糖試紙、血糖、生化檢測(cè)項(xiàng)目：B、 組成：多為五層膜；C、 原理：是將抗原或抗體先固定于固體支持物如硝酸纖維素上，在與樣品（尿液或血液）中的特異性的抗體或抗原結(jié)合后，再與膠體金標(biāo)記的第二抗體結(jié)合，在固定有抗原或抗體的特定區(qū)域顯色，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)被測(cè)抗體或抗原進(jìn)行特異性檢測(cè)，屬于定性或半定量分析。D、 分類：常有免疫層析和斑點(diǎn)免疫金滲濾分析法干化學(xué)分析儀：干式尿液分析儀、干式血糖分析儀、干式血氨分析儀（日本IREADER?）、自動(dòng)干式電解質(zhì)分析儀（東亞SYSMEX FDC800、上海瑞麥HDP99新型干式電解質(zhì)分析儀）、干式生化分析儀（強(qiáng)生、京都、羅氏公司：京都：SPOTCHEM?SP4430全自動(dòng)干式急診生化分析儀，其檢測(cè)項(xiàng)目達(dá)22