【文章內容簡介】 盡冷空氣則達不到滅菌效果，雖然壓力高但達不到相應的溫度，因此滅菌效果不佳。其次，應注意上升至要求壓力后，要保持一定時間，然后斷電或撤下熱源 ,待溫度降至零時再放汽開鍋 ,如果不這樣會造成滅菌不徹底或者容器內液體噴出。 ? 蒸鍋滅菌法： 食用菌生產(chǎn)中常用大鍋蒸料滅菌，一般采用 100仞大鍋，四周圍用磚水泥砌一圓或方形的鍋圍子，高 1～ ，在大鍋內放一簾子，待鍋內水沸騰后，在簾上見汽撒料，當料全部撒完后，再蓋上蓋或用塑料蓋上并扎緊，蒸 2個小時就可以達到滅菌的目的。 ? 紫外線滅菌 紫外線中波長為 2022～ 3000197。具有殺菌作用。一般紫外線燈為 2537197。，其殺菌力強而穩(wěn)定，由于細胞中 DNA吸收了這一波長，輕則發(fā)生變異，重則造成死亡。因此，調節(jié)紫外線照射的距離和時間，可以誘變育種，也可以殺菌。食用菌生產(chǎn)當中，多在無菌室、無菌箱中安裝紫外線燈，利用紫外線進行消毒 。 二、化學滅菌 ? 酚類 ? 常用的石炭酸，又名苯酚。石炭酸能溶于水，有特殊氣味，濃石炭酸能使皮膚變白、手指麻痹，并可損壞皮膚與粘膜，因此，它對人畜有毒。通常使用 3％～ 5％的水溶液作為噴霧劑處理無菌室（箱），或對器械浸泡消毒，它對金屬無腐蝕作用，能殺死細菌芽孢而對真菌孢子殺傷作用不大。有氯化鈉存在時酚的藥效增加，有乙醇存在時則藥效大減。石炭酸殺菌原理：它能使細胞膜損害，使蛋白質變性或沉淀。因此，它殺菌力較強，常用作比較殺菌力的標準。 ? 來蘇爾系用肥皂乳化的甲酚，它的殺菌效力比苯酚大 4倍，常用 3％～ 5％的溶液來消毒皮膚、桌面及用具。 ? 甲醛 甲醛是氣體，易溶于水，通常使用 37％～40％的甲醛溶液（即福爾馬林），它的殺菌力比石炭酸強。常用甲醛來消毒無菌室或箱等，每立方米空間用 10～ 15毫升甲醛熏蒸就可達到消毒的目的。具體做法是在坩堝（或培養(yǎng)皿）加入甲醛溶液，然后用酒精燈熏蒸或在甲醛內加入高猛酸鉀（約 5克 /立方米），任其反應揮發(fā)，關上門窗悶一夜，就能起到消毒滅菌作用。甲醛的殺菌機理是：甲醛和菌體蛋白（包括酶）的氨基結合，使蛋白質凝固變性。 ? 乙醇 一般用 70％～ 75％濃度，其殺菌效果最好。高濃度乙醇殺菌能力反而下降是因為高濃度乙醇遇到微生物細胞時，很快使細胞表面脫水，形成一層保護膜，乙醇不能滲透到細胞內，也不能使蛋白質凝固，所以高濃度乙醇反而殺菌效果差。如果在乙醇中加入稀酸或稀堿則殺菌效力增加。乙醇能減低酚、甲醛等的殺菌效力，但能增強碘及升汞的殺菌效力。一般乙醇用于皮膚及器械消毒。菌種分離時，常用乙醇作為表面消毒劑。 ? 新潔爾滅 它是季胺類的表面活性劑。一般可將原液稀釋 1倍，對器械或手、皮膚及不能遇熱的器具進行消毒。 ? 石灰 它分為生石灰（ CaO）與熟石灰 〔 Ca(OH)2〕 兩種。起殺菌作用的是熟石灰中的氫氧離子，它能水解蛋白質和核酸，使微生物體的酶系和結構受到損害，并能分解菌體中的糖類。因此，堿能殺菌。生石灰遇水變成熟石灰。如果熟石灰常時間暴露在空氣中，它吸收空氣中的二氧化碳而變成無效的碳酸鈣。一般 1％～ 3％的石灰水溶液就可起到良好的殺菌作用。 ? 內吸殺菌劑 如：苯來特、多菌靈、涕必靈、麥穗寧、甲基托布津等等。它們在離體條件下具有高度活性，對細菌沒有活性，主要對霉菌有抑制作用。殺菌機理主要是干擾核酸合成及細胞分裂，從而達到殺菌目的。一般用量為 ％～ ％，對人畜無害。一般是將其添加到培養(yǎng)料中，由于食用菌種類不同，選擇藥物也應有不同的種類與濃度。 三、無菌操作及要點 ? 在嚴格的消毒滅菌條件下進行的菌種移植操作稱為無菌操作。雖然各級菌種的接種有所差異，但無菌操作的基本要點是相同的： ? （ 1）接種空間一定要徹底地消毒滅菌。 ? （ 2）菌種所暴露或通過的空間必須是無菌區(qū)。 ? （ 3）菌種管口、瓶口的部分必須用酒精燈火焰封閉。 ? （ 4）各種接種工具和菌種接觸前都應該經(jīng)火焰灼燒滅菌，冷卻后再接種，以免燙死或燙傷菌種。 ? （ 5）棉塞塞入管口或瓶口的部分，拔出后不要與未經(jīng)滅菌的物體接觸。 ? （ 6）每次接種的時間不宜過長，以免空氣中雜菌的基數(shù)不斷地積累，影響轉管、接種效果。 ? （ 7）操作人員最好換消毒的工作服，戴口罩，雙手要用 70%75%的酒精消毒。 ? （ 8）不帶口罩操作時要盡量少說話為宜。 ? （ 9）整個操作過程動作必須迅速無誤，時時刻刻樹立無菌觀念。 第四節(jié) 菌種分離 ? 通常采用的菌種分離方法有：孢子分離法、組織分離法和基內菌絲分離法三種。 ? 一、孢子分離法 孢子是食用菌的基本繁殖單位。孢子分離法是利用成熟子實體的有性孢子（擔孢子或子囊孢子），能自動從子實層中彈射出來的特性，在無菌條件下和適宜的培養(yǎng)基上，使孢子萌發(fā)成菌絲，獲得純種的一種方法。有性孢子具有雙親的遺傳性，生活力強、數(shù)量多的特點，因此采用孢子分離法，從中選擇優(yōu)良菌株的機會較多，所得的菌種菌齡小，生活力旺盛。 二、組織分離法 ? 組織分離法是利用子實體組織來分離獲得純種的方法。食用菌子實體組織，實際上就是菌絲體的扭結物，具有很強的再生和保持種性能力，切取一小塊組織移植到培養(yǎng)基上便能進入營養(yǎng)生長階段，從而獲得純菌絲體。采用組織分離法培養(yǎng)，操作簡便，取材廣泛，無論是幼子實體或成熟子實體，只要新鮮，即使取其菌柄也能分離培養(yǎng)成菌種。也是野外采種常用的方法之一。只是對于子實體小、薄及膠質種類不太適用。根據(jù)分離材料的不同，大體可分為以下幾種： ? 傘菌類的組織分離 ? 從優(yōu)良品系中選取優(yōu)良的個體作種菇，以單菇、朵大、蓋厚、無病蟲危害的菌蕾作為分離材料。把幼菇根部帶泥部分切除，置接種箱內。用無菌水沖洗幾次，并用無菌紙吸干，然后以 75％乙醇進行表面消毒，用消過毒的解剖刀在菌柄或菌蓋中部縱切一刀，掰開菌傘，挑取菌蓋與菌柄交界處的一小塊組織，接到 PDA斜面培養(yǎng)基上，置 25℃ 左右溫箱內培養(yǎng) 3— 5天，組織塊上即可長出白色絨毛狀菌絲，說明分離成功。 ? 對一些個體細小的傘菌子實體，如金針菇，可采用子實層作組織分離材料。其方法是：選尚未開傘的菇蕾，在無菌箱內以 ％的升汞液浸 1— 2分鐘，再用無菌水沖洗、揩干，或用 75％酒精棉球擦菌蓋 2次，進行表面消毒。然后開菌蓋或用解剖刀剖開菇蕾，露出白色菌褶，用接種針挑取 1— 2片菌褶，接種到斜面培養(yǎng)基上，在 23℃ 左右下培養(yǎng) 1周，菌絲就可長滿斜面。 ? 膠質菌類的組織分離 黑木耳、毛木耳等膠質菌，因子實體組織層較薄，質地較韌，且菌絲數(shù)量極少，故進行組織分離的難度較大。分離時無菌操作剖取尚未展開的耳片膠質團內部的組織塊，直接置于 PDA斜面上進行培養(yǎng)。也可將耳片用 75％酒精浸泡 1分鐘，再用無菌水漂洗 3次，并用無菌紙吸干后，剪成7 4mm小塊，置于加 25％乳酸 3滴的 PDA培養(yǎng)基平板上，每皿 5塊，適溫培養(yǎng)。 ? 菌核組織分離法 茯苓、豬苓、雷丸等的子實體不易采集，而它們的營養(yǎng)貯藏結構 —— 菌核，易獲得。利用菌核分離，同樣能得到該菌的菌種。分離時先把菌核表面洗凈，吸干帶入無菌箱內，以 75％乙醇進行表面消毒后，用無菌解剖刀把菌核切開，取中間組織一小塊（黃豆大?。?，移入 PDA斜面上，于 25℃下培養(yǎng)。 ? 菌索組織分離法 蜜環(huán)菌、假蜜環(huán)菌、安洛小皮傘等在培養(yǎng)基內產(chǎn)生菌索。分離時，將菌索洗凈后用紗布吸干水分，置接種箱中，用 75％乙醇進行表面消毒，再用無菌解剖刀切斷，抽出白色的菌髓，用尖頭鑷子夾取一小段，接入試管 PDA斜面上，于 23～ 25℃ 下培養(yǎng)。為防止細菌污染，可在培養(yǎng)基里加入抑菌的青霉素或其它抗生素，使用濃度為。 三、基內菌